А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 148
Текст из файла (страница 148)
Определение сальмонслл проводят в навеске продукта 25 г. Производят посев навески в 100 мл селенитового бульона. Посев инкубируют 24 ч при 37 'С. Затем производят высев истощающим штрихом на поверхность висмут-сульфит агара, инкубируют 24 ч при 37 С. Изолированныс колонии, характерные для бактерий рода Уп!топе11п (черные, с характерным металлическим блеском, с прокрашиванием участка среды под колонией в черный цвет; некоторые серовары образуют нежные светло-зеленые или крупные серовато-зеленые колонии), пересевают на среду Клиглера штрихом по скошенной поверхности и уколом в столбик.
Посевы помешают на 12— 1б ч в термостат с температурой 37 С. Все Юи1толеПа сбраживают глюкозу с образованием кислоты и газа, подавляющее большинство не сбраживают лактозу (кроме представителей двух видов). Для дальнейшей предварительной идентификации готовят препараты живых и Фиксированных клеток, окрашивают по Граму. К Ла)люпейа относят палочки с закругленными концами, в большинстве подвижныс, не образующие спор и капсул, грамотрицательные„оксидазоотрицательные. Делают вывод о возможном наличии сальлюнелл в исследуемом образце. Подробно полная схема идентификации сальмонелл описана в специальных руководствах по медицинской микробиологии. Определение наличия Жирйу7ососсих аигеяз. Из выбранных разведений исследуемых образцов продуктов берут по 1 мл и засевают в пробирки с 5 мл 6,5%-го солевого бульона.
Кроме того, основную 10%-ю взвесь продукта в количестве 0,2 мл наносят на поверхность желточно-солевого или молочносолевого агара и тшательно растирают шпателем. Посевы инкубируют 18 — 20 ч при 37'С. Чашки с плотными срелами оставляют еще на сутки при комнатной температуре (для прояаления пигмента).
Просматривают посевы на плотных средах. Из подозрительных колоний делают препараты, окрашивают по Граму. Проверяют наличие каталазы. Яарлу)ососсиз аигеиз — неподвижные коккн, расположенные одиночно, парами или гроздьями. Грамположительны, каталазоположительны, обычно оксидазоотрицательны. Из пробирок с солсвым бульоном делают высев на желточно-солевой (колонии имеют форму плоских дисков (диаметр 2 — 4 мм) белого, желтого, кремового, лимонного, золотистого цвета с ровными краями; вокруг колоний образуются радужное кольцо и зона помутнения среды) или молочносолевой агар (мутные, круглые, ровные, выпуклые колонии белого, кремового, желтого или оранжевого цвета 2 — 4 мм в диаметре), проводят предварительную идентификацию„как описано выше. Делают вывод о возможном наличии ЯадЬу1ососсиз аигеиз в исследуемом образце.
Полную схему идентификации золотистого стафилококка можно найти в специальных руководствах. Определение наличия Ргогеиз. Для выделения бактерий рода Рпйеиз производят посев по методу Шукевича: 0,5 мл взвеси продукта засевают в конденсациоцную воду свежескошенного МПА. Посевы инкубируют 18 — 20 ч при 37 С. Если на скошенном МПА наблюдается вползающий нежный вуалсобразный рост, сопровождающийся специфическим запахом, то из верхнего края выросшей культуры готовят препараты, окрашивают по Граму, выявляют подвижность.
К Ргогеиз относят прямые, подвижные (иногда встречаются неподвижные формы, лишенные жгутиков) палочки с закругленными концами, не образующие спор и капсул. Клетки склонны к полиморфизму, наблюдаются кокковидные и нитевидные формы. Грамотрицательны, каталазоположительны, оксидазоотрицатсльны. Делают вывод о возможном наличии бактерий рода Рго1еиз в исследуемом образце. Определение наличия сульфитвосстаиавливающих клостридий. Из выбранных разведений исследуемых образпов продуктов берут но 1 мл и засевают в пробирки с 9 мл расплавленной и охлажденной до 45 'С средой Вильсона— Блера, тщательно перемешивают. Посевы инкубируют 18 — 20 ч при 37 'С. Появление в среде черных колоний указывает на присутствие сульфитвосстанавливающих клостридий.' Из подозрительных колоний готовят препараты, окрашивают по Граму.
Проверяют наличие каталазы с помощью раствора перекиси водорода (30 г/дмз). Делают вывод о возможном наличии сульфитвосстанавливающих клостридий в исследуемом образце. Материалы, оборудование, приборы, реаюпивы Стерильные чашки Петри; стерильные пробирки; стерильные пипетки; петли бактериологические; скальпель; ступка фарфоровая с пестиком; лупа„бумага фильтровальная; вата; микроскопы; стекла предметные и покровные; весы; микроскоп; термостаты на 25, 30 н 37'С. Стерильный 0,85%-й раствор )ЧаС! (или вода волопроводная стерильная); среды: Эндо, Кесслера (или КОДА), МПА, Сабуро, желточно-солевой (или молочно-солевой) агар, солевой бульон, среды Клиглера и Козера, селенитовый будьон, висмутсульфит агар, среда Вильсона — Блера, полужидкая среда с глюкозой„свежеприготовленный раствор диметил-и-фенилендиамина; свежсприготовленный 3%-й раствор КОН; раствор перекиси водорода (30 г/дм'); реактивы для окраски по Граму; фуксин„ 70%-й этанол; бумага индикаторная универсальная.
ЗАДАЧА 5. САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРЕДМЕТОВ ОБИХОДА И РУК ПЕРСОНАЛА Изучение бактериальной загрязненности рук и различных предметов обихода производится в целях оценки санитарно-гигиенического состояния исследуемого объекта, установления путей распространения инфекции при эпидемиологических заболеваниях, лабораторного контроля эффективности обработки кожи Рук. В зависимости от цели проводимого исследования и характера контролируемых объектов в полученных смывах определяют: ° общую микробную обсемененность (обычно с пересчетом на 1 ем~ исследуелюй поверхности); ° наличие бактерий группы кишечной палочки, как показателей фекального загрязнения; ° наличие патогенных бактерий кишечной группы, обнаружение которых является безусловным показателем эпидемического неблагополучия; 501 ° наличие стафилококков и других микроорганизмов.
Сйаааб~и: ~а юа г г т гу предметов обихода. Ход выполнения задачи Подготовка еред и материалов. Подготовить к стерилизации (в расчете на ! студента): чашки Петри — 10 шт.; пробирки — 1О; пипетки на 1 — 2 мл — 5, на 5 — 10 мл — 3; салфетка марлевая 5 к 5 см (или ватный тампон на палочке)— 1 шт. Приготовить (состав и приготовление сред см.
в приложении 4): 0,85%-й раствор )ч'аС1 стерильный (или вода водопроводная стерильная) — 100 мл; МПА стерильный — 100 млй МПБ с 7,5%-м МаС1 стерильный — 10 мл; желточно-солевой (или молочно-солевой) агар — 20 — 40 мл; полужидкая среда с глюкозой — 30 мл (разлить в 3 пробирки по 7 — 10 мл); среда КОДА или среда Кесслера (нормальной концентрации) — 60 мл (разлить по 10 мл в 6 обычных пробирок), в каждую пробирку поместить по поплавку или комочку ваты; среда Энло — 20 — 60 мл (сразу после приготовления разлить в стерильные чашки Петри, дать застыть, завернуть в бумагу и оставить в холодильнике); висмутсульфит агар — 20 мл„селенитовый бульон — 1О мл.
Приготовление смывов. Для получения смывов пользуются стерильными ватными тампонами или марлевыми салфетками. В день взятия смыва в каждую пробирку с тампоном наливают 2 мл стерильной водопроводной воды или изотонического раствора хлорида натрия так, чтобы ватный тампон находился над уровнем жидкости. Марлевые салфетки 5 к 5 см заворачивают по одной в бумагу. К каждой салфетке готовят заранее пробирку с 2 мл стерильной воды для смачивания. Непосредственно перед взятием смыва пробирку наклоняют, увлажняя находящийся в ней тампон. В случае применения салфеток их захватывают кончиком стерильного пинцета, прокаленного над пламенем горелки, и увлажняют стерильной водой из пробирки.
Увлажненный тампон или салфетку дают в руки обследуемому, предлагая протереть им сначала кожу левой, а затем правой руки (от участков с меньшей к участкам с большей загрязненностью): тыл кисти, поверхность ладони, межпальцевые пространства, ногтевые ложа. По окончании процедуры салфетки или тампоны помещают в пробирку, в которой они находились. При взятии смывов с предметов, имеющих болыпую поверхность, исследуемый участок ограничивают рамкой-трафаретом площадью 25, 50 или 100 ем~.
Трафарет, изготовленный из проволоки„после каждого смыва и перед употреблением прожигают над пламенем горелки. При исследовании мелких предметов смыв делают со всей поверхности. Исследование смывов. Для определения общего числа микроорганизмов в исследуемом смыве к 2 мл воды, которая была использована для увлажнения тампона, прибавляют еще а мл стерильной воды. Тампон тщательно в течение 2 — 3 мин отмывают, получая исходное разведение. Из него готовят ряд последовательных десятикратных разведений. Затем из различных разведений смыва берут по 1 мл, вносят в стерильные чашки Петри, заливают расплавленным и остуженным МПА. Посевы выдерживают 24 ч при 37 С и 24 ч при комнатной температуре, после чего производят подсчет выросших колоний.
502 Устанавливают количество микроорганизмов в 1 мл исходного разведения смыва (для этого подсчитывают число колоний в чашке и полученную величину умножают на степень разведения смыва). Определяют количество микроорганизмов в 10 мл смыва, соответствующее общему числу микроорганизмов, находящихся на той площади, с которой произведен смыв (для этого величину, соответствующую количеству микроорганизмов в 1 мл смыва, умножают на 10).
01тределяют количество микроорганизмов на 1 см исследуемой поверхности (для этого величину, характеризующую количество микроорганизмов в 1 мл смыва, делят на число квадратных сантиметров, с которых сделан смыв). Для выявления бактерий группы кишечной палочки можно пользоваться прямым посевом исследуемого материала на чашки со средой Эндо. Материал, находящийся на тампоне, втирают в поверхность питательной среды Эндо. Кроме того, используют среды обогащения (среда Кесслера, КОДА и др.) — в эгом случае тампон, снятый с палочки, помещают в соответствующую жидкую среду. Посевы на плотных средах инкубируют при 37 'С, на жидких средах — при 43 С в течение 18 — 24 ч. На второй день из флаконов с признаками роста производят высев на чашки со средой Эндо. Дальнейший ход исследования полностью соответствует стандартной схеме выявления бактерий группы кишечной палочки (см.
разя. 46.1). Для выявления патогенных бактерий кишечной группы содержащийся на тампоне материал тщательно втирают в поверхность плотных питательных сред (висмут-сульфит агар и др.). После произведенного посева тампон и оставшуюся в пробирке жидкость-смыв помеща|от в среду обогащения (селенитовый бульон). Через 24 — 48 ч инкубации при 37 С просматривают посевы, сделанные на плотные среды, выявляя колонии, характерные для патогенных бактерий кишечной группы. Идентификация вьщеленных микроорганизмов с бактериями группы сальмонелл производится по методам, изложенным выше (см. разд. 46.4).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
