А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 33
Текст из файла (страница 33)
Пссаелогмтельносш оперщнй на разных приборы ножш ивюшо шлгмюмп, поэтому прн выполнении конкмннмх аналиаов агепуст рукоюдспюваться ннстр) кпнлм рекаисндецинми, прилагаемыми к конкрешому прибору. Слевует стметн, что такая тезнне» довольно дорошя, е свят с че: рекоменлтч ся юя приобретения нспслюое н юнко прн необхсанностн кассовых эмыиаое. Глава В КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ И ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА МИКРООРГАНИЗМОВ Для решения многих талач бывает досшточна ппределять только некоторые, легко выявляемые свойства и фвзиолого-биохимнческве особенносщ 114 культур микроорганизмов. Знание таковых в сочетании с характеристикой морфологии микроорганизма иногда позволяет установить его принадлежность к тому или иному таксону — классу, порядку, семейству.
8.1. КУЛЬТУРАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА К культуральным, или макроморфологическим, свойствам относятся характерные особенности роста микроорганизмов на плотных и жидких питательных средах. 8.1.1. Рост на плотных питательных средах На поверхности плотных питательных сред в зависимости от посева микроорганизмы могут расти в виде колонии, штриха или сплошного газона. Колонией называют изолированное скопление клеток одного вила, выросшее в большинстве случаев из одной клетки.
В зависимости от того, где развивались клетки (на поверхности плотной питательной среды, в толще ее или на дне сосу- Ф © Рис. 8.1. Форма колонии: 1 — круглая; 2 — круглая с фестончатым краем; 3 — крутлая с валиком по краю; 4, 5— ризондные; 6 — с ризондным краем; 7 — амебовидная; 8 — нитевидная; 9 — складчатая; 10— неправильная; П вЂ” концентрическая; !2 — сложная 115 Рис. 8.2.
Профиль колонии: à — кзота> а:3 — .г е Юрез Я,З вЂ” а> рн а;4 — р зеваю уа р;З вЂ” лхс «а; 1 2 3 4 5 6 7 8 у Рнс. 8.1. Край калом и: ла), разлнчакт лсеерхлссшныс, шублллне н доллые колонии. Образован>ге лсеерхностльгх колоний — наиболее существенная особенносгь ржта мнапш микроорганизмовов на плопюм субсгразе. Такие колонии отличаются большим разнообразиеы. Прн их описании учитывают слеауюшие признаки: ° 4орхгу — окрутлш, амебовнлная, неиравнльная, ризоилная и т.л.
(рпс. 8.1); ° рознер (дггаиетр) — измернют в миллиметры; если размеры колонии не превышюот 1 мм. то нх назьцнют точечнымн; ° лоеерзиссмь — гладкая, шероховатая, борозячатая, склалчшая, морщинистая, с концентричесюпш кругами вли радиально исчерченная; ° лрофлгь — плоский, выпуклый, кратерообразный, кон>солидный и т.л (рис. 8.2); ° блеск и хрозра чхоглм — колония блестящая, матоаан, туск.гы, и> чнисгая, прозрачная; ° леем — бесцветная (грязно-белые юзлонип относят к бесцветным) илн питментнрованная — белая, желтая, золотисгал, оранжевая, снрснегия, краснея, черная и т.лз особо отмечают вьшсленне в субстрат пигмента; при описа- ОООЭЭ 3 5 Рнс.
8Я. Струкцтк «гаонннг à — снюесяах;à — ех леркнс я;3 — р>.ва р н"мх;4-. трхзгимх,5 — ~м с ыя 11б нии колоний актиномицетов отмечают пнгыептацию возлушнога и субстратнога мицелня, а текже выделение пигментов в среду; ° сэгрулзлуру — однородная, мелко- изи ) ),~ ' ) г х' ) ',,',:1 край и сгрухзуугу колонии определяют с полатшыо лупы или при мазом уылнчении микроскопа Для этого чашку Петри помсшакп на стслик микроскопа крышкой внизг Рвс з.5.
Ргкт бактерий па ытаихх ° хаэсвгмем(ам определяю ', прикасаясь к г . юы са с я * г, 2 поверхности колонии нюней. Колония мо- м»юя с а яаиегии кгв; 3— жег легко сниматься с ангра, быть плогнои, има "' з таыээньш г— пяткой или врасзэгашей в агар, слизистой (прилипает к петле), тягучей, иметь вид пленки (сшзмается целиком), быль трупкой (легко лолгаегся при прикосновении петлей). Глубинные кыалаи, напрев, лаилгьгго олнгюбразны. Чаще всего они по виду похожи на более нли мены сплющенные чечевичкя, в проекции имеюшие форму овалов с заостренными концалги. Лишь у немнопы бактерий глубинные колонии напоминают пучки ваты с нитевидными вырастами в лгпагельную среду.
Образоаанггс глубинных колоний часто сопровожзаегся разрывом плшной среды, если мнлрооргенизллы выэеляхгг углеюге.готу гши аруше газы. Далеке хыаэва разных микрсюршназлктв обычно имеют вид тоню~э прозрачных пленок, сгслюшихся по дну. Размеры н мгюгве другие сссбеннссп~ колонии могуг изменяться с возрастолг п лшлгснт от сасзаа» среди. Поэтому прл их описании указывают возраст хультуры, состав среды и телшературу «улюивнравания. При опнсанни раста микрааршнизмов ло мглрщ отмечают слелуюшие особеинаспс скудный, умеренный пли обильный, сплошной с ровш ~и или волнисзым краем, четковндньгй, иапоминаюШий цепочки изолираяанных колоний, лглфхуузнынц перистый, древовидный юш ризоидныи (рнс. К5]. Харакюрвзуют оптические саоиства налета, его цвет, поверхность и кансигггеицню.
Для описания колоний и роста по цпрнху многие ыижраарганизмы ысто вырашивакп на мясопспз аннам ашре Применяагт также мясопепзаннуго жсзатз~ну. Для лргшеы раымагрення глубиннык копаний среды с агаром или желатнной рекомендусгсн асветллть (см. гл. 5), 8.1.2. РОст В жидких питптпльных смйдах Рост мккроорганизмов а жидких питательных средах более однообразен и сопромекаается помутнением среды, образоынием пленки г ли осадка. Харакгернзуя рост микрооргаНизмов в жнакай срспе, шмечают илеггеггл лыгугг|леэиэ— шабы, умеренная нлн сильная, особенности ллелхв —. тонкая, плотная или рыхлая, гладкая или скчаччатэя, а прн образовании ссалка указывак~т — слудный он или обитаний, плотный, рыхлый, слизистый или хлапыюшный.
(17 Нерелко рссг микроорганизмов сопровожзается поюшенисм запах», пигментациел среды, выделением газа. Последнее обнаруживают по образованию пены, пузьгрьков, а также с помощью гпоплавко⻠— маленьких, запаяннмь с одного конца трубочек. Поплавок помешают в пробирку юпвлнным кон!!ом «мрх перел сгсрили юцис й среды н следят, чтобы он полностью бьш заполнен срелой В сл)чае выделения шза он сюшливается в поплавке в виде пузырька. Для описания характера роста микрооршнвзмов а жилках средах их выращишкп па МПЬ нли на другой среде, обеспечивающей хороший рост. 8.2.
ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА Характеристика фшислого-биохимических особеииосшй мнкрооршнвзмов гвю!ючаст в себя описание нт споссбнгютп расти на разных пнтательныл сретлы н вызывать определанные превращения веществ, входящих в состав этих орел. У'гн гывают нспальзошннс разли'гных соелино<нй углерола, азота н серы, отношение к молекулярному кислороду, способность образпвывап антнбношссюгс вециствв н проявлять фермсн ею явную активность в отнопгсннн олрелелен! Мх субстраток В ряде случаев определякгт чувствительность микроорганизмовов к тетг нли нямм юпибистикам.
8.2.1. Использоеание соединений углерода Микроорганизмы характеризуются неодинаковой способностью использовать различные соединения углерода для конструктивного и энергспггсского метаболизма. Чтобь! выяснить возможность рюта микроорганизмов за счет тех или иных углеродсолержащнх веществ, их обычно выссяакн иа синтетические среды, содерлюшне в ка !естес единственного источника >тлеропа различные ьюно-, Лн- н полпсахартщы, многаатоьгные спирты, органические кислоты, углеводороды.
Из углеводов и многсатомных спнрюв испиты шюг, кюс правияо, слелуюшне сою!ниенна: арабинозу, ксилозу, рамп!ну, глюкозу, фруктозу, мвннозу, галакгозу, сорос!у, сахарову, лактозу. млльтозу, трсгалозу, цедчобиозу, рафннозу, декстрнн, «р пмал, ннулнн, целлкюозу, глицерол, эршрцтол, манннтол, дульпнтол, сорбнтол, инознтсл, салнцнн Определение слособаос нлкрооргввлзмав нсполыова углеводы н слюны.
1"оювяг сенс най фон среди, который тасю имеет следующий сссшв (г/л); легион — 5,0; КгН Рог — 1,0; !юла лнстнлз резанная. В завнсннссг ат физиологических сссбсшюснй и рсорганк ьгав можно лр менять иной сссшв фона. Так, на ример, дл» «орл нсладсбн их баю срля рекомснд!сгся талал фоновая средз (г/лй лепгон — 3,0; НаО- 2 5, зола л и лггеровангия, а вгя а гнномнцсгсв среда состава (г/л)' (НН0,50 2,6: КН РО - 2,4; КгН Рог Знто - 5,6; МЗ50 7Нто — 1,0; распюр и крозлсьг.'гнтов О,! чл: вола а стюшлр ванная. Распюр м «роэлементов (гу Снбо 5Нго — 0,64; Резо,. 7НгО.
-0 Н; Млшт 4Нго — 0 70; Кцзог 7Нто — 0 15; вола югспгюнихвлнаяв !00 Раствор ~оюып атлельно н хранят лрн тем юратуре 3 5'С. Рсст ынкрюргангтзиов на средах с углеводами ш!н многоатомными спиртамн часто сопроволлаетс» накоцлениеь! оршначсскнх кислОт, нейтральных продуктов, ! азов. Образо!анне кнсчот регистрируют по изменению РН среды. 116 Рис.
8.6. Накопление газа в поплавке: а — рост кулыуры сопровождается образованием газа; б— газ не образуется Для этого к основному фону добавляют индикатор из расчета 2 мл 1,6%-го спиртового раствора на 1 л среды. В качестве индикатора применяют бромтимолблау, который изменяет окраску от желтой к синей в интервале рН 6„0 — 7,6, или бромкрезолпурпур, изменягощий цвет от пурпурного к желтому в интервале рН 6,8 — 5,2. «Основной фон» разливают в пробирки по 8 — 10 мл, опускагот на дно каждой пробирки поплавок и стерилизуют при 1,0 ати.
а б Способность микроорганизмов использовать углеводы и многоатомные спирты можно определять и на плотных средах. В этом случае стерильный раствор углевода или спирта добавляют в стерильную агаризованную расплавленную среду, тщательно перемешивают ее и разливают в стерильные чашки Петри. После того как агар застынет, дно чашки Петри с наружной стороны делят на секторы чернилами или карандашом гфломастером) по стеклу. затем каждую цз исследуемых культур микроорганизмов высевают петлей, проводя радиальный штрих 1рис.
8.7). В качестве посевного материала используют густые суспензии клеток, которые готовят смывом культур с поверхности скошенного агара. Продолжительность культивирования 2 — 10 суг. О результатах судят по интенсивности роста в сравнении с ростом на контрольной среде„не содержащей испытываемых соединений )тлерода. Этот метод удобен тем, что позволяет в Рис. 8.7. Схема посева на плотную среду различных микроорганизмов (1, 2, 3,, 10) для определения способности использовать углеводы 119 Углеводы и многоатомные спиртгя готовят в вцле 10 — 40%-х волных растворов и стерилизуют отдельно от основного фона среды автоклавированием при 0,5 ати или фильтрованием.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
