Диссертация (1139516), страница 32

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 32)

По оси абсцисс – исследуемые группы, по оси ординат – частотавстречаемости генотипа, * - частота генотипа достоверно отличается от показателя вгруппе сравнения (p0,05)Рис. 38 Распределение генотипов маркера G(-20)A гена DEFB1 у родильниц(А) и новорожденных (Б) в группах с ВУП, с РНП и в группе сравненияПолученные результаты указывают на то, что генетический маркер G(-20)Aгена DEFB1 ассоциирован с риском развития ВУП у новорожденного. Это можетбыть связано с низкими показателями экспрессии этого гена и со сниженнойзащитой организма родильницы и как следствие инфицирование плода. Ранеедругими учеными было показано, что преждевременные роды связаны сосниженным уровнем экспрессии гена -дефенсина-1.

Исследуемые полиморфныемаркеры не приводят к изменению структуры белка, однако, существуют данныео том, что SNPs могут быть связаны с уровнем экспрессии гена дефенсина 24.2218.3. Изучение ассоциации полиморфных маркеров в генах IL-10, IL-17 иTNFα у родильниц и новорожденных с НПВ данном исследовании было выбрано три цитокина: IL-10, IL-17 и TNFa,генетические маркеры, которые могут быть ассоциированы с риском развитияпневмонии. Известно, что все эти цитокины могут вырабатываться в ответ наактивацию TLRs. IL-17 и TNFα относятся к провоспалительным цитокинам.Поданнымлитературыпоказано,чтоувеличениеуровняпровоспалительных цитокинов, в частности TNFа и IL-17, приводит к активациизащитных механизмов на локальном уровне, но при избыточной продукции можетприводить к разрушению ткани [92].

IL-17 также ассоциирован с аутоиммуннойпатологией. Снижение выработки TNFα может быть связано с нарушениемзащитной функции врожденного иммунитета на локальном уровне и, какследствие, увеличение агрессии патогенной микрофлоры.Помимо провоспалительных цитокинов в работе также был исследованпротивоспалительный цитокин - IL-10. Известно, что снижение экспрессииданного цитокина может приводить к активации провоспалительных механизмови вероятно к разрушению ткани, а увеличение – к супрессии мукозальногоиммунитета.На первом этапе нами был проведен сравнительный анализ распределенияаллелей и генотипов полиморфных маркеров TNFА (-308 G/A) и IL17A (-197 G/A),которые локализованы в промоутерных областях генов.

Часто измененияпоследовательности ДНК в промоутерной области гена связано с изменениемэкспрессии белка.Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера TNFA (308 G/A) у родильниц и у новорожденных во всех исследуемых группахпредставлены в Таблице 32.222Таблица 32Распределение аллелей и генотипов маркеров TNFα -308 G>А и IL17A -197G>A у родильниц и новорожденных в группах с ВУП, с РНП и в группесравненияTNFα -308 G>A (rs1800629)мамыAGрGAGGAAрНорма0,620,38-0,7700,23-ВУП0,580,42≥0,050,8500,15≥0,05РНП0,500,50≥0,050,840,080,08≥0,05детиAGрGAGGAAр0,490,510,900,040,060,500,501,000,000,000,520,480,680,180,14НормаВУПРНП≥0,05≥0,05-≥0,05<0,05IL17A -197 G>A (rs2275913)мамыAGрGAGGAAрНорма0,260,74-0,430,520,05-ВУП0,310,69≥0,050,610,390ВАП0,340,66≥0,050,340,630,03≥0,05детиAGрGAGGAAр0,660,340,310,500,190,710,290,420,500,080,720,280,440,500,06НормаВУПВАП≥0,05≥0,05≥0,05≥0,05223На Рисунке 39А показано, что во всех группах доминировал аллель А игетерозиготный генотип.

При этом достоверных различий между частотамиаллелей и генотипов в группах с пневмонией новорожденных, внутриутробныминфицированием и группой сравнения в материале от родильниц выявлено небыло.Иная тенденция наблюдалась непосредственно у новорожденных. Аллели вматериале от новорожденных во всех группах распределились приблизительноодинаково.Вгруппеноворожденныхспневмониейопределялидостоверноеувеличение частоты генотипа GG, которая составляла 0,18 относительно 0,04 – вгруппе сравнения.Таким образом, маркер GG TNFА (-308 G/A) ассоциирован с рискомразвития пневмонии у новорожденных и может быть использован в практике.Вероятно, наличие данной замены в геноме новорожденных может быть связанос нарушением баланса выработки TNFα и нарушением защиты, как показано наРисунке 39Б.0,90,80,70,60,5GAGG0,4AA0,30,20,10НормаАВУПРНП2241,210,8GА0,6GGАА0,4*0,20НормаВУПРНПБПримечание. По оси абсцисс – исследуемые группы, по оси ординат – частотавстречаемости генотипа, * - частота генотипа достоверно отличается от показателя вгруппе сравнения (p  0,05)Рис.39 Распределение генотипов маркера TNFα (-308 G/A) у родильниц (А) иноворожденных (Б) в группах с ВУП, с РНП и в группе сравненияДругой провоспалительный цитокин, который был исследован в работе IL17.В клиническом материале от родильниц распределение частот аллелейсреди исследуемых групп было следующее: аллель А – 0,26; 0,31 и 0,34, аллель G– 0,74; 0,69 и 0,66 в группах сравнения, ВУП и РНП, соответственно.Достоверных различий при этом не было определено.

При исследовании частотгенотипов было выявлено два маркера – генотип GG был ассоциирован сотсутствием развития внутриутробной инфекции, т.е. можно считать его«протективным». В то же время наличие генотипа GА ассоциировано с развитиеминфекции у плода. Можно предположить, что нарушение экспрессии цитокинаIL17 у родильницы может служить причиной инфицирования плода.Распределениегенотипов маркерапредставлено на Рисунке 40А.IL17A(-197G/A)у родильниц2250,7*0,60,50,4GAGG0,3AA0,20,10НормаВУПРНПАКак видно из Рисунка 40Б у новорожденных во всех группах доминирует аллельG и генотип GG, но достоверных отличий между этими показателями в группахвыявлено не было.0,60,50,4GА0,3GGАА0,20,10НормаВУПРНПБПримечание.

По оси абсцисс – исследуемые группы, по оси ординат – частотавстречаемости генотипа, * - частота генотипа достоверно отличается от показателя вгруппе сравнения (p  0,05)Рис. 40 Распределение генотипов маркера IL17A (-197 G/A) у родильниц(А) и новорожденных (Б) в группах с ВУП, с РНП и в группе сравнения226На следующем этапе были исследованы полиморфные маркеры (-1082A>G)и(-592A>C)вгенеIL10.Какужеговорилосьранее,IL10–противовоспалительный цитокин и изменения в его промотерной области могутпривести к изменению экспрессии белка и к нарушению баланса про- ипротивовоспалительных цитокинов.Во всех исследуемых группах определялись аллели полиморфного маркераIL10 (-1082 A>G), но достоверных изменений в распределении не былообнаружено.

У родильниц выявлено, что генотип GA (частота которого составила0,75 относительно 0,47 – в группе сравнения) ассоциирован с развитиемпневмонии у новорожденных. При этом генотип АА – является “протективным”.В настоящем исследовании было показано, что генотип GG, которыйопределяется как у родильниц, так и у новорожденных является «протективным»относительно развития внутриутробной инфекции плода.Как видно из Таблицы 33 и на Рисунке 41, частота данного генотипасоставляет 0,09 (относительно 0,28 в группе сравнений у родильниц) и 0,07(относительно 0,19 в группе сравнения у новорожденных).При оценке распределения аллелей и генотипов полиморфного маркера (592A>C) в гене IL10 было показано следующее.

У родильниц не было определенодостоверных ассоциаций частот аллелей и генотипов с внутриутробнойпневмонией и ранней неонатальной пневмонией новорожденных.В Таблице 33 и на Рисунке 41 показано, что у новорожденных былинайдены две ассоциации: генотип GA - «протективный» маркер развитиявнутриутробного инфицирования плода (частота составляла 0,20 относительно0,42 в группе сравнения), маркер GG – ассоциация с риском развития ВУП(частота составляла 0,80 относительно 0,58 в группе сравнения).227Таблица 33Распределение аллелей и генотипов маркеров IL10 (-1082A>G) и IL10 (592A>C) у родильниц и новорожденных в группах с ВУП, с РНП и в группесравненияIL10 -1082 A>G (rs 1800896)мамыAGрGAGGAAрНорма0,510,49-0,470,280,25-ВУП0,590,41≥0,050,640,090,27<0,05РНП0,470,53≥0,050,750,160,09<0,05детиAGрGAGGAAр0,540,460,700,190,110,500,500,870,070,060,560,440,660,230,11НормаВУПРНП≥0,05≥0,05<0,05≥0,05IL10 -592 A>C (rs1800872)мамыCAрCACCНорма0,740,26-0,520,48ВУП0,690,31≥0,050,610,39РНП0,780,22≥0,050,440,56ДетиCAрCACCAA0,790,210,420,580,000,900,100,200,800,000,810,190,370,630,00НормаВУПРНП≥0,05≥0,05AA0,000,000,00р≥0,05≥0,05р<0,05≥0,052280,8*0,70,60,5GA0,4GGAA0,30,2*0,1*0НормаВУПРНПА10,90,80,70,6GА0,5GG0,4АА0,30,2*0,10НормаВУПРНПБПримечание.

По оси абсцисс – исследуемые группы, по оси ординат – частотавстречаемости генотипа, * - частота генотипа достоверно отличается от показателя вгруппе сравнения (p  0,05)Рис. 41 Распределение генотипов маркера IL10 (-1082A>G) у родильниц (А) иноворожденных (Б) в группах с ВУП, с РНП и в группе сравнения2290,70,60,50,4CACC0,3AA0,20,10НормаВУПРНПА0,9*0,80,70,60,5CА0,4CCАА0,3*0,20,10НормаВУПРНПБПримечание. По оси абсцисс – исследуемые группы, по оси ординат – частотавстречаемости генотипа, * - частота генотипа достоверно отличается от показателя вгруппе сравнения (p  0,05)Рис. 42. Распределение генотипов маркера IL10 (-592A>C) у родильниц (А) иноворожденных (Б) в группах с ВУП, с РНП и в группе сравнения230На следующем этапе нами проводился поиск ассоциаций гаплотипов в генахTNFA и IL-10 с ранней неонатальной пневмонией и внутриутробной инфекцией.Известно, что однонуклеотидные полиморфные маркеры могут оказыватьсущественное влияние на предрасположенность индивидуума к той или инойпатологии, однако гораздо большее значение имеет совокупность сцепленныхгенов на одной хромосоме.

Поэтому, помимо исследования связи междуоднонуклеотидными полиморфизмами G-308A и G4682A в гене TNFA и A-1082G иA-592C в гене IL-10 и патологиями плода, мы провели гаплотипный анализ.Сначала был проведен анализ гаплотипов в гене TNFA среди родильниц свнутриутробной инфекцией у плода, ранней неонатальной пневмонией иконтрольной группой. В исследуемых выборках из девяти возможных вариантовгаплотипов встречалось только семь, данные гаплотипы и распределение ихчастот по группам представлены в Таблице 34.Таблица 34Распределение частот гаплотипов в гене TNFA родильниц и результат анализа их ассоциаций с раннейнеонатальной пневмонией у новорожденного и внутриутробной инфекцией у плодаГаплотипЧастотыTNFα -308TNF 4682G>AG>AРНП(rs1800629) (rs1800629)Конт-ЧастотыpOR95% CIрольВУПКонт-pOR95% CIрольGAGA0,0890,139>0,051,660,63 - 4,360,0890,139>0,051,660,50 - 5,55GAGG0,4000,177<0,0130,16 - 0,660,2000,177>0,050,860,34 - 2,19GAAA0,0110,000>0,050,000,000,0000,000>0,050,000,00GGGA0,0110,025>0,052,310,21 - 26,000,0000,025>0,050,000,00GGGG0,4330,582>0,051,820,99 - 3,360,6670,582>0,050,700,32 - 1,50AAGA0,0000,025>0,050,000,000,0220,025>0,051,140,10 - 12,97AAGG0,0560,051>0,050,910,23 - 3,500,0220,051>0,052,350,25 - 21,67Как видно из таблицы, достоверных отличий при сравнительном анализегаплотипов группы с внутриутробной инфекцией и контрольной выборкинайдено не было.Статистически значимые различия были установлены между группой сранними неонатальными пневмониями и контролем.

Характеристики

Список файлов диссертации