Диссертация (1139516), страница 31
Текст из файла (страница 31)
Таким образом, можно говорить о генетическиопосредованной регуляции количества дефенсина на уровне слизистых оболочек.Также нами были исследованы полиморфизмы в генах как про-, так ипротивовоспалительныхцитокинов.Исследованияпоследнегодесятилетияпоказали, что маркеры пневмонии могут быть связаны с генами цитокинов 188;198. Во-первых, доказан факт участия цитокинов в защитных механизмах противвозбудителей пневмонии.
Во-вторых, выявлен полиморфизм цитокиновых генов,как в области экзонов, кодирующих функциональную область молекулы, так и винтронах, влияющих на эффективность экспрессии цитокина.Таким образом, активность и количество одного и того же цитокина могутбыть различными в зависимости от генетических вариаций. На сегодняшний деньсуществует ряд работ о корреляции полиморфизма генов провоспалительныхцитокинов с развитием патологии новорожденных и плода.
Представляет особыйинтерес и ряд предварительных клинических исследований, касающихсявозможных связей между генотипом цитокинов и развитием инфекций. В целом,для определения роли полиморфизма генов цитокинов и других регуляторныхмолекул (Toll-подобных рецепторов, дефенсинов и др.) требуются дальнейшиеисследования.8.1. Исследование ассоциации полиморфных маркеров в генахTLR2 и TLR4 у родильниц новорожденных с РНП и ВУППри изучении распределения аллелей и генотипов полиморфного маркераArg753Gln гена TLR2 среди родильниц, у которых родились дети с ВУП и РНП, атакже в группе родильниц с физиологически протекавшей беременностью и безпатологии плода обнаружено преобладание частоты аллеля Arg над частотой212аллеля Gln, данные представлены в Таблице 30, и встречаемости генотипа ArgArgнад встречаемостью генотипов ArgGln и GlnGln во всех исследуемых группах (уродильниц), представлены на Рисунке 36 А.
Отличия распределения аллелей игенотипов между группами были недостоверны.В нашей работе также исследовалось распределение аллелей и генотиповполиморфного маркера Arg753Gln гена TLR2 у новорожденных с ВУП и РНП.Полученные данные, представленные на Рисунке 36 Б, не сильно отличались отданных родильниц. Частота аллеля Arg была значительно выше аллеля Gln иварьировала в диапазоне 0,86 - 0,95 (частота аллеля Gln варьировала в диапазоне0,05 - 0,14). Следует отметить, что частота гетерозиготного генотипа была выше,чем в аналогичной группе родильниц. А генотиписследуемых нами группах новорожденных.GlnGln отсутствовал в213Таблица 30Распределение аллелей и генотипов маркеров Arg753Gln гена TLR2 и Asp299Gly гена TLR4 родильниц и новорожденных в группах с ВУП, с РНП и вгруппе сравненияArg753Gln гена TLR2родильницыArgGlnрНорма0,940,06-0,880,120-ВУП0,940,06≥0,050,900,080,02≥0,05РНП0,910,09≥0,050,880,060,06≥0,05новорожденныеArgGlnрНорма0,860,14-0,710,290-ВУП0,890,11≥0,050,780,220≥0,05РНП0,950,05≥0,050,900,100≥0,05Arg Arg Arg Gln Gln GlnArg Arg Arg Gln Gln GlnррAsp299Gly TLR4родильницыAspGlyрAspAspAspGlyGlyGlyрНорма0,980,02-0,960,040-ВУП0,890,11<0,050,860,050,09<0,05РНП0,970,03≥0,050,960,040≥0,05новорожденныеAspGlyрAspAspAspGlyGlyGlyрНорма10-100-ВУП0,920,08<0,050,830,170<0,05РНП10≥0,05100≥0,0521410,90,80,70,6Arg Arg0,50,4Arg Gln0,3Gln Gln0,20,10НормаВУПРНПА10,90,80,70,6Arg Arg0,50,4Arg Gln0,3Gln Gln0,20,10НормаВУПРНПБПримечание.
По оси абсцисс – исследуемые группы, по оси ординат – частотавстречаемости генотипаРис. 36 Распределение генотипов Arg753Gln гена TLR2 у родильниц (А) иноворожденных (Б) в группах с ВУП, с РНП и в группе сравнения215Таким образом, можно заключить, что полиморфный маркер Arg753Glnгена TLR2 не связан с внутриутробным инфицированием плода, а также спневмонией новорожденных. Можно предположить, хотя замена аминокислоты в753 положении могла привести к изменению передачи сигнала с TIR-домена TLR2рецептора, но в наших исследованиях это изменение не было критично дляреализации патологии новорожденных.
Следует отметить, что в русскойпопуляции частота аллеля Arg и генотипа ArgArg выше, чем в дагестанскойпопуляции 37.Другой,исследуемыйнамигенетическиймаркер, локализовалсявкодирующей области гена TLR4 и реализовался через замену аминокислоты Aspна Gly в 299 положении. Данный маркер был выбран вследствие того, что вработах других авторов была показана ассоциация его с инфекцией мочевоготракта, сепсисом, стафилококковой инфекцией, панкреатитом, рассеяннымсклерозом и др. 164; 200; 214.Замена аминокислотного состава рецептора в положении 299 потенциальномогла повлиять на функциональную активность рецептора и, как следствие, наопосредованную активацию механизмов врожденного иммунитета в ответ напроникновение патогена. Так, известно, что этот полиморфизм приводит кизменению белковой последовательности внеклеточного домена TLR4, которыйраспознает патоген ЛПС.Результаты определения частоты аллелей и генотипов полиморфногомаркера Asp299Gly гена TLR4 в исследуемых группах представлены в Таблице 34.Нами показано, что и у родильниц, и у новорожденных доминировал аллель Asp игенотип AspAsp как в группе сравнения, так и в опытных группах.
Было выявлено,что у родильниц аллель Gly и генотип GlyGly ассоциированы с развитиемвнутриутробного инфицирования плода. Частота аллеля Gly при этом составляет0,11, а генотипа - 0.09, в группе сравнения частота аллеля - 0,02, а генотип неопределяется. Данные представлены в Таблице 38 и Рисунке 37А.216Как видно, на Рисунке 37Б, у новорожденных аллель (частота 0,08)ассоциирована с внутриутробной инфекцией, а также генотип AspGly (частота0,17). При этом в группе сравнения данный маркер не определялся.Таким образом, в дагестанской популяции нами был определен маркер вгене TLR4, который ассоциирован с ВУП (как аллели, так и генотипы).
Однако,анализируя результаты русской популяции (на территории г. Москвы) можносказать, что данный маркер не имеет подобной ассоциации 24.Можно сделать заключение, что представленные маркеры могут бытьиспользованы сугубо на региональном уровне.Далее нами был проведен поиск других полиморфных маркеров в генахсигнальныхрецепторовврожденногоиммунитета,которыемогутбытьассоциированы с риском развития преждевременных родов или с реализациейвнутриутробной инфекции.
В следующем разделе речь пойдет о маркере в гене дефенсин-1 человека.1,210,8Asp Asp0,6Asp Gly0,4Gly Gly0,2*0НормаАВУПРНП2171,210,8Asp Asp0,6Asp Gly0,4Gly Gly*0,20НормаВУПРНПБПримечание. По оси абсцисс – исследуемые группы, по оси ординат – частотавстречаемости генотипа, * - частота генотипа достоверно отличается от показателя вгруппе сравнения (p0,05).Рис. 37 Распределение генотипов Asp299Gly гена TLR4 у родильниц (А) иноворожденных (Б) в группах с ВУП, с РНП и в группе сравнения8.2. Изучение ассоциации полиморфного маркера G(-20)A у родильниц иноворожденных с НПОднонуклеотидная замена может изменить эффективность транскрипции итрансляции, так же как изменить аминокислотную последовательность ипоследующую структуру белка, и его функцию.
В данном исследовании былвыбранполиморфныймаркерG(-20)AгенаDEFB1,нетранслируемой области. Предположительно этот SNPsрасположенныйвможет влиять науровень экспрессии гена дефенсина. Jurevic RJ, et al. (2002) предположил, чтоизменения в экспрессии противомикробных пептидов (в частности дефенсинов)могут быть связаны с различной восприимчивостью к инфекционным агентам и,как следствие, нарушением процессов врожденного иммунитета на уровнеслизистых оболочек [162].
Известно, что HBD-1 в основном экспрессируетсяконститутивно, и, значит, полиморфизмы могут потенциально влиять на фоновый218уровень экспрессии. Ассоциация полиморфного маркера G(-20)A в гене DEFB1 синфекционной патологией новорожденных (в частности с пневмонией) донастоящего времени не исследовалась.Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного маркера G(-20)Aгена DEFB1 у родильниц и у новорожденных во всех исследуемых группахпредставлены в Таблице 31.Таблица 31Распределение аллелей и генотипов маркера G(-20)A гена DEFB1 уродильниц и новорожденных в группах с ВУП, с РНП и в группе сравненияродильницыGAрGGAAAGрНорма0,790,21-0,580,000,42-ВУП0,660,34<0,050,580,250,17<0,05РНП0,890,11≥0,050,780,000,22≥0,05новорожденныеGAрGGAAAGрНорма0,730,27-0,520,050,43-ВУП0,750,25≥0,050,550,060,39≥0,05РНП0,790,21≥0,050,620,030,35≥0,05Анализ частот аллелей и генотипов полиморфного маркера G(-20)A уродильниц в исследуемых группах выявил некоторые достоверные различия.
Так,частоты аллелей данного маркера в группе с внутриутробным инфицированиемплода и в группе сравнения были следующими: аллель G - 0,66, 0,79, аллель А 0,34, 0,21, соответственно. Частота аллелей у родильниц, у которых родилисьноворожденныес ВУП, достоверно не отличались от таковых в группесравнения. Таким образом, аллель А (определяемая у родильниц) являетсямаркером ВУП.219Частоты генотипов исследуемого маркера у родильниц в группе ВУП, РНПи группе сравнения были следующими: GG - 0,78, 0,58, 0,58; AA – 0, 0,25, 0; AG 0,22, 0,17, 0,42, соответственно. Данные представлены на Рисунке 38А.Показано, что в дагестанской популяции доминировал аллель G и генотипGG (частота составляла более 0,58). Было выявлено, что риск развитиявнутриутробного инфицирования плода ассоциирован с генотипом АА уродильниц, а генотип AG – является «протективным».У новорожденных также проводили исследование ассоциации маркера G(20)A гена DEFB1 с риском развития ВУП и РНП.
Среди аллелей доминировалаллель G (частота была выше 0,73 во всех группах) и генотип GG (частотапревышала 0,52). Такая же тенденция была определена и у родильниц. Однакоассоциаций аллелей и генотипов маркера G(-20)A у новорожденных с патологиейне было выявлено. Данные представлены в Таблице 31 и на Рисунке 38Б.0,90,80,70,60,5GG0,4AA*0,3AG*0,20,10НормаАВУПРНП22010,90,80,70,6GА0,5GG0,4АА0,30,20,10НормаВУПРНПБПримечание.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
