Диссертация (1139516), страница 30
Текст из файла (страница 30)
Показателидефенсинов при этом практически не отличались от нормы.У пациентов с РНП также наблюдалось небольшое снижение экспрессиигена TLR2 в 1,5 раз и TLR4 – в 1,75 раз. При этом у новорожденных с пневмониейнаблюдался четкий рост уровня экспрессии гена провоспалительного цитокинаTNFα и ядерного фактора NF-kB, что может свидетельствовать об активациивоспалительных реакций на уровне слизистых оболочек. Следует отметить, чтоданная активация происходит на фоне супрессии экспрессии генов рецепторов.Далее нами был проведен корреляционный анализ полученных результатовпредставленных в Таблице 29.203Таблица 29Изучение корреляционной зависимости между уровнем экспрессииисследуемых показателей врожденного иммунитета в эпителиальныхклетках слизистой верхних дыхательных путей у новорожденных(коэффициент корреляции по Спирмену)TLR2TLR2Здоровые новорожденныеTLR4HBD-1HBD-2rs = 0.101rs = 0,781rs = 0.543rs = 0.54rs = 0.388rs = 0.248rs = 0.543rs = 0.541rs = 0,734rs = -0.371rs = -0.37rs = 0.543rs = 0.54rs = 0.101HBD-1rs = 0,734rs = 0.388HBD-2rs = 0,781rs = 0.248rs = 0,734TNFαrs = 0.543rs = 0.543rs = -0.371rs = 0.543NF-kBrs = 0.54rs = 0.541rs = -0.37rs = 0.54TLR2TLR4Новорожденные с ВУПHBD-1HBD-2rs = -0.1rs = 0,96TNFαNF-kBrs = 0,983rs = -0.429rs = -0.238rs = -0.117rs = -0.2rs = 0.452rs = 0,667rs = 0,85rs = -0.143rs = 0.rs = -0.381rs = -0.286rs = -0.1HBD-1rs = 0,833rs = -0.117HBD-2rs = 0,983rs = -0.2rs = 0,85TNFαrs = -0.429rs = 0.452rs = -0.143rs =-0.381NF-kBrs = -0.238rs = 0,667rs = 0.rs = -0.286TLR2Новорожденные с РНПTLR4HBD-1HBD-2rs =-0.251rs = 0,96rs = 0,833TLR4TLR2NF-kBrs = 0,734TLR4TLR2TNFαrs = 0,833rs = 0,833TNFαNF-kBrs = 0.368rs = 0,918rs = 0.051rs = 0.142rs = 0.274rs = -0.323rs = 0.188rs = -0.032rs = 0.308rs = -0.072rs = -0.115rs = -0.024rs = 0.136TLR4rs = -0.251HBD-1rs = 0.368rs = 0.274HBD-2rs = 0,918rs =-0.323rs = 0.308TNFαrs = 0.051rs = 0.188rs = -0.072rs = -0.024NF-kBrs = 0.142rs = -0.032rs = -0.115rs = 0.136rs = 0,863rs = 0,863204Как видно из таблицы в группе здоровых новорожденных выявленаположительная ассоциация экспрессии TLR2 и HBD-1, TLR2 и HBD-2, HBD-1 иHBD-2 (при этом коэффициент составил 0,734, 0,734, 0,781, соответственно).В группе новорожденных с ВУП была определена аналогичная зависимость.А в группе с РНП корреляция показателей была иной - HBD-1 и HBD-2(коэффициент 0,918).
Также была найдена слабая обратная зависимость междуTLR4 и HBD-2.На следующем этапе работы мы провели исследование измененияэкспрессионных профилей молекул врожденного иммунитета относительноэтиологического фактора (возбудителя).7.4. Изменение показателей врожденного иммунитета у новорожденных спневмонией в зависимости от этиологии возбудителяНамипроведеноизучениемикробиотыифакторовврожденногоиммунитета (TLR2, TLR4, HBD-1, HBD-2, TNFα и NF-kB) на уровне слизистыхоболочек верхних дыхательных путей при внутриутробном инфицировании плодаи пневмонии новорожденных.У большинства новорожденных были выделены грамотрицательныемикроорганизмы (93%), среди которых преобладали энтеробактерии (79%).Энтеробактерии чаще всего были представлены K.pneumonia (33%), E.coli (24%) иP.aeruginisa(22%).Грамположительныекоагулазоотрицательнымивозбудителистафилококками,средибылипредставленыкоторыхпреобладалиS.epidermidis, обладающие гемолитическими свойствами (26%).Призатяжномтечениипневмонийуноворожденныхосновнымвозбудителем являлялся St.
maltophilia.Показатели врожденного иммунитета – Toll подобные рецепторы (TLR2,TLR4) – экспрессировались на эпителиальных клетках верхних дыхательныхпутей как у новорожденных с ВУП, так и у детей с РНП. Следует отметить, что уноворожденных с ВУП уровни экспрессии распознающих структур были205достоверно снижены в два раза, этот факт можно объяснить как генетическимиособенностями организма ребенка, так и активностью факторов патогенностимикроорганизмов.Для подтверждения последней гипотезы был проведен анализ ассоциациипоказателей врожденного иммунитета и наличием определенного возбудителя.Были выделены подгруппы детей с пневмониями, вызванными K.pneumonia,P.aeruginisa, E.coli, кокковой флорой и смешанной инфекцией.Показано, что экспрессия гена TLR2 снижалась в 6,2 раза у пациентов сK.pneumonia и в два раза и более при смешанной инфекции.
Уровни экспрессиигена TLR4 были снижены более чем в три раза при инфекции, вызванной E.coli.Данные экспрессии генов TLR2 и TLR4 представлены на Рисунке 33.TLR2420-2-4-6-8TLR2206TLR41,510,50-0,5-1TLR4-1,5-2-2,5-3-3,5-4Примечание - По оси абсцисс – исследуемые группы. По оси ординат – относительныеединицы показателя экспрессии (показатель в опытной группе относительно показателяв группе сравнения).Рис. 33 Экспрессия генов TLR2 и TLR4 в эпителиальных клетках верхнихдыхательных путей новорожденных с ВУП и РНПНа следующем этапе были определены уровни экспрессии генов HBD-1 иHBD-2 в эпителиальных клетках верхних дыхательных путей в группахноворожденных с ВУП, с РНП и у здоровых детей.Известно,чтодефенсиныинфекционных возбудителей.осуществляютзащитуслизистыхотHBD-1 постоянно вырабатывается на уровнеслизистой верхних дыхательных путей, а HBD-2 – индуцибельно, т.е.
поддействием инфекционных патогенов.Показано, что экспрессия гена HBD-2 увеличивается в 2,3 раза уноворожденных, у которых определяется инфекционный возбудитель, но приэтомотсутствуютклиническиепроявленияпневмонии.Такжепоказанодостоверное снижение показателя HBD-2 (в 3,2 раза) у пациентов с пневмонией,вызванной K. pneumonia.207Данные экспрессии генов HBD-1 и HBD-2 показаны на Рисунке 34.HBD-121,510,50HBD-1-0,5-1-1,5-2HBD-23210HBD-2-1-2-3-4Примечание. По оси абсцисс – исследуемые группы. По оси ординат – относительныеединицы показателя экспрессии (показатель в опытной группе относительно показателяв группе сравнения).Рис.
34 Экспрессия генов HBD-1 и HBD-2 в эпителиальных клетках верхнихдыхательных путей новорожденных с ВУП и РНП208Как видно из рисунка показатели HBD-1 во всех исследуемых группахманялись недостоверно.Помимодефенсинов,провоспалительногобылцитокинаTNFαпроведенианализфактораэкспресиитранскрипциигеновNF-kBвэпителиальных клетках верхних дыхательных путей в исследуемых группах.Данные молекулы участвуют в сигнальном пути с TLRs.
Так, было показано, что удетей, у которых выявляли инфекционные возбудители, но не было клиническихпроявлений, показатель цитокина возрастал более чем в два раза.Это можно объяснить тем, что инфекционные возбудители через TLRактивируют выработку провоспалительного цитокина TNFα.Вгруппахсвнутриутробныминфицированием,спневмониейноворожденных, вызванной E. coli, P.aeruginosa, кокками и при смешаннойинфекции показатель TNFαвозрастал в 3-4 раза относительно показателя вгруппе сравнения. Уровень экспрессии гена NF-kB достоверно увеличивалсятолько в группах пациентов с внутриутробным инфицированием плода (в 2,5раза) и у новорожденных с пневмонией, вызванной кокковой микрофлорой (в 3,1раз).Иммунологические показатели (распознающие структуры – TLR2, TLR4,дефенсины HBD-1, HBD-2, провоспалительный цитокин TNFα и фактортранскрипции NF-kB) у новорожденных с внутриутробным инфицированием и спневмонией изменяются неоднозначно.
Выявлена тенденция к снижениюэкспрессии генов TLR2, TLR4 и увеличению экспрессии генов TNFα и NF-kB.Данные изменения коррелируют с инфекционным возбудителем, следовательно,можно предположить, что непосредственно возбудитель за счет действияфакторов патогенности влияет на показатели врожденного иммунитета.209ГЛАВА 8. ИССЛЕДОВАНИЕ АССОЦИАЦИИ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ ВГЕНАХ TLRS, DEFB1 И ЦИТОКИНОВ У НОВОРОЖДЕННЫХ СНЕОНАТАЛЬНЫМИ ПНЕВМОНИЯМИВ предыдущих разделах были представлены результаты о том, чтодисбалансвсистемеTLRsприводиткразвитиювнутриутробномуинфицированию плода. В результате изменений в экспрессии генов врожденногоиммунитетапроисходитнеадекватноеразвитиемеханизмовврожденногоиммунитета, что может быть причиной патологии, и даже привести к летальномуисходу.
В настоящее время существует подход, который может позволить отчастиобъяснить причину нарушений – генетическая предрасположенность.Известно, что нарушения на уровне генов могут приводить как кнарушению белковой последовательности, так и к нарушению регуляцииэкспрессии гена. Значение генетических факторов в патологии беременных иноворожденных в настоящее время общепризнанно 167; 198.Впоследнеевремядоказанарольнаследственныхфактороввинтенсивности реализации механизмов врожденного иммунитета. Генетическаяпредрасположенность к развитию ВУП и РНП связана с наследованиемопределенных аллелей и генотипов. В данной работе мы выбрали ряд факторовврожденного иммунитета, которые по данным биоинформационного анализа и порезультатам экспрессионного профиля имеют большое значение в защитеорганизма при ВУП/РНП.
Данные факторы представлены на Рисунке 35. Все ониявляются компонентами TLR-опосредованного пути.210Примечание. Красным цветом выделены факторы, исследуемые в работе (нагенетическом уровне)Рис. 35 Схематичное изображение TLR-опосредованного путиВ данном разделе представлены данные по изучению ассоциациипневмонии у новорожденных (РНП и ВУП) с полиморфными маркерами в такихгенах – кандидатах, как TLR2, TLR4, DEFB1, IL-10, IL-17 и TNFа.Внашихисследованияхпредставленырезультатыпоассоциацииполиморфных маркеров в генах TLR2 и TLR4 с патологическими состояниямиинфекционного генеза.
Данные рецепторы представляют интерес в связи с тем,что они распознают широкий спектр патогенов, которые могут вызывать ВУПи/или РНП, и, следовательно, нарушение в белковой последовательности этихрецепторов может напрямую быть связано с их функцией.211Другой полиморфный маркер, исследуемый в работе, локализуется внетранслируемой 5’-области гена DEFB1 (кодирующего белок -дефенсин-1человека). И изменения его состояния могут напрямую влиять на количествоэкспрессируемого белка.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
