А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Между прогреванием среды ставят в термостат при температуре 30 'С на 8 — 12 ч для прорастания жизнеспособных спор. Среды, не выдерживающие нагревания при 100 'С, прогревакгг более осторожно: при 60 — 80 С через каждые 8— 12 ч 4 — 5 сут подряд. Таблица 42 Однократный прогрев материала Завис мость продолжительности при температуре ниже 1ОО С известен стерилизации жидкости от объема под названием пастлеризаиия. Этот месосудов тод, предложенный Пастером, предназначен для уничтожения только бесспоровых форм микроорганизмов.
Следовательно, в подавляющем большинстве случаев он не обеспечивает стерильности. Пастеризаци|о проводят при 60 — 80 'С в течение 10 — 30 мин. Пастеризацию используют в пищевой промышленности для обработки молока, фруктовых соков, вина, пива и др. Стерилизация фильтрованием. Фильтрованием стерилизуют синтетические' среды строго определенного состава, которые содержат легкоразрушающиеся или летучие компоненты — витамины, аминокислоты (цистеин и цистин), белки, ароматические углеводороды, антибиотики и др.
Фильтрование жидкостей осуществляют через мелко- пористые материалы, легко адсорбирующие клетки микроорганизмов: асбест„ целлюлозу, фарфор, каолин и т.д. Стерилизующими фильтрами теоретически считают такие, размер пор которых не превышает 0,7 мкм. В практике же пригодность фильтров для стерилизации устанавливают путем пробной фильтрации через них суспензии какого- нибудь мелкого микроорганизма, например ЮетгаГ1а л~агсееселк Для проверки на стерильность фильтрат в большом количестве высевают на питательную среду. Если в течение 5 сут тест-организм не вырастет, фильтры могут быть использованы для стерилизации. Широкое распространение получили мембранные фильтры.
Это диски разного размера, диаметра, напоминающие бумажные. Их готовят на основе нитроцеллюлозы. Мембранные фильтры в зависимости от величины пор применяют для фильтрования и стерилизации. Для стерилизации используют фильтры с номера 1 до номера 4 фирмы «Владипор» (Россия), фильтры с номера 5 до номера 10 фирмы «СИНПОР» (Чехия) и марок ЪТ, УМ, Ъ'С, Я.О8, Я.НА, 1)А фирмы «МИЛЛИПОР» (США). Плотные диски, изготовленные из смеси асбеста с целлюлозой, называются фильтрами Зейтца. В зависимости от диаметра пор они обозначаются разными индексами: ЕК вЂ” поры диаметром 1,5 — 1,8 мкм; ЕК8 — 1,2 — 1,5; ЕК8-1— 1,0 — 1,2; ЕКР— 0,8 — 1,0 матч. В России выпускают асбестовые фильтры марок Фт и СФ.
Стерилизующими являются СФ-3 и СФ-4. Асбестовую пластинку помещают в специальный держатель, который обычно изготавливают из нержавеющей стали, и креттко зажимают винтами между верхней (цилиндрической) и нижней (воронкообразной) частями держателя. Трубка нижней части держателя через резиновую пробку проходит в колбу Бунзена Нередко весь этот прибор в собранном виде называют фильтром Зейтца. 50 Для стерилизации используют стеклянные пористые фильтры, а также изготовленные из каолина с примесью кварцевого песка— «свечи» Шамберлана и из инфузорной земли — «свечи» Беркефельда.
Пористость первых обозначается буквой 1 с цифрами от 1 до 13 соответственно уменьшению диаметра пор фильтра от 9 до 1,2 мкм. Мелкопористые «свечи» обозначаются маркой В, крупнопористьте — Г. Фильтры Беркефельда обозпачатот буквами У, М, %', что соответствует следующим размерам пор (мкм): 8 — 12, 5 — 7, 3 — 4. «Свечи» н специальные держатели с зак- с б репленными в них асбестовыми фильтрами герметически соединяют с колбой Бунзена Рис. 4 3 ~риоорыдлл для фильтрации в вакууме (рис. '1.3).
Перед стерилизации фильтРованием: употреблением фильтры, их держатели и при- а —. со стеилииимм дсРжетелем; б— с металлическим держателем емник Фильтрата должны быть простерилизованы. Мембранные фильтры стерилизуют автоклавированием при 1 ати 15 мин или длительным кипячением. Держатель вместе с резиновой пробкой заворачивают в бумагу и автоклавируют при 1 ати 20 — 30 мин.
Фильтры Зейтца автоклавируют в собранном виде. «Свечи» стерилизуют вместе с резиновыми пробками в автоклаве. Колбу Бунзена закрывают ватной пробкой, в отводную трубку вставляют тампон и стерилизуют горячим воздухом — сухим жаром. 4.2. СТЕРИЛИЗАЦИЯ СТЕКЛЯННОЙ ПОСУДЫ Основной способ стерилизации стеклянной посуды — обработка сухим горячим воздухом при температуре не вьпце 180'С в течение 1 — 3 ч (табл. 4.3). При этом погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Стерилизацию осуществляют в специальных суховоздушных (сухожаровых) стерилизаторах и сушильных шкафах, приспособленных для стерилизации. Они различаются по форме и способам обогрева, но имеют сходное устройство. Их делают из термостойких материалов — обычно из металла и асбеста. Внутри стерилизатора имеются полки для размещения посуды, а наверху — отверстие, в кото- Условия стерилизации стеклянной ром с ~томошью пробки укрепляют тер- посуды сухим жаром мометр.
У стецки стерилизатора (шкаФа) или вблизи греющей поверхности температура всегда значительно выше, чем внутри, поэтому ртутный шарик термометра должен находиться внутри шкафа на расстоянии 6 — 8 см от верхней стенки. В верхней части сушильных 51 шкафов имеется также отверстие для вентиляции, которое при стерилизации закрывают. Стерилизаторы и шкафы с электрическим обогревом снабжены тсрморегулятором, обеспечивающим автоматическое поддержание необходимой температуры. Подготовка посуды к стерилизации.
Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после прогревания. Посуду развертывают непосредственно перед употреблением. В верхнис концы пипеток вставляют ватные тампоны. Торчащие из пипеток волокна ваты сжигают в пламени горелки. Пипетки заворачивают в длинныс полоски бумаги шириной 4 — 5 см. Обмотку начинают с оттянутого конца и постепенным движением бумаги по спирали заканчивают у когща с ватным тампоном.
Завернутые пипетки для предохранения бумаги от загрязнения и разрывов перед стерилизацией упаковывают по несколько штук вместе или помещают в специальные металлические или картонные пеналы. Чашки Петри обычно заворачивают в пакеты по 2 — 4 штуки, шпатели — по отдельности, но затем; как и пипетки, их объединяют в общий сверток. Колбы, пробирки и трубки Бурри закрывают ватными пробками.
На пробки можно надеть бумажные колпачки, предохраняющие горлышко от пыли. Стерилизация. Посуду, подготовленную для стерилизации, загружают в стерилизатор (или сушильный шкаф) нс слишком плотно, чтобы обеспечить циркуляцию воздуха и равномерный надежный прогрев стерилизуемого материала. Стерилизатор (сушильный шкаф) во время работы должен быть плотно закрыт. При отсутствии терморегулятора необходимо строго следить за температурой, так как при се понижении не осуществится стерилизация, а при нагреве выше 180 С бумага и пробки начинают обугливаться. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 80 'С, поскольку при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретос стекло может растрескаться.
Лучше всего выгружать посуду, когда температура в стерилизаторе сравняется с комнатной. Посуду можно стерилизовать и в автоклавс. Режим стерилизации в этом случае существенно зависит от объема сосудов и толщины стекла (см. табл. 4.2). Д~и автоклавирования посуду готовят, как и лля сухожаровой стерилизации. Следует иметь в виду, что в автоклаве посуда увлажнястся. 4.3.
СТЕРИЛИЗАЦИЯ ИНСТРУМЕНТОВ И ПРИБОРОВ Мелкие металлические инструменты: петли, иглы, пинцеты, ножницы, шпатели — стерилизуют прокаливанием в пламени (т. е. нагреванием докрасна) непосредственно перед использованием. На пламени кратковременно обжигают предметные и покровные стекла, стеклянные шпатели и палочки, фарфоровые ступки и пестики, горлышки колб, пробирок, бутылок, а также ватные пробки при псресевах культур и разливах сред.
В тшамени погибают и вегетативные клетки, и споры микроорганизмов. Наряду со стерильными одноразовыми шприцами в лабораторной практике широко распространены традиционные шприцы многократного использования.. Их лучше всего стерилизовать сухим жаром при 160 'С в собранном либо в разобранном виде. В первом случае длительность стерилизации 75 мин, во втором— 52 60 мин. Собранные шприцы вместе с иглой стерилизуют в пробирке, закрьпой ватной пробкой, разобранные заворачивают в бумагу или ткань.
Можно стерилизовать шприцы и в автоклаве при 1 ати в течение 15 — 20 мин. Автоклавируют их только в разобранном виде, иначе они повреждаются. Прокаливать шприцы нельзя, так как от этого они портятся. Термостойкие приборы для культивирования микроорганизмов, а также детали к этим приборам, резиновые пробки и шланги стерилизуют в автоклаве.
При этом емкости завертывают в бумагу. Режим автоклавирования выбирают в соответствии с термостойкостью материала, из которого сделан прибор. Некоторыс предметы (металлические инструменты, мелкие стеклянные детали, мембранные Фильтры) иногда стерилизуют длительным (в течение 20— 30 мин) кипячением в дистиллированной воле. Металлические и стеклянные предметы лучше всего кипятить в специальных закрыпях сосудах — стерилизаторах. Можно использовать для этой цели и металлическую посуду. Мембранные фильтры обычно кипятят в колбе или химическом стакане, закрытых ватными пробками.
Однако этим способом стерилизации в микробиологической практике пользуются редко в связи с тем, что длительное кипячение может повредить обрабатываемый материал, а сокращение времени кипячения может не обеспечить стерильность, так как споры некоторых микроорганизмов способны сохранять жизнеспособность лаже после длительного кипячения. Надежность стерилизации при кипячении может быть увеличена внесением в воду какого-либо бактерицидного средства: 2%-го $ормальдегида, 1%-й бриллиантовой зелени или 0,1%-й сулемы.
Но в этом случае возможно загрязнение биоцидами стерилизуемых предметов. Стерилизация газообразными веществами. Аппаратуру, имекнцую зеркальное, оптическое и радиоэлектронное оборудование, а также изделия из термолабильных пластмасс, например центрифужныс пробирки, стеризпгзуют газовым методом. Для газовой стерилизации применян>тся только те соединения, которые обладают спороцидными свойствами, — оксил этилена, метилбромид, оксид пропилена, формальдегид, глутаральдегид, бета-пропиолактон, озон и др. Особенно эффективна смесь оксида этилена н бромистого мстила в массовом соотношении 1: 1,44 (смесь «ОБ~). Газовую стерилизацию проводят в специальных герметически закрывающихся аппаратах. Стерилизуемые объекты, помещаемые в камеру, упаковывают как при стерилизации в автоклавс или сушильном шкафу. Для упаковки используют материалы, не портящиеся в газовой среде и пропускающие 1аз и влагу, — оберточную бумагу, хлорвиниловые и нейлоновые пленки и др.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
