Диссертация (Анализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов у больных бронхиальной астмой), страница 11

Во всех группах больных БАпроцент C14+моноцитов, экспрессирующих TLR4 статистически достоверновыше по сравнению с группой здоровых доноров (2,4 (1,3-14,6) %, рис. 20).71Рисунок 20. Процент CD14+ моноцитов периферической крови,экспрессирующих на своей поверхности TLR4, у здоровых доноров и больныхбронхиальной астмой различных форм.Процент СD14+ моноцитов, на поверхности которых экспрессируетсяTLR4, достоверно выше у больных неаллергической бронхиальной астмой (52,5(43,4-67)%) по сравнению с показателями в группе больных смешанной (29,15(13,8-35,3)%) и аллергической БА (30,8 (7-50,5)%.).СИФ TLR4 на CD14+моноцитах больных БА во всех трех группах такжебыл статистически достоверно выше, чем у здоровых доноров (рис.

21). Приэтом СИФ TLR4 на CD14+моноцитах больных неаллергической БА составила 2,4(2,17-3,2), что статистически достоверно выше СИФ TLR4 на CD14+моноцитахбольных аллергической БА (2,0 (1,47-2,2)). Различий между группами больныхсмешанной и аллергической БА не было выявлено.72Рисунок 21. Средняя интенсивность флюоресценции TLR4 на CD14+моноцитах здоровых доноров и больных бронхиальной астмой различных форм.Таким образом, во всех обследуемых группах больных бронхиальнойастмой установили достоверное повышение CD14+TLR2+ и CD14+TLR4+ моноцитов по сравнению со здоровыми донорами. Также средняя интенсивностьфлюоресценции TLR2 и TLR4 на поверхности СD14+ моноцитов достовернопревышала показатели у здоровых доноров во всех группах пациентов сбронхиальной астмой.В рамках исследования экспрессии TLR2 и TLR4 нами ранее былопоказано [4], что у больных смешанной бронхиальной астмой достоверноувеличен процент лимфоцитов, экспрессирующих TLR2 и СИФ TLR2 налимфоцитах по сравнению со здоровыми донорами.

При этом, в данной группебольных смешанной БА СИФ TLR2 на лимфоцитах достоверно выше, чем у73больныхаллергическойБА(p<0,05).Достоверноповысилсяпроцентгранулоцитов, экспрессирующих TLR2 и TLR4 у больных аллергической БА исмешанной БА, в то время как у больных неаллергической БА увеличился толькопроцент гранулоцитов, экспрессирующих TLR4. СИФ TLR4 на гранулоцитахстатистически достоверно увеличилась в группе больных смешанной БА посравнению со здоровыми донорами [4].Таким образом, у больных контролируемой БА установлено увеличениеколичества клеток периферической крови, экспрессирующих TLR2 и TLR4, атакже их интенсивность флюоресценции по сравнению со здоровыми донорами.Это может оказывать влияние на дальнейшую продукцию цитокинов даннымиклетками при взаимодействии TLR2 и TLR4 с их лигандами.В дальнейшем нами оценивалась функциональная активность TLR2 иTLR4,атакжеTLR2-иTLR4-опосредованнаяпродукцияпро-ипротивовоспалительных цитокинов МНК периферической крови у здоровыхдоноров и больных контролируемой БА.3.3АнализфункциональнойактивностиTLR2иTLR4поиндуцированной лигандами продукции TNFα МНК периферической кровибольных бронхиальной астмойСвязывание TLR2 и TLR4 со своими лигандами (ПГ и ЛПС,соответственно) приводит к активации NF-κB, определяя таким образоминдукцию синтеза TNFα и других про- и противовоспалительных цитокинов.

Накафедре иммунологии медико-биологического факультета ФГБОУ ВО РНИМУим. Н.И. Пирогова разработан метод оценки функциональной активности TLRпо индуцированной соответствующими лигандамивыработке TNFα МНКпериферической крови [2].TNFα является одним из наиболее важных провоспалительных цитокинов.Известно, что TNFα действует на гладкие мышцы дыхательных путей,увеличивая сократительный ответ, и может принимать участие в развитии74астмы. В ряде работ было показано, что в плазме больных БА повышеносодержание TNFα [87, 96].На данном этапе исследования мы оценивали спонтанную продукциюTNFαМНКпериферическойкровиздоровыхдоноровибольныхконтролируемой бронхиальной астмой разных форм легкого и среднетяжелоготечения.Было выявлено, что концентрация TNFα у больных аллергической БА(615,21 (385,4-922,4) пг/мл), смешанной БА (677,5 (318,6-869,5) пг/мл)неаллергической БА (652,5 (299,5-859,3)ипг/мл) значительно превышалазначения в группе здоровых доноров (103,51 (59-312) пг/мл).

Различия былистатистически достоверны для всех исследуемых групп (рис. 22-24). ЗначенияспонтаннойпродукцииTNFαМНКпериферическойкровибольныхбронхиальной астмой были сопоставимы во всех трех обследуемых группах(рис. 22).Рисунок 22. Спонтанная и ЛПС-индуцированная продукция TNFαмононуклеарными клетками здоровых доноров и больных бронхиальной астмойразличных форм.75ЛПС-индуцированная продукция TNFα МНК периферической крови быластатистически достоверно выше во всех исследуемых группах по сравнению создоровыми донорами (956 (782,03-1407) пг/мл).У пациентов со смешанной формой БА концентрация TNFα составила 2079(1883-2353,6) пг/мл, что статистически достоверно выше, чем в группе больныхаллергической БА (1457,2 (1111,4-1912) пг/мл).

Наибольший прирост продукцииTNFα МНК периферической крови среди исследуемых пациентов наблюдали убольных неаллергической БА (3541 (2946-3863) пг/мл, p<0,05). Таким образом,у больных неаллергической БА значения функциональной активности в 2,4 и 1,7раз выше, чем у больных аллергической и смешанной, соответственно.ПГ-индуцированная продукция TNFα МНК периферической крови быластатистически достоверно выше во всех исследуемых группах по сравнению создоровыми донорами (1081,43 (967,14-1198) пг/мл). Концентрации TNFα убольных аллергической БА (2084,5 (1729,71-2747,9) пг/мл), смешанной БА(2654,14 (1982-3730,14) пг/мл) и неаллергической БА (2222,5 (1870-3666) пг/мл)были сопоставимы и статистически достоверно не отличались между группами(рис. 23).76Рисунок 23.

Спонтанная и ПГ-индуцированная продукция TNFαмононуклеарными клетками здоровых доноров и больных бронхиальной астмойразличных форм.ВдальнейшемоценивалиразличиявпродукцииTNFαМНКпериферической крови у больных аллергической БА в зависимости от тяжеститечения заболевания (рис. 24).Спонтанная продукция TNFα у больных аллергической БА легкого (668,1(340-904) пг/мл) и среднетяжелого течения (577,7 (422-928,6) пг/мл), быластатистически достоверно выше, чем у здоровых доноров (103,51 (59-312)пг/мл). Однако различий между группами выявлено не было.77Рисунок 24.

Спонтанная, ЛПС- и ПГ- индуцированная продукция TNFαмононуклеарными клетками здоровых доноров и больных легкой исреднетяжелой аллергической БА.Выявили, что только в группе больных среднетяжелой аллергической БАЛПС-индуцированный уровень TNFα был статистически достоверно выше посравнениюсоздоровымидонорами.Такжеустановили,чтоЛПС-индуцированная продукция TNFα МНК периферической крови статистическидостоверно выше у больных среднетяжелой аллергической БА, чем у больныхаллергической БА легкой степени тяжести (1900 (1326-2318) пг/мл и 1304 (10521564) пг/мл, соответственно; рис. 24).В группе больных среднетяжелой аллергической БА ПГ-индуцированнаяпродукция TNFα статистически достоверно выше, чем у больных аллергическойБА легкой степени тяжести (2628,42 (2116-3068,6) пг/мл и 1846,14 (1182-2053)пг/мл, соответственно).Полученные результаты свидетельствуют о повышенной функциональнойактивности TLR2 и TLR4 у больных БА.78TNFα является провоспалительным цитокином, в большом количествеприсутствующим в дыхательных путях у пациентов с астмой.

На модели in vitroпоказано, что TNFα играет важную роль в ремоделировании дыхательных путей,способствует формированию гиперреактивности бронхов у больных БА [132].TNFα присутствует в БАЛ у пациентов с бронхиальной астмой, также этотцитокин синтезируется альвеолярными макрофагами после попадания аллергена[9]. Нами установлено, что у больных БА повышена спонтанная и лигандиндуцированная выработка TNFα по сравнению со здоровыми донорами. Убольных БА также процент CD14+TLR2+ и CD14+TLR4+ моноцитов и СИФ TLR2и TLR4 выше, чем у здоровых доноров.

Таким образом, нам было выявлено, чтоу больных БА высокая базовая экспрессии и функциональная активность TLR2 иTLR4 на клетках периферической крови. Бронхиальная астма являетсясистемным заболеванием, и полученные нами данные могут свидетельствовать осущественном вкладе циркулирующих клеток периферической крови в процессвоспаления. Это согласуется с проведенным ранее Tashiro H.

и соавт.эксперименте на мышах, когда было показано, что у моноцитов болеесущественная роль в поддержании аллергического воспаления, чем уальвеолярныхмакрофагов[203].Увеличениебазовойэкспрессииифункциональной активности TLR2 и TLR4 на МНК периферической кровиможет приводить к усилению восприимчивости данных пациентов к действиюаллергенов или инфекционных агентов.Мы установили, что у больных неаллергической БА наибольший уровеньЛПС-индуцированной продукции TNFα МНК периферической крови. В даннойгруппе пациентов приступ развивается на фоне присоединения инфекции.Постоянный контакт с патогеном поддерживает активацию TLR, что можетспособствовать стойкому воспалительному процессу в дыхательных путях идальнейшему усугублению течения воспаления.