А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 15
Текст из файла (страница 15)
Перед введением в камеру биоцида из нее как можно полнее удаляют воздух, чтобы обеспечить тесный контакт активно действующего вещества со стерилизуемым объектом. При стерилизации строго контролируют концентрацию газа, давление, влажность, температуру и длительность экспозиции. В большинстве случаев процесс проводят в сочетании с некоторым повышением температуры (до 45 — 70 С). Режимы стерилизации разными газами неодинаковы. Опи определяются прежде всего свойствами биоцида. Имеет значение и конструкция стсрилизационного аппарата. Оптимальный режим стерилизации смесью «ОБ» при 50 С в аппарате вместимостью 100 л и более следующий: концентрация смеси 3,36 г/л (лавление 1,2 ати), относительная влажность 80 — 100%, продолжительность 24 ч. По окончании стерилизации удаляют газы из камеры с 53 Таблица 44 Способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов Метод стерилизации Режим стерилизации Стерилизуемнй материал Примечание 1,5 — 2,0 ати; ЗО мин Автоклавирова- ние 1,0 ати; 20 мин То же То же » 0,5 ати; 15 — 30 мин Дробная стерилизация 160 'С; 2 чили Слой вещества в 170 'С„! ч сосуде не должен превышать 1,5 см Вазелиновое масло, глицерин, тальк Горячив воздух 160 †!70 'С; 2ч Чашки Петри, пипетки, шпатели То же » 160 — 170 'С; 2ч Закрьпы ватными пробками !60 С; 1ч Горячий воздух Шприцы Разобраны и завер- нуты 1 ати; 15 — 20 мин Автоклавирова- ние Мембранные фильтры 1 ати; !5 — 20 мин Автоклавирова- ние Кипячение 30 мин То жс Питательные среды с почвен- ной вытяжкой; картофельные и некоторые другие натураль- ные среды Жидкие и агаризованные сре- ды, не содержащие сахаров и других веществ, разлагающих- ся при 120 'С Жидкие и агаризованные среды с сахарами и другими соединениями, не выдерживающими нагревания при 120 С Среды или компоненты сред, не выдерживающие нагре- вания выше 100 'С Среды или компоненты сред, не выдерживающие нагрева- ния (белки, некоторые вита- мины и аминокислоты) Колбы, пробирки, химиче- ские стаканы, флаконы, стеклянные центрифужные пробирки, трубки Бурри Фильтрование через бакте- риальныс филь- тры Текучий пар; Зраза поЗО— 40 мин через сутки В колбах, пробир- ках, бутылях и т.л., закрытых ватными пробками Завернуты в бумагу (отверстия пипеток закрыты ватными тампонами) Разобраны и завер- нуты в бумагу или ткань В сосуде с дистиллированной водой Окончание табл.
4.4 Метод стерилизации Режим стерилизации Примечание Стерилазуеиый материал Фильтры Зейтца Цилиндр держателя закрыт ватной проб- кой, в отводной трубке ватный там- пон 1 — 1,5 ати; 20 — 30 миц Автоклавирова- цие 160 С; 1 ч Горячий воздух Верхняя ч асть завер- нута в бумагу 0,5 — 1 ати; 20 — 30 мин Свечи Шамберлана и Беркефельда Можно вместе с дер- жателем Автоклавирова- яие 160 — 170 С; 2ч Горячий воздух Закрыты ватными пробками, завернуты в бумагу Стеклянные фялыры с лержателем или отдельно 1 ати; 30 мин Закрыты ватными пробками, завернуты в пергамент и алю- миниевую фольгу Автоклавирова- ние 1 ати; 30 миц Стеклянные фильтры без резиновых пробок Завернуты в бумагу Горячий воздух Газовая стерилизация Центрифужиые пробирки, изготовленные из термо- лабильных пластмасс Зависит от применяемого биоцяда Время экспо- зиции усинав- ливают экспе- риментально Ультрафиолето- вые лучи Пробирки после облучения хранят в стерильной посуде 55 помощью вакуумного насоса и на некоторое время камеру оставляют под вакуумом для десорбции газов из стерилизованных предметов.
После этого камеру заполняют стерильным воздухом. Предметамн„простерилизованнымн газами, рекомендуется пользоваться не ранее чем через 24 ч после стерилизации. Это необходилю для полного удаления из них газа. Целесообразно на данный период поместить нх в вытяжной шкаф илн оставить в хорошо проветриваемом помещении. Некоторые изделия из пластмасс требуют дополнительной аэрации до 9 сут. При проведении газовой стерилизации строго соблюдают правила работы с ядовитыми газообразными веществами. Стерилизация облучением. Для стерилизации помещений, оборудования, некоторых медицинских принадлежностей, пищевых продуктов используют разные виды излучений: инфракрасное, ультрафиолетовое, рентгеновские лучи, и-, В-, у-лучи радиоактивных элементов. Единицей дозы облучения является радиан (1 рад = 0,01 Гр), который эквивалентен поглощенной энергии примерно в 100 эрг/г.
Стерилизующими являются дозы облучения 2 — 3 Мрад (104 Гр, пли рад). Чаще других в микробиологической практике используют ультрафио- лстовое облучение. Следует отметить, что все болыпее распространение получают посуда и инструменты одноразовога использования. Основные способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов обобщены п табл.
4.4. Следует отметить, что все большее распространение получают посуда и инструмегпы одноразового использования. Глава 5 ИЗУЧЕНИЕ МОРФОЛОГИИ И ЦИТОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ 5.1. МЕТОДЫ МИКРОСКОПИИ Изучение морфологии и строения клеток микроорганизмов, величина которых измеряется в большинстве случаев микрометрами, возможно только с помощью микроскопов, обеспечивающих увеличение исследуемых объектов в сотни (световая микроскопия) и десятки тысяч (электронная микроскопия) раз. Изображение в световом микроскопе формируется вследствие того, что объект и различные элементы его структуры избирательно поглощают свет с различной длиной волны (абсорбционный контраст) или вследствие изменения фазы световой волны при прохождении света через объект (фазовый контраст).
Световая микроскопия включает обычную просвечиваюи1ую микроскопию (светло- и телтопольную), гразово-контрастную и лнииинесценьпную. В последнее время разработаны и другие микроскопии и микроскопы— инверсионная и конфокальная лазерная сканирующая микроскопия. 5.1.1. Светпопольная микроскопия Существуют различные модели учебных и исследовательских световых микроскопов. Внепший вид и принципиальное устройство двух из них (микроскоп биологический рабочий, МБР-1 и Биолам 2) приведены на рис.
5.1 и 5.2. Подобные микроскопы позволяют определить форму клеток микроорганизмов, их размер, подвижность, степень морфологической гетсрагенности„а также характерную для микроорганизмов способность к дифферснцирующему окрашиваникь Успех наблюдения объекта и надежность получаемых результатов зависят ат хорошего знания оптической системы микроскопа, которая включает осветительный аппарат, объектив и окуляр. Особенности оптической системы светового микроскопа МБР-1. Осветительный аппарат состоит из зеркала и канденсара и предназначен лля наилучшего освещения препарата.
Регулируемое зеркало укреплено у основания штатива н имеет две стороны: вогнутую и плоскую. Вогнутое зеркала собирает и концентрирует в плоскости препарата пучок лучей, идущих от источника света„поэтому им пользуются только в тех случаях, когда работают без конденсора, т.е.
с очень малыми увеличениями. При работе с коиденсарам, который рассчитан на использование параллельных лучей, следует пальза- 56 Рис. 5.1. Микроскоп МБР-1; 1 — подковообразное основание микроскопа; 2 — предметный столик; 3 — винты лзя перемещения предметного столика; 4 — клеммы, пр~скимающие препарат; 5 — конденсор; б— кронвпейн конаенсора; 7 — винт, укрепляющий конденсор в гильзе; 8 — рукоятка перемещения конденсора; 9 — рукоятка ирисовой диафрагмы конденсора; 10 — зеркало; 11 — тубу- содержатель; 12 — рукоятка макрометрического винта; 13 — рукоятка микрометрического винта; 14 — револьвер; 15 — объективы; 16— наклонный тубус; 17 — винт для крепления тубуса; И вЂ” окуляр 15 13 12 10 ваться только плоской стороной зеркала. Конденсор, укрепленный непосредственно над зеркалом, состоит из нескольких линз и прелназначен для собирания параллельных лучей света, идущих от источника света и отраженных плоским зеркалом в одной точке — фокусе, который должен находиться в плоскости препарата.
В конденсор вмонтирована ирисовая (апертурная) диафрагма, позволяющая задерживать излишние лучи света и регулировать апертуру конденсора. Под конденсором находится откидная оправа для светофильтра. 57 Рис. 5.2. Микроскоп с бинокулярной насадкой, встроенным в основание осветителем с галогенной лампой 6 В, 6 Вт или 6 В, 10 Вт и совмещенным с сетевой вилкой источником питания (Виолам-2, ЛОМО, Россия): 1 — окуляры; 2 — бинокулярная насадка; 3 — револьверное устройство; 4 — объектив; 5— предметный столик; б — конденсор; 7 — корпус коллекторной линзы; 8 — патрон с лампой; 9— шарнир; 10 — рукоятка перемещения кронштейна конденсора; 11 — рукоятка тонкой фокусировки; 12 — рукоятка грубой фокусировки; 13 — тубусодержатель; 14 — выключатель; 15— источник электропитания; 10 — гнездо для подключения штекера источника электропитания; 17 — штекер В современных микроскопах источник света вмонтирован непосредственно под конденсором.
В таких микроскопах зеркала отсутствуют, а ирисовая диафрагма имеется не только в конденсоре, но и над источником света. Обьекешв представляет собой наиболее важную часть микроскопа. Он дает действительное увеличенное и обратное изображение изучаемого объекта. Обьектив состоит из системы линз, заключенных в металлическую оправу. Самая главная — наружная (фронтальная) линза, от фокусного расстояния которой зависит увеличение объектива. Чем больше кривизна фронтальной линзы, тем короче фокуснос расстояние и тем больше увеличение объектива.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
