Диссертация (Молекулярно-генетические основы ювенильного артрита), страница 6

Впромоторной области гена IL10 (хромосома 1, локус 1q32) описано несколькополиморфных локусов, для которых предполагается участие в регуляцииэкспрессии IL10, в том числе rs1800872 (-592C>A), rs1800896 (-1082G>A) иrs1800871 (-819C>T) [93,164, 209, 218]. Однако сведения о взаимосвязи отдельныхвариантов и гаплотипов указанных локусов с формированием ЮИА и иныхаутоиммунных расстройств неоднозначны [93,164, 209, 218].Фактор, ингибирующий миграцию макрофагов, (MIF) представляет собойуникальный мультипотентный цитокин, участвующий в регуляции иммуннойсистемы, а также обладающий свойствами гормона и тиоредоксина [182].Cчитается, что MIF служит одной из ключевых молекул в патогенезе такихзаболеваний, как РА, ЮИА, СКВ, системные васкулиты за счет наличия у него рядаиммуностимулирующих, провоспалительных и ангиогенных свойств [115, 180, 181,182]. Показано, что MIF стимулирует секрецию провоспалительных цитокинов(TNFα, IL1, IL6, IL8, IL12) макрофагами, экспрессию мРНК матричныхметаллопротеиназ фибробластоподобными синовиоцитами пациентов с РА, атакже экспрессию молекул адгезии на эндотелиоцитах и моноцитах [181, 182].

MIFусиливает образование оксида азота, что приводит к непосредственномуповреждению клеток и активации ряда функций макрофагов, в частностифагоцитоза, продукции перекиси водорода, а также выступает как потенциальныйангиогенный фактор [115, 182]. Кроме того, в настоящее время MIFрассматривается как физиологический антагонист глюкокортикостероидов (ГКС) вотношении их ингибирующего влияния на иммунную систему [115, 181]. Согласноданным Meazza et al.

(2002), содержание MIF в сыворотке пациентов с активнымЮИА оказалось существенно выше, чем у больных в период ремиссии и чем у29здоровых индивидов [181]. Кроме того, была установлена обратная взаимосвязьмежду уровнем MIF в синовиальной жидкости и продолжительностью ответа навнутрисуставное введение ГКС у больных с ЮИА [181].Ген MIF расположен на длинном плече 22-й хромосомы (локус 22q11). Впромоторной области данного гена описано 2 потенциально функциональныхполиморфизма: замена гуанина на цитозин в положении -173 (-173G>C, rs755622)и CATT5-8 повторы с началом в положении -794 [115, 180, 182]. Наличиевзаимосвязи полиморфных вариантов локуса MIF rs755622 с риском развития иособенностями течения ЮИА и РА исследовалось в ряде работ, однако полученныев них результаты противоречивы [182, 224].Цитотоксический Т-лимфоцит-ассоциированный белок 4 (CTLA4) (CD152)относится к суперсемейству иммуноглобулинов и выступает в качестве ключевойрегуляторной молекулы, которая ослабляет активацию T-лимфоцитов за счетблокировки костимуляторных сигналов, а также играет важную роль вфункционировании регуляторных T-лимфоцитов [127, 245, 249].

Указанныесвойства способствуют снижению активации B-клеток, макрофагов, уменьшениюпродукции провоспалительных цитокинов и обеспечивают поддержание процессоваутотолерантности в организме [127, 245, 249, 299]. О протективной роли CTLA4при РА и ЮИА свидетельствует успешное применение при их лечении абатацепта,состоящего из внеклеточного домена человеческого CTLA4 и Fc доменачеловеческого IgG-1 [127, 258].Ген CTLA4 расположен на длинном плече 2-й хромосомы (2q33) и состоит из4 экзонов. Известно, что в результате альтернативного сплайсинга образуются 2изоформы CTLA4: полноразмерная и растворимая, кодируемые соответственноэкзонами 1, 2, 3, 4 и 1, 2, 4 [66, 298]. Среди множества полиморфизмов данного генаособый интерес представляет замена гуанина на аденин в 3’-нетранслируемойобласти гена CTLA4 (rs3087243, CT60 G>A, +6230G>A) [63, 66].

Согласно даннымрядаисследований,полиморфныевариантылокусаCTLA4rs3087243ассоциированы с развитием таких заболеваний, как аутоиммунный тиреоидит,30сахарный диабет 1-го типа и РА, однако в отношении ЮИА сведения неоднозначны[63, 66, 224].Нуклеарный фактор κB (NF-κB) представляет собой семейство структурносходных транскрипционных факторов, включая RelA (или p65), RelB, c-Rel, NFκB1 (p50 и его предшественник p105) и NF-κB2 (p52 и его предшественник p100),которые функционируют как различные гетеро- или гомодимеры [212, 263, 264].Гены, экспрессия которых регулируется с помощью NF-κB, участвуют восуществлении различных процессов в иммунной системе, включая развитие,активациюидифференцировкулимфоцитов,атакжесозреваниеифункционирование клеток врожденного иммунитета [263].

Одним из ключевыхпредставителей данного семейства является NF-κB1 [83, 212, 263, 279]. За счетреализации ко- и посттрансляционных механизмов ген NFKB1 кодирует 2субъединицы: p105 (пятидоменный предшественник) и p50 (трехдоменный«активный» белок) [212]. В зависимости от формы (гетеро-/гомодимер) p50обладает противоположными эффектами [83, 212, 263, 279]. Гетеродимер p50/p65проявляетпровоспалительныесвойстваипреимущественноусиливаеттранскрипцию генов [83, 212, 215, 279]. В то же время гомодимер p50 оказываетпротивовоспалительный эффект, подавляя транскрипцию провоспалительныхцитокинов и усиливая транскрипцию противовоспалительных [83, 279].

Рядомважных функций обладает p105, который выступает с одной стороны какпредшественник p50, а с другой ‒ как ингибитор димеров NF-κB, а также играетважную роль в регуляции иных сигнальных путей в клетке [83, 212, 247].Рефрактерность к индукции артрита, наблюдаемая у животных с нулевой мутациейв гене NFKB1, свидетельствует о важной роли p105 и p50 в патогенезе суставноговоспаления.

Кроме того, у «нокаутных» мышей в ответ на введение коллагена 2-готипа отмечалась сниженная (в сравнении с диким типом) продукция IgM, IgG ипролиферация T-клеток [106].В промоторной области гена NFKB1 (локус 4q24) описан функциональныйчетырехнуклеотидный (ATTG) инсерционно-делеционный полиморфизм (-94I>D,rs28362491) [116, 279]. Полиморфный локус NFKB1 rs28362491 исследовался при31различных аутоиммунных заболеваниях, в том числе при РА, анкилозирующемспондилоартрите, псориатическом артрите, СКВ, диффузном токсическом зобе,язвенном колите, СД 1-го типа, однако результаты работ противоречивы [58, 116].Протеин-тирозиновые фосфатазы и киназы представляют собой ферменты,которые участвуют в посттрансляционной модификации белков и катализируютобратимое присоединение или отщепление фосфатных групп от остатков тирозинав сигнальных молекулах, тем самым изменяя активность или аффинность ихфункциональных доменов [304]. Указанный процесс рассматривается как один изосновополагающих механизмов,позволяющихклеткамадаптироватьсякизменениям окружающей среды, и требует тщательной регуляции, что особенноважно при активации иммунного ответа для предотвращения агрессии противсобственных антигенов [304].

Описано около 110 протеин-тирозиновых фосфатаз,однакоособыйинтереспредставляетпротеин-тирозиноваяфосфатазанерецепторного типа 22 (PTPN22), или лимфоидная протеин-тирозиноваяфосфатаза (LYP) [75, 304]. Предполагается, что изменение активности данногофермента может играть важную роль в развитии аутоиммунных заболеваний,однако точные механизмы указанного феномена до настоящего времени неустановлены [75, 102, 126, 240, 304].

Показано, что LYP подавляет активацию Tклеточного рецепторного сигнального пути преимущественно в ответ нанизкоафинные антигены и аутоантигены, тем самым ограничивая пролиферациюT-клеток и уменьшая их активность, в связи с чем нарушение функции данногофермента может предрасполагать к развитию аутоиммунных заболеваний [49, 237,246]. Существует противоречивое мнение, что формирование аутоагрессии можетбыть обусловлено повышением активности LYP и нарушением негативнойселекции аутореактивных T- и B-лимфоцитов [70, 126, 281].Ген PTPN22 расположен на коротком плече 1-й хромосомы в локусе 1p13.Согласно проведенным исследованиям, транзиция G>A в положении 1858 генаPTPN22 (rs2476601) ведет к замене аргинина на триптофан в кодоне 620(Arg620Trp) LYP и сопровождается нарушением связывания фермента с Сконцевой Src-киназой [24, 79, 304].

Следует, однако, отметить, что вопрос о32биологическом значении данного полиморфизма до сих пор остается открытым[79, 240, 246]. В ряде работ была показана ассоциация аллеля PTPN22 rs2476601*Aс развитием ЮИА, РА, СД 1-го типа, витилиго, СКВ и других аутоиммунныхзаболеваний [79, 240].Пептидил-аргинин деиминазы (PADI) представляют собой семействокальций-зависимых ферментов, которые также участвуют в посттрансляционноймодификации белков, а именно в цитруллинировании (деиминировании), прикотором происходит превращение остатков аргинина в цитруллин [117, 146, 205].Единственным представителем семейства PADI, который может проникать в ядро,является PADI4, а его субстратами служат гистоны (H3 и H4), а также,предположительно, фибрин, коллаген и некоторые другие белки [71, 117, 197, 205,211].Показано,чтоцитруллинированиегистоновпротиводействуетихметиллированию, тем самым подавляя транскрипцию генов, а также играетключевую роль в формировании нейтрофильных ловушек, обеспечивающихэкстернализацию цитруллинированных аутоантигенов и иммуностимулирующихагентов [197, 211].

Известно, что активация цитруллинирования наблюдается привоспалении и апоптозе и в определенных условиях, включая наличие рядагенетических и средовых факторов риска, сопровождается потерей толерантностик модифицированным белкам/пептидам и продукцией против них аутоантител[117, 146, 205, 211]. Согласно данным ряда исследований, PADI4 и процессыцитруллинирования имеют важное значение в патогенезе аутоиммунноговоспаления в суставах [88, 117, 146, 197, 211, 260, 276]. Частота выявления АЦЦПу больных с ЮИА в разных популяциях варьирует от 1,8% до 41,7%, и, несмотряна низкую чувствительность (10%), специфичность указанного теста очень высока(99%) [191]. В ряде исследований было показано, что наличие АЦЦП и их уровеньмогут служить маркерами прогноза при ЮИА и РА, а также эффективноститерапии РА [11, 37, 38, 43, 82, 230].Ген PADI4 располагается на коротком плече 1-й хромосомы (локус 1p36).

ВGWAS, выполненном Eyre et al. (2012), было установлено наличие взаимосвязиаллелей полиморфного локуса PADI4 rs2240336, расположенного в интроне 9, с33риском развития РА [135]. По доступным на сегодняшний день сведениям,функциональное значение указанного полиморфизма неизвестно.Таким образом, вопрос о генетических факторах риска ЮИА до настоящеговремя остается открытым [89, 224]. Требуется проведение дальнейшихисследований для уточнения результатов, полученных в GWAS и других работах,а также выяснения роли отдельных полиморфных вариантов в развитии ЮИА [89,224].

Лишь для небольшого числа генов-кандидатов наличие ассоциацийподтверждено в независимых исследованиях, а их суммарный вклад в объяснениенаследственной предрасположенности к ЮИА достаточно невелик [89, 224].Кроме того, результаты репликативных исследований нередко противоречивы, чтоможет быть связано с множеством факторов, таких как использование разныхподходов к описанию фенотипов ЮИА и разделению пациентов на группы,неверныекритерииотбораинедостаточныйобъемвыборок,ошибкигенотипирования, а также истинные различия в популяциях [224].1.3 Современные данные о маркерах эффективности метотрексата притерапии ювенильного идиопатического артритаВажноезначениевпредупреждениипрогрессированияЮИАиинвалидизации пациентов придается своевременному назначению адекватнойтерапии [278, 284, 287, 295].