Диссертация (Анализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов у больных бронхиальной астмой), страница 13

Возможно, повышениеконцентрации IL-33 у больных с аллергопатологией в большей степениобусловлено продукцией этого цитокина эпителиальными клетками.В исследовании Li и соавт. на экспериментальной модели аллергическогориноконъюктивита была показана связь активации TLR4 и продукции IL-33эпителиальными клетками роговицы in vitro [127]. Неизвестно, приводит лиактивация TLR к продукции данного цитокина в периферической кровичеловека.

Многие клетки периферической крови продуцируют растворимуюформу ST2. Экспрессия sST2 индуцибельна. Известно, что в мокроте [120] ипериферическойкровипациентовсБА[78]наблюдаетсяповышениеконцентрации растворимой формы ST2. Изоформа sST2 служит рецепторомловушкой для IL-33 и ингибирует сигнальный путь через ST2L [224].

Такимобразом, в периферической крови обследуемых пациентов IL-33 может бытьсвязан рецептором-ловушкой.863.4.3 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-10МНК периферической крови больных бронхиальной астмойВ дальнейшем оценивали продукцию IL-10 МНК периферической кровиздоровых доноров и больных контролируемой БА легкого и среднетяжелоготечения.IL-10 первоначально был описан на мышиных моделях в качествеингибитора пролиферации Th1 типа, а также аутокринного фактора роста дляTh2 типа [149].

IL-10 в основном вырабатывается Th2-типа и Treg, подавляетвыработку провоспалительных цитокинов [217]. На экспериментальной модели,Laouini и соавт. [116] показали, что данный цитокин имеет решающее значениедля развития эозинофилии при атопическом дерматите. Также в рядеисследований было выявлено, что экспрессия мРНК IL-10 повышается убольных бронхиальной астмой [114, 171].В нашем исследовании спонтанная продукция IL-10 была статистическидостоверно выше у больных аллергической БА (129 (62,6-200,6) пг/мл),смешанной БА (169,6 (51,4-172,9) пг/мл) и неаллергической БА (177,1 (164,2184,2) пг/мл) по сравнению со здоровыми донорами (37,16 (29,1-55,2) пг/мл).ЛПС-индуцированная выработка IL-10 МНК периферической крови такжестатистически достоверно выше во всех группах обследуемых больных посравнению со здоровыми донорами.

При этом, у больных аллергической БАЛПС-индуцированная продукция IL-10 (329,7 (305,8-475,9) пг/мл) статистическидостоверно выше по сравнению с больными смешанной БА (282,2 (127,4-309,8)пг/мл). Данные представлены на рисунке 27.87Рисунок 27. Спонтанная и стимулированная ЛПС продукция IL-10мононуклеарными клетками здоровых доноров и больных бронхиальной астмойразличных форм.На следующем этапе установили, что только в группе больныхаллергической БА статистически достоверно повысился ПГ-индуцированныйуровень IL-10 по сравнению со здоровыми донорами: 274,9 (192,5-366,6) пг/мл и70,2 (47,3-157,4) пг/мл, соответственно.Выявили, что в группе больных аллергической БА концентрация IL-10была статистически достоверно выше, чем у больных смешанной БА (130 (115,6202,6) пг/мл), данные представлены на рисунке 28.88Рисунок 28. Спонтанная и стимулированная ПГ продукция IL-10мононуклеарными клетками здоровых доноров и больных бронхиальной астмойразличных форм.Данные о роли IL-10 в развитии гиперреактивности дыхательных путей иаллергии носят противоречивый характер.

В некоторых исследованиях показано,чтоIL-10ингибирует аллергическое воспаление [94], ноувеличиваетгиперреактивность дыхательных путей [229].Из-за иммуносупрессивных свойств IL-10 in vitro этот цитокин былпредложен в качестве потенциального терапевтического агента при развитииаллергического воспаления и астме. Аллерген-индуцированная продукция IgEприводит к индукции синтеза эозинофилами, базофилами и тучными клеткамицитокинов, способствующих дифференцировке Th2 и секреции этими клеткамиIL-10.У больных аллергической БА, согласно нашему исследованию, лигандопосредованная продукция IL-10 выше, чем в других группах. Повышение89спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-10 согласуется слитературными данными, показывающими увеличение сывороточного уровняIL-10 [229] и мРНК IL-10 [171] у больных аллергической БА. Этот цитокин содной стороны может поддерживать дисбаланс Th в сторону Th2 типа, темсамым усугубляя течение воспаления.

С другой стороны, так как в ряде работбыло показано, что у IL-10 протективная роль в аллергических заболеваниях, егоповышение может быть связано с развитием компенсаторных реакций, которыенаправлены на снижение воспаления [191]. Таким образом,IL-10 обладаетплейотропными эффектами и играет двойственную роль в иммунопатогенезе БА.Более низкие уровни индуцированной продукции IL-10 у пациентов,страдающих смешанной и неаллергической БА могут свидетельствовать опереключении у этих пациентов Th2-иммунного ответа на Th1 или Th17иммунный ответ. Дисбаланс в выработке про- и противовоспалительныхцитокинов может направлять развитие заболевание по Th1-типу иммунногоответа, или Th17-типу иммунного ответа.

Эти данные согласуются сисследованиями на экспериментальных мышиных моделях, когда было показаночто действие агонистов TLR4 (ЛПС и β-глюканов) способствует развитиювоспаления, связанного с Th17 типа, выработкой IL-17 [136]. IL-17 в своюочередь связывают с развитием стойкого нейтрофильного воспаления в легких.Механизм нейтрофильного воспаления до конца не ясен, предполагают, что ономожет развиваться в слизистой оболочке дыхательных путей в ответ нааэрополлютантыинфекционныеилипрофессиональныесенсибилизаторы,различныеагенты. Нейтрофильное воспаление при БА связано созначительным ослаблением ответа на терапию ингаляционными и пероральнымиГКС.Таким образом, увеличение продукции IL-10 МНК периферической кровибольных контролируемой БА при культивировании клеток с лигандами TLRможет указывать на существенный вклад данных рецепторов в формированиевоспаления и возможное развитие осложнений.903.4.4 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-4МНК периферической крови больных бронхиальной астмойIL-4 – противовоспалительный цитокин, являющийся аутокриннымфактором роста для Th2-типа.

IL-4 усиливает экспрессию на мембране тучныхклетокFcεRI,атакжеучаствуетвпереключениисинтезаизотиповиммуноглобулинов с IgM на IgE и IgG4, таким образом, непосредственнопринимая участие в развитии аллергической или смешанной бронхиальнойастмы [15]. Согласно проведенному исследованию, спонтанная продукция IL-4была статистически достоверно выше у больных аллергической и смешаннойбронхиальной астмой, но не у больных, страдающих неаллергической БА (рис.29).Рисунок 29. Спонтанная продукция IL-4 мононуклеарными клеткамиздоровых доноров и больных бронхиальной астмой различных форм.Выявили, что лиганды TLR2 и TLR4, а именно ЛПС и ПГ, не оказываютвлияние на продукцию IL-4 МНК периферической крови человека (рис.

30).91Рисунок 30. Спонтанная и стимулированная ЛПС и ПГ продукция IL-4мононуклеарными клетками здоровых доноров и больных бронхиальной астмойразличных форм.В работе Duan D и соавт. на животной модели было показано, чтовирусная инфекция индуцирует снижение синтеза IL-4 лимфоцитами, и этиизменения регулируются сигнальным путем TLR-MyD88-NF-κB [52]. При этом,в работах Reece P. и соавт. было показано, что IL-4 может изменятьчувствительность CD34+ клеток к ЛПС [167].

Основным продуцентом IL-4 впериферической крови являются лимфоциты, а на данных клетках исследуемыеTLR представлены в гораздо меньшей степени, чем на моноцитах [4]. Это можетобъяснить отсутствие TLR-индуцированной продукции МНК периферическойкрови IL-4.3.4.5 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-13МНК периферической крови больных бронхиальной астмойIL-13 вырабатывается Th2 типа, обладает плейотропным действием иучаствует в патогенезе бронхиальной астмы [50].

При бронхиальной астмеформируетсявоспалительнаяреакция,приводящаякэозинофилии,92повреждению тканей и патологии дыхательных путей. IL-13 играет важную рольв привлечении эозинофилов в дыхательные пути при бронхиальной астме.Показано, что IL-13 участвует в переключение изотипов иммуноглобулина наIgE, являющегося маркером воспаления при аллергических заболеваниях [50,161].Установили, что уровень продукции IL-13 МНК периферической кровибольных аллергической и смешанной БА по сравнению со здоровыми донорамисущественно не менялся (рис.

31). Однако было выявлено статистическидостоверное уменьшение продукции МНК IL-13 у пациентов, страдающихнеаллергической бронхиальной астмой. При этом культивирование МНК вприсутствии ЛПС и ПГ также не приводило к изменению продукции IL-13 МНКпериферической крови здоровых доноров или в обследуемых группах больныхБА.Рисунок 31. Спонтанная продукция IL-13 мононуклеарными клеткамиздоровых доноров и больных бронхиальной астмой различных форм.Известно, что IL-13 – это цитокин поздней стадии воспалительногопроцесса у больных аллергопатологией. Этот цитокин непосредственнопринимает участие в формировании гиперреактивности дыхательных путей.93На следующем этапе выявили, что действие ЛПС и ПГ не приводит кизменению продукции IL-13 МНК периферической крови здоровых доноров иливо всех группах больных БА (рис. 32).Рисунок 32.

Спонтанная и стимулированная ЛПС и ПГ продукция IL-13мононуклеарными клетками здоровых доноров и больных бронхиальной астмойразличных форм.Таким образом, нами не было установлено увеличения индуцированнойлигандами TLR2 и TLR4 продукции IL-13 МНК периферической крови во всехтрех группах больных БА по сравнению со здоровыми донорами. Наши данныесоотносятся с результатами исследования Dovoodi P. и соавт. в котором былопоказано, что уровень IL-13 в сыворотке больных бронхиальной астмойдостоверно не отличается от здоровых людей [46]. Известно, что in vitroактивация через TLR2 на эпителиальных клетках может приводить к продукцииIL-13.