А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 150
Текст из файла (страница 150)
Значение рН среды Саборадо до стерилизации доводят до 5,6 — 5,8. Стерилизацию проводят при 0,5 ати 30 мин. Питательную среду, предназначенную для работы по вьщелению чистой культуры, расплавляют и разливают в стерильные чашки Петри из расчета 12 чашек (около 250 мл) на олин обьект изучения. Описание характера поражения. Перед выделением из яблока (или клубня картоФеля) культуры микроорганизма, вызывающего гниение, объект осп>рожно моют водой с мылом и характеризуют внешние признаки поражения — отмечают изменения цвета и консистенции пораженных микроорганизмами участков 506 поверхности кожицы.
Затем яблоко (или клубень) протирают ватой, смоченной 70%-м этиловым спиртом, и помещают в стерильный стеклянный сосуд. Выделение культуры возбудителя процесса гниения. Для выделения культуры возбудителя процесса гниения стерильной иглой или скальпелем делают в кожице яблока или клубня в месте поражения отверстие диаметром 3 — 4 мм. Из этого отверстия стерильно, с помощью бактериологической петли берут небольшой комочек гниющей ткани и переносят в пробирку с 6 — 7 мл стерильной водопроводной воды.
Содержимое пробирки энергично перемешивают встряхиванием. Выделение культуры возбудителя процесса гниения проводят с помощью бактериологической петли методом истощающего штриха. Используют 3 чашки Петри с соответствующей стерильной средой. Кроме того, для получения чистой культуры используют стеклянные шпатели Дригальского.
С этой целью петлю ( зеркальпе») суспензии гнилостных микроорганизмов наносят на поверхность стерильной среды в чашке Петри, а затем распределяют микроорганизмы сгерильным шпателем и, не обжигая шпатель в пламени горелки, распределяют материал по 2-й и 3-й чашкам Петри со стерильной средой. Засеянные чашки инкубируют в термостате при 30 'С в течение 2 — 3 сут (картофель) и 5 — 7 суг (яблоко). Выросшие колонии описывают и проводят изучение морфологии клеток возбудителя процесса гниения, используя препарат «раздавленная капля» и объектив х40 при работе с яблоком и, кроме того„ окрашенный фуксином препарат (объектив х100), при работе с картофелем. Экспериментальное заражение восприимчивого «хозянна».
Здоровое яблоко или клубень картофеля моют с мылом, протирают 70%-м спиртом и помещают в простсрилизованный спиртом сосуд. Затем раскаленной бактериологической иглой делают на поверхности здорового обьекта 2 колотых отверстия глубиной около 1 — 2 см. Иглу опять стерилизулот в пламени и с ее помощью заражают оба отверстия здорового яблока или клубня картофеля чистой культурой, выделенной из гниющих яблока или клубня соответственно. Зараженный объект инкубируют в стеклянном сосуде при 30'С в течение 5 — 7 сут (яблоко) или 2 — 4 сут (картофель). Изучение культуры возбудителя процесса гниения из организма экспериментально зараженного объекта.
Характер экспериментального поражения поверхности яблока или клубня описывают и сравнивают с таковым у спонтанно гниюпьих яблока или клубьи. Для подтверждения четвертого постулата Коха можно провести повторное выделение культуры, вызывающей гниение, из экспериментально зараженного обьекта. Выросшие колонии описывают и изучают морфологию клеток возбудителя процесса гниения под микроскопом. Однако достаточно провести только микроскопическое изучение гниющих тканей яблока или клубня и сравнить результаты с данными, полученными при выделенигл культуры возбудителя процесса гниения. Магиериа гы, оборудование, и»суда, реактивы (на 1 студента) Пробирки — 1 штд колба на 500 мл; реактивы для приготовления сред; 12 чашек Петри; гниющие и здоровые яблоки или клубни картофеля; микроскоп; покровные и предметные стекла; фуксин.
План выполнения задачи (12 ч) Занятие 1. Приготовление и стерилизацгля питательных сред, пипеток и шпателей. 507 Занятие 2. Подгоговка объекта, описание характера поражения. Вылеление культуры возбудителя процесса гниения. Занятие 3. Описание колонии и микроскопическое изучение выделенной культуры возбудителя процесса гниения. Экспериментальное заражение восприимчивого «хозяина». Занятие 4. Изучение культуры возбулителя процесса гниения из организма экспериментально зараженного объекта методом микроскопии. ЗАДАЧА 2. МОДЕЛИРОВАНИЕ ПРОЦЕССА ВОЗНИКНОВЕНИЯ ЭПИДЕМИИ НА ПРИМЕРЕ КУЛЬТУРЫ ПЕКАРСКИХ ДРОЖЖЕЙ Эпидемия — относительно кратковременное, быстрое и непрерывное распространение инфекционного заболевания в пределах какой-то совокупности организмов в определенном регионе. При этом регистрируется заболеваемость намного выше обычно существующего уровня.
Распространение инфекционного заболевания людей или животных на территории целой страны„континента или всей суши называется панделбией; Инфекционное заболевание, или инфекция (ог лат. шбесГю — заражение), представляет собой совокупность физиологических и патологических адаптационных и репарационных реакций, которые возникают и развиваются в макроорганизме в процессе взаимодейсгвия с патогенными микроорганизмами.
Формы инфекции разнообразны и носят различные наименования в зависимости от природы возбудителя, его локализации в макроорганизме и путей распространения. Так, экзогенная инфекция возникает в результате заражения патогенными микроорганизмами, поступившими в организм из окружающей среды с пищей, водой, воздухом, почвой, выделениями больного человека или микробоносителя.
Часто распространение инфекционных болезней происходит при несоблюдении элементарных правил гигиены. ибб»»б«~. б б ~ «б~ мии. Ход выполнения задачи Микроорганизмы и их культивирование. В работе используют культуры пекарских дрожжей Юассйаготусез сегегцгае. Дрожжи выращивают в пробирках с сусло-агаром в течение 3 сут при 30'С и хранят в холодильнике при 4'С.
Основным методом работы является получение культуры дрожжей с поверхности ладоней и пальцев человека методом смыва с последующим высеволг смытой суспензии на плотную питательную среду. Для опытов используют 3-суточную культуру о. сегеияае, полученную на сусло-агаре при 30 'С. Группу студентов разделяют на подгруппы по 4 человека в каждой. На подгруппу готовится 4 чашки Петри с сусло-агаром. Каждую чашку нумеруют. Все студенты подгруппы пцательно моют руки с мылом и стерилизуют их 70ебеб-и этанолом.
Контрольный тест для доказательства чистоты рук. Чтобы убедиться в отсутствии дрожжевых клеток на руках студентов, участвующих в эксперименте, делают смыв с ладоней и пальцев их правой руки. Первый студент с помощью стерильного ватного тампона на деревянной палочке, смоченного в стерильной водопроводной воде, делает смыв с поверхности ладони и пальцев правой 508 руки второго студента и проводит тампоном штрих по поверхности среды в чашке Петри 2а с сусло-атаром (делает контрольный высев). В свою очередь второй студент осуществляет аналогичный смыв с ладони и пальцев правой руки первого студента и делает контрольный высев в чашку 1а.
Третий и четвертый студенты производят смыв ладоней и пальцев правой руки друг другу по такой же схеме и делают контрольные высевы в чашки с сусло-агаром За и 4а соответственно. Моделирование процесса возникновения эпидемии. Делают суспензию из 3-суточной культуры дрожжей Х сегеиз)ае, выросшей при температуре 30 'С. Для этого в пробирку с выросшей культурой дрожжей, содержащую скошенный сусло-агар, стерильно вносят 3 — 4 мл стерильной водопроводной воды и с помощью бактериологической петли осторожно суспендируют дрожжевую массу с поверхности агара. Полученную суспензию переносят в стерильную пробирку.
Студенты, входящие в экспериментальную подгруппу, еще раз моют руки с мылом, протирают их 70%-и этанолом и дают высохнуть. Затем студент-инструктор или преподаватель протирает с помощью ватного тампона на палочке, смоченного суспензией Х сегеитетае„поверхность ладони и палытев правой руки первого студента. Он обменивается энергичнылт рукопожатием правой рукой со вторым студентом. Тот пожимает правую руку третьего студента, а он в свою очередь обменивается рукопожатием с четвертым студентом. Выделение культуры возбудителя «инфекционного процесса». Для выделения культуры дрожжей с поверхности ладоней и пальцев правой руки студентов используют стерильные ватные тампоны на деревянной палочке, слегка смоченные стерильной водопроводной водой. Студенты — первый и второй, третий и четвертый — делают смывы ладоней и пальцев правых рук друг друга и высевают смывы на чашки 1б, 2б, Зб и 4б соответственно.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
