А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 153
Текст из файла (страница 153)
Клеточный иммунный ответ лежит в основе воспалительных процессов, противовирусного, противоопухолевого и трансплантационноп> иммунитетов. Главную роль при клеточном иммунном ответе играют йитотоксические лим4одиты — Т-каплеры. В развитии клеточной реакции иммунного воспаления, представляющей собой сложную цепь межклеточных взаимодействий, участвуют макрофаги, Т-хелперы и Т-эффекторы и другие типы клеток. Иммунный ответ в основном клеточного типа наблюдается при отторжении органа, например кожи, пересаженной от одного человека к другому.
При пересадке кожи анти- гены донорских клеток связываются с антителами клеток реципиента. Клетки реципиента, связавшиеся с клетками донора, выделяют вещество интерлвйкин, привлекающее к месту пересадки кожи макрофагов. Кроме того, клетки реципиента, связавшись с клетками донора, начинают усиленно расти, делиться и производить все новые антитела против чужеродного антигена.
В результате пересаженный участок кожи разрыхляется, под ним скапливается гной и пересаженная ткань отмирает. Во время внутриутробного развития некоторое количество антител из крови матери попадает в кровь плода и возникает нассивний иммунитет. Своеобразным вариантом создания пассивного иммунитета является введение больному антисыворотки, например в случае попадании в организм большой дозы антигена в виде яда при укусе ядовитой змеи. Змеиная антисыворотка готовится из крови какого-нибудь животного, чаще всего лошади, периодически получающей змеиный яд в малых дозах.
Организм лошади вырабатывает при этом антитела, которые при введении их человеку в виде препарата антисыворотки способны обезвредить антиген — змеиный яд. 47.1.4. Аллергия Иммунный ответ организма может быть не только механизмом защиты. Он может также служить причиной патологических процессов. Аллергией называют неадекватную иммунную реакцию на безвредные вещества, содержащиеся н окружающей среде, пищевых продуктах и лекарственных препаратах. Это может быть пыльца растений, молоко, шоколад, некоторые антибиотики и многое другое. Антиген, способный вызвать сенсибилизацию организма и индуцировать в нем аллергическую реакцию, называют аллергенол. Обычно впервые попавший в организм аллерген не вызывает болезненных симптомов, но запускает иммунную реакцию, так что при повторном его проникновении развивается вторичная реакция.
Аллергическая реакция может быть очень сильной и сопровождаться повреждением различных тканей организма. В зависимости от преимущественной роли тех или иных патологических механизмов в развитии аллергических реакций их делят на 4 основных типа. Одними из самых распространенных являются аллергические реакции тина 7, или аиа4илакти ческие. Их обычно вызывают экзогенные аллергены — пыльца цветущих растений, пищевые аллергены и др.
Такие аллергены при первом контакте с организмом активируют особую субпопуляцию специфических Т- хелперов, которые в свою очередь активируют В-лимфоциты, вырабатывающие антитела 1яЕ. Для развития анафилактических реакций большое значение имеет наследственная предрасположенность к гиперпродукции антител 1яЕ в ответ на сенсибилизацию определенным аллергеном, поэтому у близких родственников часто бывает аллергия на один и тот же фактор.
Лабораторная диагностика аллергий проводится с учетом механизмов аллергических реакций. Прежде всего определяют тип аллергии и идентифицируют аллерген. С этой целью, например, при реакциях анафилактического типа ставят кожно-аллергические пробы с аллергенами из стандартных наборов — пищеных, лекарственных, пылевых, пыльцовых и др. В месте кожной пробы через 25 — 40 мин возникает покраснение. Выраженность этой реакции зависит от степени сенсибилизации организма. Дальнейшая диагностика при реакциях типа 1 заключается в выявлении антител, относящихся к классу 1яЕ и содержащихся в сыворотке крови. 47.1.5. СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ Реакции иммунитета легли в основу лабораторных методов диагноспаки инфекционных и неинфекционных заболеваний. Так, они используются для идентификации возбудителей болезней и других антигенов, для выявления специфических антител, определения групп крови, подбора адекватного донора при пересадке органов и тканей.
Серологические реакции, или реакции между аитителалщ и антигеиал~и И ицго„ применяют для выявления неизвестного антигена или антитела с помощью известного антитела или антигена соответственно. В диагностических целях серологические реакции применяются для серодиагностики инфекционных заболеваний — выявления антител с помощью набора известных антигенов и для определения вида или серовара микроорганизма (антигена) с помощью диагностических антисывороток. 517 Серологические реакции дают возможность судить о динамике накопления антител в процессе болезни и об акгивности (напряженности) иммунитета, возникающего после профилактических прививок, например вакцинаций. Серологические реакции характеризуются специфичностью и чувствительностью. Специфичность — это способность антигенов реагировать только с гомологичными антителами.
Чувствительность измеряется минимальным количеством антигенов или антител, которое может выявить данная реакция. Основными методами оленки иммунного стоп>уса человека являются: оценка функциональной активности фагоцитируюших клеток; титрование лизоцима в слюне; титрование комплемента сыворотки крови; определение спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-РОК) и с эритроцитами барана, обработанными антителами и комплементом (ЕАС-РОК); иммунофлюоресцентная идентификация Т-хелперов и Т-супрессоров; радиальная иммунодиффузия по Манчини.
Так, для титрованием лизоцима в слюне готовят ряд послеловательных разведений слюны в пробирках и в каждую из них вносят по ! мл суспензии суточной культуры М1сгососсив !игеив, содержащей 1 млрд клеток/мл. После инкубации в термостате в течение 3 сут определяют титр лизоцима по последнему разведению, в котором наблюдается полный лизис бактерий в виде просветления. Более точную оценку активности лизоцима можно проводить, измеряя спектрофотометрическим методом оптическую плотность микробной взвеси после инкубации ее с разведениями лизоцима.
Пользуясь калибровочными кривыми, активность лизима можно выразить в мкг/мл. Уровень содержания лизоцима в слюне здоровых людей составляет 50 — 70 мкг/мл, в сыворотке крови — от 5 до 20 мкг/мл. Для выявления и иден>пи>/>икании специ>/>оческах антигенов пользуются различными вариантами реакций агглютинации, преципитапии, иммуноэлектрофорезом, иммунофлюоресце>ггным и иммуноферментным методами, радиоиммунологическим анализом.
Так, применение иммунофлюоресцентного метода обнаружения бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах основано на использовании флюоресцирующих антител (сывороток). Данный метод относится к экспресс-диагностике. Приготовление сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.
При прямом методе Кумбса специфические флюоресциру>ощие антитела образуют комплексы с микроб- ными антигенам, которые светятся при люминесцентной ьшкроскопии препаратов. Недостатком прямого метода является необходимость приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сьпюроток против каждого изучаемого антигена. Непрямой метод предусматривает использование толысо одной универсальной антиглобулиновой сыворотки, содержащей антитела только против кроличьих глобулинов.
Диагностические антисыворотки, полученные пугем иммунизации кроликов, также содержат кроличьи глобулины, поэтому они в качестве ангигенов реагируют с флюоресцирующей антиглобулиновой сывороткой и вместе с тем в качестве антител соединяются со специфическими изучаемыми антигенами микроорганизмов. При этом на образующемся комплексе «специфические антитела + исследуемый антиген» фиксиру- 5!8 ются антиглобулиновые антитела, вызывая его свечение при люминесцентной микроскопии.
В целях выявления слеилфическвх антител применяют реакции агглютинации, непрямой гемагглютинапии, преципитации в геле, лизиса, связывания комплемента, реакцию Кумбса, флоккуляции, торможения гемагглюптнации, антистрептолизиновую реакцию и иммуноферментный анализ. Последний метод является одним из наиболее чувствительных для выявления специфических антител. Специфический антиген адсорбируют на поверхности лунок из полистирола.
Фиксированный в лунках антиген инкубируют с испьпуемыми человеческими сыворотками. После отмывания от несвязавшихся белков связанные иммобилизованными анпигенами иммуноглобулины выявляют с помощью антнвидовой (античеловеческой) антииммуноглобулиновой сыворотки, к антителам которой ковалентно прикреплен фермент — пероксидаза. После инкубации с субстратом (пероксидом водорода) и индикатором (диаминобензидином) оценивают ферментативную активность по интенсивности окраски. Интенсивность окраски, пропорциональную количеству сорбированных на антигене антител, можно оценить визуально или на спектрофотометре.
В данном методе удобна универсальность меченого реагента, позволяклцая выявлять антитела к разным антигенам. ПРИЛОЖЕНИЯ ПРИЛОЖЕНИЕ 1 ПРИМЕРНАЯ ПРОГРАМ)ИА ПРАКТИЧЕСКИХ ЗАНЯТИЙ ПО МИКРОБИОЛОГИИ ДЛЯ СТУДЕНТОВ БИОЛОГИЧЕСКИХ ФАКУЛЬТЕТОВ УНИВЕРСИТЕТОВ Про~рал|ма разработана для проведения практических занятий по микробиологии для студентов всех специальностей биологических факультетов и вузов. Программа включает следующие темы лля изучения: Тема 1. Микроскопические методы исслелования микроорганизмов (занятия 1 — 3).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
