А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 146
Текст из файла (страница 146)
На обследуемой территории до 1000 м~ выделяют два участка по 25 м~. Один должен быть расположен вблизи источника загрязнения (выгребные ямы, мусорные ящики и пр.), а другой— в отдалении ог них. На каждом участке намечают 5 точек — четыре по углам и одну в центре участка. Таким образом, отбирают 1О проб (из разных мест исследуемой территории). Почву берут стерильным ножом на глубине 1Π— 15 см, образец массой 200 — 300 г помещают в стерильную банку или пакет и хорошо перемешивают. Следовательно, смешанный образец с каждого из двух выбранных участков должен иметь массу не менее 1 кг. Отобранные пробы анализируют в тот же день. Допускается хранение образцов почвы в лаборатории не более 12 — 18 ч при температуре 1 — 5 'С.
Из проб готовят навеску (30 г), которую вносят в колбу со стерильной водой (270 мл), и тщательно встряхивают в течение 10 мин. Из полученной суспензии готовят 5 разведений: от 10 ~ до !О 7. По 1 мл из двух последних разведений вносят в две стерильныс чашки Петри, после чего их заливают 10 — 15 мл расплавленного и остуженного до 45 — 50'С МПА, который тщательно, круговыми движениями псремешивакп. Среде дают застыть на строго горизонтальной поверхности. Посевы выращивают в течение суток при 37 С.
Затем подсчитывают число выросших колоний и определяют микробное число. Определение коли-титра, перфрннгенс-тнтра н количества термофильных бактерий. Для определения коли-титра различные разведения почвенной суспензии засевают по 1 мл в пробирки с 5 мл среды Кесслера или КОДЛ и инкубируют при 37'С в течение 24 — 48 ч. В дальнейьцем анализ проводят по схеме, применяемой для определения коли-титра воды (см. 46.1). Для посевов пользуются различными разведениями (чистую почву засевают от 1 г до разведения !0 ', загрязненную — от 10 з до 10 ~). При анализе загрязненных почв можно провести прямой поверхностный посев почвенной суспснзии в количестве О,! — 0,5 мл на среду Энцо (использу|от разведения до 10 ~).
Для определения перфрингенс-титра также пользуются разведениями почвенной взвеси (чистую почву засевают в разведении 10 ' — 10 ~, загрязненную— от !0 4 до 10 5). По 1 мл из выбранных разведений засевают в пробирки с 5 мл сгерильного обезжиренного молока или с железосульфитной средой Вильсона — Блсра, приготовленной ех 1етроге.
Посевы инкубируют при 43 'С в течение Т а б л и ц а 46. 5 Оценка санитарного состоянии почвы во основным микробиологическим показателям 24 — 48 ч, после чего учитывают результаты по харакгерному свертыванию молока (образование губчатого сгустка в верхней части пробирки и просветление сыворотки) или по образованию колоний С1озГгййит ре4 тделз в агаровом столбике среды Вильсона — Блера (колонии черного цвета различной интенсивности окраски, имеющие форму двояковыпуклой линзы, комочка ваты или «самолстикаь). Из колоний делюот мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют и вычисляют перфрингенс-титр.
Клетки С. рег7г1л8елз — подвижные (реже неподвижные) короткие толстые палочки с закругленными концами. Образуют овальные или круглые энлоспоры„расположенные центрально и придающие клеткам веретенообразную форму (споры также могут располагаться терминально и субтерминально). В мазках расположены одиночно, попарно, в виде цепочек или штакетообразных (параллельно друг к другу) скоплсний, грамположнтельны, каталазоотрицательны. Предельное разведение почвенной суспензии, которое дает на молочной среде размножение С. рег7гибепз, означает титр этого микроорганизма в почве. Для определения количества термогрильяых бактерий разведения полученной суспензии (10 ', 1О ~ и 10 ') по 1 мл вносят в чашки Петри, заливают из расплавленным и остуженным МПА, тщательно перемешивают.
Посевы инкубируют при 60 'С в течение суток, а затем подсчитывгпот количество выросших колоний и пересчитывают на 1 г почвы. Санитарно-микробиологическую оцснку почвы проводят по комплексу показателей, из которых наиболее важным является степень фекального загрязнения (табл. 4б.5). Материалы, оборудоваиие, посуда, реактивы Стерильные чашки Петри; стерильные пробирки; стерильные пипетки; стерильные банки или пакеты; нож, совок, колбы емкостью 500 мл; палочки стеклянные; пинцеты; петли бактериологические; вата; весы; микроскопы; стекла предметные н покровные; термостаты на 30 и 37 С. Вода водопроводная стерильная; среды: Энде, Кесслера или КОДА, МПА, полу- жидкая с глюкозой, стерильное обезжиренное молоко или среда Вильсона — Басра; свежсприготовленный раствор диметил-а-фенилендиамина, свежеприготовленный 3%-й раствор КОН; реактивы для окраски по Граму; Фуксин; 70%-й этансл.
ЗАДАЧА 3. АНАЛИЗ вяИКРОФЛОРЫ ВОЗДУХА Атмосферный воздух и воздух закрытых помещений значительно различаются по количественному н качественному составу микроорганизмов. Бактериальная обсеме- ненносп жилых помещений выше плотности бактерий в атмосферном воздухе, в том числе н патогенными видами, попадающими в воздух от больных людей н животных (капельным путем в составе аэрозоля, образующегося при разговоре, кашле, чихании, со слущивающимся эпителием кожных н шерстцых покровов, с пылью загрязненного постельного белья н зараженной почвы). Мнкрофлора воздуха формируется в основном за счет почвенных микроорганизмов, отличающихся большой устойчивостью к неблагоприятным факторалг внешней среды, таким, как высушнванне, ультрафиолетовые лучи солнечного света, колебания температуры и пр.
Обычно нз воздуха вьщеляют представителей рода 1гПсгососсиз, ВаеПйа еиьгПЬ, В. сегеиз гаг. тугом(ее, В. тееео!емеиз, различные виды Аспоотуеее, РетеППпт, АьрегрПие, Миеог н др. При оценке санитарного состояния закрытых помещений в зависимости от задач исследования определяют общее микробное число, наличие санитарно- показательных микроорганизмов (стафилококков, а- и р-гсмолитических стрептококков, являющихся показателями контаминации микрофлорой носоглотки человека). Кроме того, например, при исследовании воздуха медицинских стационаров (хирургические клиники, родильные дома) основное внимание направлено на выявление патогенных стафилококков, а также синегнойных палочек и других грамотрицатсльных условнопатогенных бактерий — возбудителей внутрибольничных инфекций.
На предприятиях микробиологической промышленности выявляют наличие и содержание микроорганизмов-пролуцснтов (Санг!Иа на гилрслизно-лрожжевых заводах и заводах по производству БВК, Азрегя(Ииз и споровые бактерии на ферментных заводах, Вас(Поз гйиг)лягеляз и сальмонеллы — при производстве бактериальных средств зашиты растений и борьбы с грызунами и т.д.).
Определение тех или иных патогенных или условно-патогенных микроорганизмов из воздуха проводят на специальных лифференциально-диагностических срелах. д ~я исследования микрофлоры воздуха используют различные метолы. Седпмептацнонпый метод (метод Коха, 1881) — основан на оседании бактернальных частиц н капель под действием силы тяжести на поверхности питательной среды открытой чашки Петри. Обычно производят перерасчет по Омелянекому: на поверхность 100 смз плотной среды оседает за 5 мин такое количество бактерий, которое содержится в !О л воздуха.
Однако позднее было определено, что этн показатели занижены в 3 раза. Метод не точен н абсолкп но не пригоден для атмосферного воздуха, где имеют место большие колебания в скорости его движения. Он может быть использован в тех случаях, когда отсутствуют более совершенные приборы илн нет электроэнергии. Фильтрационный метод (воздух пролувается через впдкость) — основан на улавливании бактерий в жгц!кости, которая затем может быль использована для посева на различные среды — прибор Дьяконова (1925) (рис. 46.2) и др.
Методы, основанные па осаждении микробных аэрозолей паром нлн распыленной жидкостью, — прибор Речменского (рис. 46.3) н пр. Методы, основанные па прнншше ударно-прнбнвпого действия воздушной струи с использованием специальных приборов, например прибора Кротова (195!) (рис. 46.4). Струя воздуха приходит через узкую клиновидную щель н с большой скоростью ударяется о влажную поверхность питательной среды. В резулыате улара находящиеся в воздухе аэрозоли, в том числе содержащие бактерии пылевые частицы н капли, прибиваются к поверхности МПА нлн электнвных сред. Производительность такого прибора составляет от 20 до 40 л/мин.
Подобные методы наиболее надежны и точны. 493 2 3781 ис. 46.2. Прибор конова в моди4зикации Шафира Рис. 46.3. Прибор Р 1 — стеклянный цилиь нос отверстие; 3, 4 — капилляры; 5— резервуар лля улавливающей жидкости; б — резиновая трубка; 7 — отверстие для забора улавливающей жилкости; 8 — стеклянная лопатка Рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
