А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 151
Текст из файла (страница 151)
Для получения отдельных колоний дрожжей, смытых тампонами с рук, штрих на чашке Петри с сусло-агаром распределяют по всей поверхности чашки бактериологической петлей методом «истощающего штриха». Делают контрольный высев на сусло-агар суспензии дрожжей, исттользованной в эксперименте, бактериологической петлей методом «истощающего штриха». Засеянные чашки со средой инкубируют в течение 3 сут при температуре 30 "С.
Выросшие колонии на чашках просматривают, определяют интенсивность роста — скудный, умеренный или обильный. При возможности подсчитывают количество колоний ца чашках. Делают препараты «раздавленная капля» из колоний дрожжей в чашках 1б, 2б, Зб и 4б, а также дрожжей рабочей суспензии и просматривают их с объективом 40 к. Делают выводы о способах возникновения и путях распространения экзогенной инфекции. Материалы, оборудовапие, посуда, реактивы 1на 4 студентов) Пробирки — 2 шт.; колба на 500 мл; сусло-агар; 10 чашек Петри; микроскоп; по- кровные и предметные стекла; питгцст; стерильные ватные тампоны на деревянной палочке — ! О.
План выполнения задачи (9 ч) Занятие 1. Приготовление и стерилизация питательной среды и воды. Засев дрожжей в пробирку. 509 Занятие 2. Контрольный тест для доказательства чистоты рук. Моделирование процесса возникновения зпилемии. Выделение культуры возбуцитсля «инфекционного процесса». Занятие 3. Обработка рсзультатов работы по выделению культуры возбудителя «инфекционного процесса». Зачет.
ЗАДАЧА 3. ПРЯМОЕ ВЬДЕЛЕНИЕ ПАТОГЕНА Известно, что не существует такой питательной среды или такого сочетания физико-химических условий, в которых могли бы расти все разнообразные типы микроорганизмов, встречающиеся в природе. Следовательно, любая срсла, полхолящая для роста какого-то определенного организма или группы организмов, будет для них в некоторой степени селективной, или избирательной, потому что в ней развитие всех других видов будет невозможно или в значительной степени подавлено: в одних случаях — в связи с нехваткой необходиьгых компонентов, а в других — с наличием ингибирующих веществ. Если все пищевые потребности организма известны, то можно подобрать условия, наиболее благоприятные лля развития именно этого организма, что позволит выделить его из такой смешанной популяции, в которой он представлен лишь незначительным количеством особей.
Из природных местообитаний — почва, вода, воздух, организм человека или зкивотного — можно избирательно получать те или иные виды микроорганизмов путем прямого выделения либо путем обогащения (см. гл. 6). Прямое выделение проволят методом рассева смешанной популяции микроорганизмов по поверхности твердой питательной среды. В результате распределения по поверхности среды конкуренция между клетками различных видов за питательные вещества существенно уменыцается, и в этих условиях даже сравнительно медленно растущие организмы могут формировать колонии. Прямым высевом материала из природных местообитаний на чашки с селскгивпой средой псльзуются в тех случаях, когда хотят выявлять сравнительно много видов микроорганизмов, способных расти в данных условиях.
Д~и получения культур из смешанной популяции яутем обогаиГеяия используют посев материала в жилкую селективную (элективную) срелу, в которой различныс организмы постоянно конкурируют лруг с другом за питательные вещества. В результате в таких накопительных культурах из всех членов внесенной в среду популяции, способных расти в данных условиях, постепенно отбираются те виды, которые растут в данных условиях с наибольшей скоростью. Получение патогенных или условно патогенных микроорганизмов непосредственно из организма или из выделений, инфицированных болезнетворными микроорганизмами, часто проводят с применением метода прямого выделения. Используют большое количество различных видов селективных срец.
е«««««««. 'у у - б р «р века методом прямого выделения с использованием плотных селсктивных сред. Ход выполнения задачи Микроорганизмы и их культивирование. В работе используют бактерии огарау1ососсиз аигеаз. Этот микроорганизм обитает в носоглотке человека и счи- 510 тается условно-патогенным. Х аигеиз выделяет энтеротоксин, является причиной некоторых видов пищевых отравлений, вызывает фурункулезы и т.и. Для получения бактерий из организма человека методом прямого выделения используют плотные селективные среды — агаризованную среду с маннитом и ХаС! и стафилококковую среду 110.
Агаризованная среда с манииглом и ИаС! содержит (г/л): пептон — 10„0; питательный бульон — 1„0; Р-маннит — 10,0; ХаС! — 75,0; феноловьпч красный— 0,025; агар — !5,0. Хлористый натрий ингибирует рост многих других форм бактерий. Об образовании кислоты из маннита свидетельствует желтый цвет, появляющийся в присутствии индикатора фенолового красного.
Селективный эффект стафилококковой среды 110 также основывается на действии 7,5%-го хлористого натрия, разжижении желатипы и сбраживании маннита. Среда 110 содержит (г/л): триптон — 10,0; дрожжевой экстракт — 2„5; желатина — 30; лактоза — 2,0; Р-маннит — 10„0; 1~1аС! — 75,0; К,НРО4 — 5,0; агар— 15,0. Отсев о. ашеиз для хранения в лаборатории не производится. Все использованные питательные среды с посевами, предметные стекла и т.п.
тщательно контролируются и после выполнения работы заливаются дезраствором и затем убиваются методом автоклавирования. Основным методом работы является метод выделеяия чисгной культура микроорганизмаа на плотной питательной среде. Для получения опытного материала используют студентов учебной группы. Выделение Я. аигеих из носоглотки человека. Готовят ватные тампоны на деревянной палочке, заворачивают их в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу. В чашки Петри разливают питательные среды — агаризованную среду с маннитом и ХаС! и стафилококковую среду 110.
С помошью ватного тампона из горла или внутренней полости носа извлекают исследуемый материал и сразу же проводят тампоном полосу (штрих) по поверхности агаризованной среды с маннитом и МаС1. Используя второй тампон, еще раз извлекают исследуемый материал и проводят тампоном полосу по поверхности второй среды — стафилококковой среды 110.
Полосу проводят тампоном не по центру чагнек, а ближе к их краю. Стерильной бактериологической петлей распределяют исследуемый материал из полосы по всей поверхности каждой среды на чашке методом истощающего штриха. Используя вторую чашку с соответствующей средой и стерильную бактериологическую петлю, рассея материала истощающим штрихом продолжают по поверхности среды и в этой чашке. Засеянные чашки — по 2 с каждой средой, инкубируют в термостате при 35 С в течение 48 ч. Далее чашки извлекают из термостата и оставляют еще на 24 ч в лаборатории на свету при комнатной температуре для дополнительного биосинтеза в колониях стафилококков бактериальных пигментов. Обнаружение хауактериых колоний Я.
ам еиз. После эксгюнирования выросших колоний в течение 24 ч в лаборатории на свету при комнатной температуре чашки с каждой из сред исследуют на наличие характерных колоний Х ашеяз. Агаризованная среда с маннитом и ХаС!. На этой среде условно-патогенные стафилококки У. аигеиз образуют крупные колонии, окруженные желтым кольцом (зоной), образовавшимся в результате реакции синтезированных при брожении маннита кислот с индикатором феноловым красным.
Другие виды стафилококков образуют на агаризованной среде с маннитом и ХаС! колонии 511 меньшего размера, окруженные пурпурной или красной зонами. Клетки из типичных колоний, окруженных желтым кольцом, красят по Граму. Положительное окрашивание клеток по Граму подтверждает принадлежность исследуемых бактерий к стафилококкам.
Ста(билококковая среда 110. На среде 110 условно-патогенные формы стафилококков образуют оранжевые колонии, в то время как непатогенные формы формируют белые колонии. Типичные пигментированные колонии пересевают в пробирки с агаризованной средой 110 и через 24 ч культивирования при 35 С красят клетки по Граму. Положительное окрашивание подтверждает, что исследуемые бактерии относятся к стафилококкам. На остаток типичной оранжевой колонии на чашке, из которой произвели пересев на скошенный агар, наносят каплю 0,25%-го спиртового раствора индикатора крезолового пурпурного. Изменение цвета колонии на желтый свидетельствует о процессе сбраживания бактериями маннита с образованием кислот.
В качестве контроля наносят каплю крезолового пурпурного на участок агаризованной среды на чашке, свободный от выросших колоний стафилококков. Для обнаружения пропесса разжижения желатины, вызванного действием протеолитических ферментов, па типичную оранжевую колонию наносят каплю насыщенного раствора сульфата аммония. Выдерживают чашку 1О мин при 30 С. О положительной реакции свидетельствует появление вокруг колонии зоны просветления. Материалы, оборудование, иасуда, реактивы (на 1 студея»яа) Пробирки — 2 штп реактивы для приготовления сред; чашки Петри — 4; микроскоп; предметные стекла; ватные тампоны на деревянной палочке в пробирках — 2; реактивы для окрашивания клеток по Граму.
План вынолнения задачи (15 — 18 ч) Занятие 1. Приготовление и стерилизация питательных сред, чашек Пе~ри, тампонов. Занятие 2. Вьшеление о. аи«еиз из носоглотки человека. Занятие 3. Обнаружение характерных колоний Х аи«еив. Зачет. 47Л. ИЗУЧЕНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ Иммунная система людей и животных обеспечивает специфическую защиту организма от генетически чужеродных молекул и клеток — бактерий, грибов, простейших, вирусов.
В кровеносной и лимфатической системах постоянно циркулируют компоненты иммунной системы — лейкоциты разных типов и производимые ими антитела. Задачей иммунной системы является распознавание и уничтожение чужеродных антигенов инфекционных агентов и химических веществ, попадающих в организм. Это обеспечивает постоянство внутренней среды организма. Реакции иммунной системы обладают несколькими характерными особенностями: ° намять — после того как впервые возникает иммунная реакция на определенный чужеродный фактор, иммунная система организма «запоминает» эпп фактор; повторные попалания в организм данного фактора переносятся легче, этим объясняется то, 512 что многими болезнями, например такими, как свинка, корь и оспа, человек болеет обычно олин раз в жизни; ° еле!!яг/~и«ность — каждая иммунная реакция направлена против определенного чужеродного агента; ° ьчолералгллость — специфическая инертность„отсутствие реакций на клетки и продукты жизнедеятельности своего организма, в отличие от выраженной реакции на чужеродные клетки и их продукты.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
