А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 34
Текст из файла (страница 34)
Раздельная стерилизапия рекомендуется в связи с тем, что сахара в присутствии фосфатов и других компонентов среды частично разрушаются н образуют соединения, токсичные для микроорганизмов. Стерильные растворы добавляют к основному фону в таком количестве, чтобы концентрация сахара (спирта) в среде составляла 1 г на 100 мл среды. Срелы засевыот суспензией клеток мик1юорганизмов и выдерживают в течение 1 — 5 сут при соответствую~ цей температуре. Медленно развивающиеся чикроорганизмы инкубируют в течение 7 — 10 сут. Рост или его отсугствие на среде с данным источником углерода определяют по помугнепию среды, образования~ пленки или осадка.
Изменение цвета индикатора указывает на образование кислых или щелочных (вследствие разложения пептона) продуктов метаболизма. Об образовании иза свидетельствует его накопление в поплавке (рис. 8.6). Резулывты наблюдений сравнивают с показателями роста в контрольной (фоновой) среде, не солержащей испытуемого источника углерода. Рис. 8 8 Опимтелепие способности микросргашммсв иссольювать гтлеволорслы: ъе -. юеы(à — Л лало г . чеиьииыюерг ав,впвпм — тя г яа л.мя л — и !имич ь у мтр одной чашке Петри одношюменяо проверить способность нескольких ьвшрооргаятймов исполшовюь тот или иной субе~раз Мноше микрооршнизмьг могут использовать в ю~честве еяинсггл и но го ис точняка углерода оргаяиы.*ские кеслыльс Дтя опрелеленш способности расти яа средах с органическими кислотами рекомецауется гшошая среда состава (г/л): (НН ) НРО, 0.5: М880, 7НтΠ— 0,2; НаС! — О,1; аггр — 15,0; органическая кислота в виде сели На илн К .
2,0; рН 6,8. До сирнтязапии к среде лобаитяил 20 мл 0,04%-го водного раствора ивзикатора мепырот, который в гггзтерыше рН 6,8 — 8,4 нзьгеняет окраску сгг желтой к красной. Срегу ршлшают в пробирки н старил неуют прн 1 аз и. Посев провсшвт уколом. Продсллопельность культивирования ст 2 до 14 сут в зависимсстя ог скорости роста микрсорганвзыов О яотреблеггтш оргаяических кислот свидегелычяует роог по уколу и изменение кислшнсстн срелы в шелочнуто сторону, что глчюливо эамшно по цвету индии.пора.
Некоторые микроорганизмы способны использовать и такие химически устойчивыс соемп~еяггл, как)елеводе(зады. Выюлпь способноеш ьгиьрсорганизьга акис.шть жгшкие нечиту!ие углеводоролы можно на пжиной среле состава (гувд К)ЧОз 4-0! КНгРОт 0,6; НазНРОт' 12НгΠ— 1,4; М! ВОт. 7НзΠ— 0,8; вы!!залеченный агар — 2,0; рН 7,2. Среду сшрилнзуюг в колбах при 1 ати и ралли. лают в чашки Петри тельным слоем. После того как среда застынет, в центре атаровой пластинки вырезают лунку. Для атой дели можно воспояьзовап:ся про(ючиым сшрлом (диаметр 8 — 1О ым), которое прелгарительно сгерилизу ип в пламени горелки. Микроорганизмы высевают раднальными ппрювми от лунки к периферии чашки (рис. 8.8). В лувку вносят 2 — 3 капли нсследуемогс у!яееодорода (стсрилизукл фильтрованием).
На чашке с одним углеводородом можно провершь роог нескольких микроорганизмов. Чашки помешакп в термостат с!рого горизонтально, не переворачивал. через 7 — 10 суг отмечают наличие вли стсугсп~гге раста по штриху в стивненпи с контролем — ростом на среле без !тлеволорода. 120 8.2.2. Использование соединений азота Для определения способности микроорганизмов использовать те или иньге соединения азота их выращивают на соответствующих питательных средах. Использование органических азотсодержащих веществ Многие микроорганизмы способны усваивать азот органических соединений, например пептонов, аминокислот и белков. В процессе ферментативного гидролиза белка освобождаются аминокислоты, которые используются клеткой непосредственно в процессах биосинтеза, а также подвергаются расщеплению в результате дыхания или брожения до более простых соединений.
Поэтому разложение белка микроорганизмами (в процессе аммонификации) всегда сопровождается образованием побочных продуктов: аммиака, который выделяется при дезаминировании аминокислот„сероводорода, освобождающегося при разрушении серосодержащих аминокислот (цистина, цистеина, метионина), а также индола, который образуется при распаде триптофана. Обнаружение этих продуктов в культурах свидетельствует об использовании аминокислот микроорганизмами. Процесс аммонификации всегда сопровождается повышением щелочности среды. Обнаружение аммиака.
Способность микроорганизмов образовывать аммиак можно выявить при их росте на мясопептонном бульоне. Для этого МПБ разливают в пробирю1 ло 8 — 10 мл в каждую и стернлизуют цри 1 ати. После посева под ватной пробкой зкренляют узкую стерильную полоску лакмусовой бумаги (стерилизукзг, поместив в чашку Петри, в автоклавс прн 0,5 ати) так, чтобы она не соприкасалась с питательной средой (рис. 8.9).
Пробку рекомендуется заворачивать в полиэтилен, чтобы затруднить глстучнвацне аммиака. При образовании аммиака красный лакмус синеет. Если в качестве срелы используют 4%-ю цсптонную воду, то образование аммиака выявляют с помощью реактива Несслера (приготовление реактива см. в приложения 5). На фарфоровую пластинку помещают несколько капель культуральной жидкости н добавляют к ним каплю реактива Несслера. В присутствии следов аммиака жндгюсть окраьчнвается в желтый цвет, при большом количестве аммиака образуется коричневый осадок. Обнаружение сероводорода.
Выявление способности бактерий продуцировать Нт8 основано на реакции образования сульфндов металлов. Наиболее распространенный снособ — проба с уксуснокислым свинцом. Микроорганизмы выращивают в МПБ, солсржащем 0,01% цистнна н ..нстенна, которые добавляют к стерильному бульону в виде ра:твора в подкисленной дистиллированной воде. Растворы цистина .
цнстсина стерилнзуют фильтрованием. После посева исследуемых бактерий нал средой намешают стерильную (стерилнзуют, помесгцв в чашку Петри нлн пробирку, в автоклаве при 0,5 атн) полоску эильтровальной бумаги, пропитанную раствором уксуснокнслого :винца (приготовление см. в приложении 5), укрепив ее под ватной .:робкой. Пробку пробирки заворачивают полиэтиленом, чтобы за- Рис. 8.9. Обнаружение сероводорода, образуемого микроорганизмами: ; — ночсрнсннс свинцовой бумаги; б — образование Гсз в толще среды 121 труднигь улеочиышге Нг5.
П!х»алжвтгльп сп, «улмггвгяюштниэ 7 — 1О суг. выделение сероводорода обиаружиыист по игмсрнению бумаги следствие абраэаыния супы(гила св ша. Белес четюге разул»таты наблюдгююя при нспольэовани среды слсдугашспл сосыва (г/ ) пепл н — 10,0, НаС1 — 5,0; цитпп НыгЕс — 0,30; а аР— 15,0; дРшх;сева» ы ояазат — 2,0 ил, вола ылопроводиал, рН среды 7,0 Срелу раэли ают в пробирки н сгеритнзуют пр 0,5 ати, после шсрилнзашги аллшивахгг и делаю посев ш рпхом О вьыелении Нгб сулят по почернению среды всх латвие абрэюаанш! сульфиэа жсл эв (рис.
В.О). Обыруженн» видала. Индел обпарудиы!аг па качесп синан гаиш!пи с рсакг шюм Эрлиха (с прлэсжсиие 5). Для вн ысшы видала иоыю нспатьтоыть различныс ораль МПБ с 001 % тркг ш)шн; 1й-ю казе овгта вену (г/!ОО ма' мосин — 1О; НэгНРО,. 07; НаΠ— О 3) илв 2--3% ю пептоиилю ад! (г/!ОО мл; понтон — 2 5; ЫагНРО, — О 2; НаС1 — 0,3); РН срс,г 7,2 — 7,4 Среды рахлин»от в пробирки ио  — 10 лш, с ргшизуют прн 1,0 ати (триптсфви лсбэшиаат к ст рильиому буяы иу в шше распюра, который гшовш слевуюигил~ абрахам! тршпафэн вносят в воду и прибавллип по «аллам 5— 10%-й ггаспг р НгОН до псиного егг рэстаарению р створ триптофана стерилизук 15 мии прг! 0,5 аш) и ээс ыгог алспсизней бвкгеркй.
Через 5 — 7 ст прамюят качси и ую ревкиию а присущими индии в куль урви в каицюэе — с рнльноя среде. Для это о на повсрхиосп среды. и псреиешиыя, палгешаюг 1 — 2 мл ргаюнаа Эрли. ха; появление красной окыккн свцаетсльствуст аб об!нювани и шпала. Субстратами аммонификацпи могут быль н балы простые органические соединения »эата, например мочевина. Ферлгентвтнвныи гилрапгэ мочсвпны до аммиака и углекислоты способны осуществяять микрооргвнязмы, обрыуюшие уревзу.
Образовавшийся аммиак испальзуеюя этими бактерняыи в качес ше источника »эата. Пгюцесс ышюннфикации ыочешгны сопровожшется сильным подшелачснием средЫ. Для выявленнл способности лпгкраорганпзмов использовать мачевину часта прниегшют среду слелуюшего светав» (г/л): (ННт)тСО -. 5,0; К!ПРО„- 0,5г яблочнокислый. лнмоннокислылЗ или випнокислый На — 5,0 Среду беэ мо гевины наливают в конические кыбы тонким спеем н стерилизукл при 0,5 ати. Отдельно готовят 20%-й раапюр моче»пни в подюншегшой дистиллированной воле и стерилизуют его фильтрованием пли авгактавированием при 0,5 ати. Мочевину добаюшкл к стерильной среде иэ такого расчет», пабы ее коицентрапнв в среде сосгаыяла 2%. Псюлс засева среды микроорганизмами под втгной пробкой укра пляк т и срильную полоску краснои лакыусовои бумапг.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
