Диссертация (Молекулярно-генетические основы ювенильного артрита)

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «БАШКИРСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ» МИНИСТЕРСТВАЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИНа правах рукописиНазарова Лилия ШамилевнаМОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ЮВЕНИЛЬНОГОАРТРИТА03.02.07 – генетикаДиссертацияна соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:доктор медицинских наук, профессорВикторова Татьяна ВикторовнаНаучный консультант:доктор медицинских наук, профессорМалиевский Виктор АртуровичУфа – 20172ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ .............................................................................................................. 4ГЛАВА 1.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ........................................................................ 111.1 Современные представления об эпидемиологии ювенильногоидиопатического артрита ................................................................................... 111.2 Иммуногенетические основы патогенеза ювенильногоидиопатического артрита ................................................................................... 151.3 Современные данные о маркерах эффективности метотрексата притерапии ювенильного идиопатического артрита.............................................. 33ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ...............................

362.1 Объект исследования .................................................................................... 362.2 Методы исследования .................................................................................. 372.3 Статистические методы обработки результатов исследования ................. 50ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ...............

533.1 Клиническая характеристика больных ювенильным идиопатическимартритом ............................................................................................................. 533.2 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов медиаторовиммунного ответа с предрасположенностью к ювенильномуидиопатическому артриту и его клиническим вариантам ............................... 583.3 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов медиаторовиммунного ответа с особенностями течения ювенильногоидиопатического артрита ...................................................................................

893.4 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов медиаторовиммунного ответа с эффективностью терапии при ювенильномидиопатическом артрите .................................................................................. 1173.5 Исследование особенностей цитокинового профиля у больных сювенильным идиопатическим артритом до назначенияиммуносупрессивной терапии ........................................................................ 12833.6 Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов медиаторовиммунного ответа с особенностями цитокинового профиля у больных сювенильным идиопатическим артритом ........................................................

136ЗАКЛЮЧЕНИЕ .................................................................................................... 152Выводы ............................................................................................................. 157Практические рекомендации ...........................................................................

158Перспективы дальнейшей разработки темы ................................................... 159СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ ......................... 160СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ .................................................................................... 1624ВВЕДЕНИЕАктуальность темы исследования. Ювенильный артрит (ЮА) (код поМКБ-10: M08) ‒ это артрит неустановленной этиологии, который возникает ввозрасте до 16 лет и длится более 6 недель [162]. Медико-социальная значимостьзаболеванияобусловленаеговысокойраспространенностью,неуклоннопрогрессирующим течением, а также ранней инвалидизацией пациентов [19].В настоящее время остается много нерешенных вопросов в отношениивыяснения этиологии и патогенеза ЮА, создания универсальной классификации,наиболее полно отражающей клиническую гетерогенность данной патологии, атакже внедрения персонализированного подхода к ведению больных [1, 16, 27, 239,295, 296].

Общепринятой во всем мире является классификация, разработаннаяМеждународной лигой ревматологических ассоциаций (ILAR) и направленная навыявление однородных групп внутри ЮА с целью изучения эпидемиологии,этиопатогенеза, исходов болезни, а также различных аспектов терапии. Согласноуказаннойклассификациизаболеваниеобозначаетсякакювенильныйидиопатический артрит (ЮИА) [40].Предполагается, что в основе развития ЮИА лежит множество эндогенныхи экзогенных факторов, однако ключевое значение придается генетическим ииммунологическим аспектам [129, 224, 268]. Показано, что для ЮИА характерноизменение секреции про- и противовоспалительных медиаторов, приводящее кформированиютипичнойклиническойкартинызаболевания[129,306].Соответствующие иммунологические изменения, предположительно, обусловленыизменением экспрессии генов ряда систем, что, в свою очередь, может быть связанос наличием тех или иных функциональных полиморфных локусов [268, 306].Степень разработанности темы исследования.

В последние годы былопоказано наличие целого ряда ассоциаций полиморфных вариантов генов,кодирующих ключевые факторы иммунного ответа (в том числе молекулычеловеческихлейкоцитарныхантигенов(HLA),цитокины,ферментыпосттрансляционной модификации белков, факторы роста и другие), с развитием5ЮИА и его клиническими особенностями [89, 132, 224, 285, 295]. Значительнымуспехам в обнаружении новых маркеров, предположительно связанных сразвитием ЮИА, способствовало широкое внедрение в последние годы технологийполногеномного поиска ассоциаций (GWAS) [89, 132, 224]. Некоторые вариантыгенетического полиморфизма, наряду с рутинными клиническими данными,рассматриваются в качестве возможных предикторов эффективности терапииЮИА [27, 52, 125, 192, 226, 228, 296]. Однако лишь для небольшого числаизученныхмаркеровналичиеассоциацийподтвержденовнезависимыхисследованиях [89, 224, 295, 296].Вышеуказанные данные свидетельствуют о целесообразности поискамолекулярно-генетических и других предикторов риска развития ЮИА, егоклинических вариантов, особенностей течения и эффективности терапии споследующимиспользованиемполученныхрезультатовдляразработкиперсонализированного подхода к ведению пациентов.Цель исследования: оценка вклада полиморфизма генов медиаторовиммунного ответа в формирование предрасположенности к ювенильномуидиопатическому артриту и его клиническим вариантам, а также поискгенетическихииммунологическихмаркеровособенностейтеченияиэффективности терапии заболевания.Задачи исследования:1.

Провести анализ полиморфных локусов генов медиаторов иммунногоответа (TNFA rs1800629 (-308G>A), LTA rs909253 (252A>G), IL1B rs16944 (511C>T), IL2RA rs2104286, IL6 rs1800795 (-174G>C), IL10 rs1800872 (-592C>A),MIF rs755622 (-173G>C), CTLA4 rs3087243, NFKB1 rs28362491 (-94I>D), PTPN22rs2476601 (1858G>A), PADI4 rs2240336) и межгенной области (IL2-IL21 rs6822844)у больных с ЮИА и индивидов без аутоиммунных заболеваний.2. Изучить уровень цитокинов (TNFα, IL1β, IL6, IL10) в сыворотке крови, атакже их спонтанную и митоген-индуцированную продукцию в культуре клетокцельной крови, полученной от пациентов с ЮИА перед назначениемиммуносупрессивной терапии (метотрексата).63. Провестипоискассоциацийаллелейигенотипов(гаплотипов)полиморфных локусов генов медиаторов иммунного ответа с развитием ЮИА, егоклиническими вариантами, особенностями течения и эффективностью терапии, атакже с показателями цитокинового профиля.4.

Изучитьрольмежгенныхвзаимодействийвформированиипредрасположенности к ЮИА.5. Изучить наличие взаимосвязи показателей цитокинов в сыворотке крови,а также их спонтанной и митоген-индуцированной продукции с особенностямитечения и эффективностью терапии ЮИА.Научная новизна:Впервые проведен молекулярно-генетический анализ полиморфных локусовTNFA rs1800629, LTA rs909253, IL1B rs16944, IL2-IL21 rs6822844, IL2RA rs2104286,IL6 rs1800795, IL10 rs1800872, MIF rs755622, CTLA4 rs3087243, NFKB1 rs28362491,PTPN22 rs2476601, PADI4 rs2240336 у пациентов с ЮИА из России (на выборкежителейРеспубликиБашкортостан).Выявленыгенетическиемаркеры,ассоциированные с развитием заболевания, его клиническими вариантами,особенностями течения и эффективностью терапии, а также с показателямицитокинового профиля (IL1β, IL6, IL10).Впервые у пациентов с ЮИА, ранее не получавших иммуносупрессивнуютерапию, показано наличие взаимосвязи между формированием увеита иповышением спонтанной продукции IL6, а также снижением митогениндуцированной продукции TNFα в культуре клеток цельной крови; междуповышением скорости оседания эритроцитов (СОЭ) и снижением уровня IL10 всыворотке крови, а также снижением спонтанной продукции IL10 в культуреклеток цельной крови; между гипериммуноглобулинемией класса М иповышением спонтанной продукции IL6 в культуре клеток цельной крови.Теоретическаяипрактическаязначимостьработы.Результатыисследования расширяют фундаментальные представления о молекулярногенетических основах патогенеза ЮИА и могут быть использованы в клиническойпрактике для прогнозирования риска развития данного заболевания, его вариантов,7особенностей течения и эффективности терапии.

Полученные сведения позволяютоптимизировать тактику ведения детей с ЮИА и меры по предупреждению ихинвалидизации, что является важным вкладом в разработку инновационныхподходов персонализированной медицины. Материалы исследования могут бытьиспользованы в процессе обучения студентов медицинских и биологическихфакультетовВУЗов,атакжекурсантовинститутадополнительногопрофессионального образования врачей.Внедрениерезультатовисследованиявпрактику.Результатыисследования используются в учебном процессе кафедр биологии и госпитальнойпедиатриифедеральногогосударственногобюджетногообразовательногоучреждения высшего образования «Башкирский государственный медицинскийуниверситет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВОБГМУ Минздрава России), а также внедрены в работу центральной научноисследовательской лаборатории ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России икардиоревматологического отделения государственного бюджетного учрежденияздравоохранения «Республиканская детская клиническая больница» (ГБУЗ РДКБ)г.