Диссертация (1139554), страница 48
Текст из файла (страница 48)
Сравнительная оценка эффективности иммунотерапии у больных меланомой выявила преимущества использования ЦИК-клеток для АИТ по сравнению с ЛАК-клетками. В этом случаечаще наблюдали появление реактивно измененных лимфатических узлов(35,7%), ЧО и стабилизацию процесса. Также значительно выше была выживаемость пациентов.252На момент написания диссертации 30 больным меланомой (58,8%) АИТпроводилась в самостоятельном режиме продолжительностью более года.Данные результаты говорят об возможном увеличении продолжительностижизни больных после постоянной и длительной АИТ.Выявлена взаимосвязь между местной провоспалительной реакцией навведение биопродукта и продолжительностью безрецидивного периода как убольных с КРР так и меланомой.
Данный факт свидетельствует в пользу однойиз предиктивных характеристик для отбора пациентов в исследование дляАИТ аутологиными лимфоцитами, остальным больным можно предложитьиммунотропные препараты или АИТ аллогенными лимфоцитами доноров.При оценки влияния АИТ на показатели иммунитета было показано, что убольных с ОЖКТ в среднем по группе после первого курса АИТ наблюдаетсянормализация содержания NK-клеток и снижение их активированной субпопуляции в кровяном русле, а также увеличение NKT-клеток и активированных Тклеток. После первого курса АИТ у больных меланомой отмечено значимое увеличение экспрессии HLA-DR на всех лимфоцитах и на Т-клетках (р<0,05). Придлительном проведении АИТ больным с ОЖКТ выявлены значительные изменения в численности NKT- и NK-клеток и экспрессии CD25, NKG2D, CD38, CD95на всех лимфоцитах, Т- и NK-клетках. У больных меланомой дополнительнобыли выявлены изменения в количестве В-лимфоцитов и в экспрессии HLA-DRи CD69 на лимфоцитах и NK-клетках.Таким образом, динамическое наблюдение и мониторинг изменения фенотипа лимфоцитов при проведении АИТ у онкологических больных выявилинеобходимость в оценке количества эффекторных клеток NKT-, NKлимфоцитов и субпопуляции Treg.
Резкие изменения в численности данныхсубпопуляций как в большую, так и в меньшую сторону зафиксированы у больных с неблагоприятным прогнозом, уменьшение количества Treg указывает наположительный ответ на лечение. В дополнении к этому существенную роль наэтапах терапии играет уровень экспрессии маркеров активации лимфоцитов та-253ких как CD25, CD38, CD69, HLA-DR, NKG2D и CD95. Разнонаправленный характер изменения показателей прослежен у больных со СБ, отсутствие эффектаот АИТ было отмечено у пациентов с планомерным увеличением экспрессиибольшинства маркеров активации лимфоцитов или отсутствие изменений в экспрессии. Поэтому персонифицированная оценка показателей иммунитета и изучение закономерностей изменения субпопуляционного состава лимфоцитов,маркеров активации и цитокинов у каждого больного позволит дополнить нашепредставление о роли иммунной системы в канцерогенезе.При выявлении взаимосвязи между уровнем лигандов NKG2D и исходомзаболевания было показано, что у больных с максимальной концентрациейsMICA чаще наблюдалась ПБ, не смотря на иммунотерапевтические воздействия.
У больных с ПБ уровень sMICA был исходно значимо выше, а также неизменялся или увеличивался после АИТ. Отмечено, что у пациентов с высокимуровнем sMICA снижена экспрессия NKG2D и увеличено число Treg, что указывает на преобладание иммуносупрессии у данных больных и может случить критерием их исключения из исследования. Иммуностимулирующее влияние АИТбыло выявлено только у пациентов с исходно низким и средним уровнем sMICA.Логично предположить, что изменение содержания sMICA может являтьсяпредиктивным показателем и в комплексе с другими методами диагностики дополнить спектр имеющихся маркеров в мониторинге течения онкологическогозаболевания и оценке изменений в противоопухолевом звене иммунитета.
Выявление активированных лимфоцитов в крови у больных после проведения АИТаутологичными АЦЛ доказывает системный эффект терапии и позволяют рекомендовать её в качестве персонифицированного лечения в протоколах комплексного лечения онкологических больных или в самостоятельном режиме.Результаты настоящего исследования и изучение некоторыми группамиученых экспрессии и иммуносупрессивных свойств растворимых форм молекул MICA позволяют обосновать полезные свойства поверхностных молекулдля ИТ с использованием мАТ [5, 62]. Можно предположить, что лигандыNKG2D послужат хорошими мишенями для таргетной ИТ.
Если к антигенным254детерминантам этих молекул будут получены мАТ анти-MICA они могут бытьиспользованы как потенциально новые мишени для уточняющей диагностикии возможной ИТ онкологических заболеваний или РИТ при дополнительноммечении мАТ радионуклидом. Также блокировка растворимых форм молекулMICA может уменьшить выраженность иммуносупрессии у онкологическихбольных за счет снятия эффекта ингибирования активирующего рецептораNKG2D его сывороточными лигандами.Результаты настоящего исследования могут послужить еще одним научным обоснованием для разработки рекомендаций по использованию АИТ вмедицинской практике и включения её в комплексные подходы лечения больных со злокачественными новообразованиями, а также будут способствоватьразвитию новых инновационных подходов в ядерной медицине при терапиионкологических больных за счёт разработки эффективных таргетных РФП длярадиоиммунотерапии MICA позитивных опухолей.Таким образом, в результате работы изучено состояние иммунитета онкологических больных с оценкой уровня лигандов рецептора NKG2D в сыворотке крови и разработан новый способ адоптивной иммунотерапии с использованием активированных цитотоксических лимфоцитов.255ВЫВОДЫ1.Уровень стресс-индуцированных молекул MICA (лигандов рецептораNKG2D) в сыворотке крови онкологических больных превышает контрольные значения в 3-8 раз при раке тела или шейки матки, предстательной железы, меланоме, раке языка или гортани, молочной железы, толстой кишки или желудка (р<0,002).2.Дисбаланс в субпопуляционном составе лимфоцитов у большинства больных колоректальным раком и меланомой проявляется в повышении относительного и абсолютного содержания Тreg и экспрессии CD25; повышении содержания NK-клеток, за счет активированных NKG2D+ и CD69+NKклеток у больных колоректальным раком и повышении количества HLADR+ лимфоцитов и CD38+ Т-лимфоцитов у больных меланомой кожи.3.В модельной системе показано, что рекомбинантный человеческий белокMICA может взаимодействовать in vitro с рецептором NKG2D на NKклетках и снижать их цитотоксическую активность, что предполагает участие сывороточных молекул MICA в супрессии противоопухолевого иммунного ответа.4.При длительном культивировании in vitro мононуклеарных клеток, вприсутствии комбинации цитокинов IL-2 и IL-15 в низких концентрациях, формируется пул цитотоксических лимфоцитов, который характеризуется увеличенной экспрессией активирующих рецепторов, повышенной пролиферативной и цитотоксической активностью и сохранением высокой жизнеспособности.5.Персонифицированная адоптивная иммунотерапия с использованием активированных in vitro цитотоксических лимфоцитов является безопасной, не вызывает серьезных побочных эффектов и позволяет улучшитькачество жизни онкологических больных за счет значимого сниженияпоказателей состояния больных, оцененных по шкале ECOG.2566.Системный эффект адоптивной иммунотерапии на организм онкологического больного проявляется в изменении доли NK-клеток, минорных популяций (NKT-, Treg) и экспрессии маркеров активации лимфоцитов, атакже концентрации цитокинов (IFN-α, IL-10) и сывороточного уровнямолекул MICA.7.Увеличение концентрации молекул MICA в сыворотке крови онкологических больных на фоне адоптивной иммунотерапии может свидетельствовать о прогрессии заболевания, а снижение данного параметра – остабилизации болезни или об объективном ответе на терапию.Практические рекомендации1.
Для выявления иммуносупрессии и улучшения иммунодиагностики рекомендуется определять уровень растворимых форм молекул MICA в сыворотке крови онкологических больных. Перед началом и после каждогокурса АИТ целесообразно проводить мониторинг молекул MICA. Изменение концентрации сывороточных лигандов NKG2D может быть использовано в качестве прогностического фактора, что позволит проследить эффективность проводимой терапии.2. При оценке иммунофенотипа лимфоцитов периферической крови у онкологических больных кроме основных популяций В-, Т- и NK-клетокцелесообразно дополнительно определять NKT-клетки, Treg, экспрессию Fas (CD95) и маркеров активации лимфоцитов CD25, CD38 и CD69.3. Для активации МНК, увеличения пролиферативной и функциональнойактивности NK-клеток человека рекомендуется использовать комбинацию цитокинов IL-2 (250 МЕ/мл) и IL-15 (50 нг/мл).4. Разработанный метод длительного культивирования и активации цитотоксических лимфоцитов можно применять в клинической практике для АИТонкологических больных, а также для изучения биологии и эффекторныхфункций NK-клеток в фундаментальных научных исследованиях.2575.
Целесообразно включать АИТ активированными цитотоксическимилимфоцитами в качестве безопасного метода персонифицированной иммунотерапии в схемы комплексного лечения онкологических больных ссолидными опухолями. Достоинством метода является возможность проведения АИТ в амбулаторных условиях.6. Адоптивную ИТ рекомендуется проводить онкологическим больным укого ожидаемая продолжительность жизни не менее 3-х месяцев. КурсыАИТ следует повторять каждые 2-3 месяца в течение длительного периода времени параллельно с основным лечением или в самостоятельномрежиме.7. Для уменьшения побочных эффектов и снижения миелотоксичности химиотерапии целесообразно проводить АИТ в адъювантном режиме.
В данном случае забор периферической крови для активации лимфоцитов рекомендуется производить непосредственно перед очередным курсом ХТ.8. Для оценки клинической эффективности проводимой АИТ и иммунологической реактивности организма больного кроме критериев irRC необходимо оценивать степень местной провоспалительной кожной реакциина введение биопродукта, концентрацию лигандов рецептора NKG2D,количество популяций Treg, NKT-, T-лимфоцитов и NK-клеток с маркерами активации (CD25, HLA-DR, CD38, CD69, NKG2D и CD95) и цитокиновый профиль (IFN-α, TNF-α, IL-10).9.
Рекомбинантный человеческий белок MICA можно использовать дляизучения влияния растворимых форм молекул на NK-клетки человека, атакже для получения анти-MICA антител и разработки методов таргетной и радиоиммунотерапии злокачественных опухолей.258Список цитируемой литературы1.Абакушина Е.В. Метод проточной цитометрии для оценки NK-клеток и их активности. // Клиническая лабораторная диагностика.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
