А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 37
Текст из файла (страница 37)
Одни антибиотики — пенициллин, фумагиллин, бапитрацин и др. — подавляют рост ограниченного числа видов микроорганизмов. Другие — тетрациклины, хлорамфеникол, эритромицин„карбомицин — имеют широкий спектр действия, т.е. подавляют рост многих грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также риккетсий и некоторых вирусов.
Как правило, грамположительные бактерии более чувствительны к действию антибиотиков по сравнению с грамотрицательными, что связано со строением их клеточной стенки. Наиболее часто активные продуценты антибиотических веществ встречаются среди стрептомицетов, спорообразующих бактерий и мицелиальных грибов. Определение антибиотической активности микроорганизмов Существуют различные способы выявления аптибиотвческих свойств микроорганизмов. Многие из нвх основаны на способности антибиотиков диффувдировать в агарлзованные среды и образовывать зоны, в которых не растут тест-организмы. Величи- 129 Рис.б(3.0прслечеиисэнтггбггсгпгческойакзивггоспгиезсдом ср д «ул р ыл штрпховг — п П вЂ” е — гш ну ур, 7 — рсш р г е ' шгп шшсюп меи на зоны отсу!спятя роста ухазыввсз на степень льгивнссги данного а тг~бг с пгкэ е отношении зест-к)лшуры н зависит аг его конпснтрацви, э т«з;с от пло мости к)льтуры тес -орг; н зма, сосшеа н золцзинн с о а аризошнной среды, шнперигуры ин «убации, зш пельнссп днффьзнп и дру ич факторов В качестш шст-орпгнизьюв используют представителей различньп микрсоршнизмов, о пьрэюо очередь берю ййеЬепсЬгя сой (грэг~перинатальные Гюктерии), Зарлу)йевссш лэггш И'(импо.!шюпшп ныс Оаьтсргги), Влей)из л Ьгг(пили Юлей(яз шш«з (слорссбразуюшие бак!ерин), лгюлмл рплэ Ссшйсб гоги бгксллгел(г ег При нсобьалншютн шот слпшертный набор гссг-сршиизмов шшомшнл лрю нмн микгхюргангшчаьпг.
Лэгпшиоттгискую жшлносш чаше всего оылнлянн мепшами перпенлнкухяриых ш грязев и ам!юнит Сас ~ков. Метод лерлевлиюляриых ипрнхав. На пкштшшныи шар в налете Пе!ри высетвэзт штрихом г!Оедпола~вс ый нродуцснг энткбиотическаго вел!сшив Посс ш рнхам дшюг по диаметру чашки Петри. бремя инкубан пи г!Ооауцента зависит от скорости его руша.
После того как прсдуцспг вьб естст и образует антпбно ачес се эешег тсо диффуцанруююее в толпу агара, осроены кулярца к его оприх) подсеэают штреханп тест-оршнизмы, начинал от периферии чшлю Длл посева пепотьз)юг гусы суспснзии гссг организм в в «герилы от волопронолной сове. Чашгл гыдер кивают в термосшге при 20 — 30 'С с течение 2 — 8 сут в зависимости ог скорости роста теог-оргэнизчос. Нечушш~аеяьные к антнбиопгчсскоыу шшеству ест-органгг.гиы гестчг эбзппл пприли пролуцегпа ( олн а тнбноткк оказываю деи лане на шст-организм.
то (юст псслсзнсго булат набмолшын цээли оз пирам пролуленш (рнс в ! 3). чеы юлыэс зтс расстояние, пи Пшкю чуплеивглея тсстсршниз каплю этическому вешеству, об рамеьгоьп изучаеьгмьг продуцегпом. Э!от ыепм имеет, однако, сунгестэснный нешзшэток Продуцент анпгбиоги юс огс шглеспм тест-организм сырашнемо г а одной среле, пня известно, гпг не всегда одна и тэ ис средд слинскоэо благоприятна кш лля пргшуцсша н образо!изид ит. анзлбноплга, тэк и для рсста тест-организыа Метод эшрсвмх блочков предусматривает спользосанис !изныл ншюею,нь!л ср» дая вырешим э гфолугге а г нб кликал шсторншигмов. )О!я аыяезснил антибиошческпх смгйшв акпиюмицшон прслпашгасмый нргшупенг пира !шы г л нв орел слп уюгде!о шкзвш (г(л): гти кгтга — 30,0; КНлй — 5,5: Мйббч .
0,5; НаС! !.О К НРОг — 0.4, 2пбОэ — 0,002; (те30 — 0,002; агар — 25,0; вода гшспьтгягюшнная; рН 7, ! — 7,2 Среду стершгитухл прн 0,5 аш и рюзишют в сшргсгьные юшки Петри. (30 Рис. 8.14. Определение антибиотичсской активности методом агаровыхблочков: а — схема постановки опыта П вЂ” 4 — блочки с разнымн продупенгамя); б — зоны подавления роста тест-культуры под действием антибиотика, диффунднруюшего в агар из блочков После застывания агара продуцент антибиотического вещества высевают сплошным шзоном. Для зтого споры актиномнцета переносят петлей на агаровую пластинку, распределяют по всей поверхности шпателем и инкубируют при 28 — 30 С в течение 8 — 10 суг.
Затем стерильным пробочным сверлом (диаметр б — 8 мм) вырезают агаровые блочки с газоном актиномицета и переносят их на поверхность агаризованной среды, например МПА, только что засеянной тест-организмом. Агаровые блочки раскладывают по шаблону на равном расстоянии один от другого и на расстоянии 1,5— 2,0 см от края чашки мицелиелг вверх и плотно прижимах>т к агаровой пластинке. Для лу плей диффузии антибиотических веществ в толщу питательной среды, засеянной тест-организмом, блочки можно закладывать непосредственно в лунки, предварительно вырезанные тем же сверлом.
На одной чашке Петри с тест-организмом можно размесппь 4 — 5 агаровых блочков с различными продуцентами антибиотиков (рис. 8.14). Чапеки выдерживают ! ч при комнатной температуре щтя диффузии антибиотических веществ в толщу агара, затем помещают в термосглт при температуре, благоприятной лля развития тест-организма на сутки и более в зависимости от скорости его роста. Если тест-организм чувствителен к антибиотическому веществу продуцента, то после инкубации вокруг атаровых блочков образукпся зоны отсутствия его роста. Чем больше выделяется антибиотика и чем он активнее, тем больше будет диаметр зоны отсутствия роста тест-организма. Тест-организм, не чувствительный к антибиотическому веществу данного продуцента, растет по всей поверхности среды и даже вблизи блочка продуцента. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотическим веществам Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам удобно определять с помощью готовых бумажных дисков, пропитанных определенными антибиотиками.
Концентрация антибиотиков в дисках подобрана с таким расчетом, чтобы диаметры зон задержки роста стандартных тест-организмов были 28 — 32 мм. Исследуемые микроорганизмы выращивают на соответствующей плотной питательной среде. Готовят однородную суспензню клеток в стерильной водопроводной воде. В 1 мл суспензии должно содержаться около 2 млрд клеток 131 (определяют по сташщлу ь!Угнести).
Вносят ! ьш суспензии в пробирку с 2п мл стерильной расплавленной и сстузкениой до 5П'С агаризоваиной среды, наприь!ер МПК Ес»и микроорганизмы выращивали в жи!!кой питательной среле, та в апзр вносщ соответствующий обьем культуры. Содержвьгое пробирки быстро п тщательно перемен!ивают и нытгищюг в стерильную чашку Петри. Когда ареал застынет, на ге поверхноспг помещаап бумажные диски на равноы расстоянии друг от друга и на 1 5 --2 0 см сг крал чашки. Чашки выдерживают 2 ч при комнатной температуре лля лучшей диффузии антибиотиков в толщу агаризованной среды, а зшеь! 24 ч при 28 — 30'С, Если исследуемые микрсорганизмы чувствительны к двнним антибиотикам, то вокруг лпсьов образуются зоны отсщтлвня рос!в. Диаметр зоны измерюот миллиметровой' линейкой. Зона более 30 мм свидетедмтвует о высокой чувствительности ьпгкроорганизма к аптибиогикК а менее !2 мм —. о слабптг чувствительности.
Когда в распоряжении экспериментатора имеются растворы ыпибиглпческнх веществ или культуральные жлдкосп!, содержащие антибиагик, используют метгш с применением лунок в толще агзра. В атом слу гас в застывшей агариюгпппой среде, засеянной испьптемым микроорганизмом, сгериаьным пробстами сверлам (днаьияр б — 8 мм) деллют лунки на расстоянии 1,5 -2,0 см от края чашки. В лунки вносят растворы антибиотиков нлн кулшуральную жидкость. В тат мстгж позволяет также выявить способность к об(пас шзпию а! г!нбиотическлх вещеспз мик!юорганизмами, выращенными в жидкой среде.
Глава 9 СИСТЕМАТИКА И ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ 9.1. ОСНОВНЫЕ ПОНЯТИЯ И ПРАВИЛА НАИМЕНОВАНИЯ Описано несколько тысяч мелов микроорганизмов, слнако считают, что зто сосшвляет менее 1% от реачьно существующих. Нзученяе разнообразия мпкргюрганнзмсв составляет предмет систематики. Основной се зачачей являетсл создание сете!геенной системы, отражающей филогенепшесюге выимоопюшенпя микроорганизмов. До послепиего времени систематика ь!икроорганизмов базироваласыгревьпч!гественно на фенопгпичссках признаках: морфологпческпх, физиологических, биохимическгы и лр., долгому с!пгеству!вшие сиспшчы классификаиии носят в значительной степени искусственный характер.
Олнако они позво тают сравнительно леото идентифипировать некоторые вновь выделенные штал!мы микроорганизмов. Систематика включает такач раззявы, как кпксифика!гпя, нсыепклгту!я и идена!гфикашы. ГЫ гиликацил определяет пар!шок помещения ияаавилуумоа, облыпюгаю залаппай с епеиыо слисрслиссги, е сир лелепгые группы (таксоны). Еелеиюал ша прщстааляет собой свОд пгаалл папмеиоаапп» таксоьоа. 2В млкфилаццл сзвачает олрелезсиие прииазлежпсста язучасмого организма к таму или инОму заьгопу. 1'ермил такссиалпп часто ассслшуют «зь синоним систематики, спнака ииоша лол иим полипа!ог раьтел систел~атикн, включающий теорию «ласспфякшип.
учение а системе таксоиомичеекк «а егорий, пжнипах и сопалчинении шксонаа. ОснОвной' таг соио наческой каптагаев а ыик!юбвслагпп, как и в других биологических науках, 132 является еид — совокупность особей, характеризующихся рядом общих морфологических, физиолого-биохимических, молекулярно-генетических признаков. Под термином «ппамм» понимают чистую культуру микроорганизма, выделенную из определенного места обитания (воды, почвы, организма животного и т.д.).
Разные штаммы одного вида микроорганизмов могут различаться по некоторым признакам, например чувствительности к антибиотикам, способности синтезировать некоторые продукты метаболизма и т.д., но зти различия меньше, чем видовые. Понятие «штамм» в микробиологии и генетике несколько различаются: в микробиологии оно является более широким. Виды микроорганизмов объединяют в таксономические категории более высокого порядка: роды, семейства„порядки, классы, отделы, царства. Эти категории называют обязательными.
Предусмотрены также необязательные категории: подкласс, полпорялок, подсемейство, триба, подтриба, подрод, подвид. Однако в систематике необязательные категории используются довольно редко. Номенклатура микроорганизмов подчиняется международным правилам. Так, имеется Международный кодекс номенклатуры бактерий.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
