Диссертация (Анализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов у больных бронхиальной астмой), страница 8

Известно, чтомоноциты и макрофаги широко экспрессируют на своей поверхности TLR. Болеетого, с TLR4 функционально связан один из основных маркеров моноцитов имакрофагов – молекула CD14. В опытах на мышиных моделях было показано, чтопри развитии HDM-индуцированной бронхиальной астмы отмечалась активацияальвеолярныхмакрофагов,выражающаясявусиленииэкспрессиикостимулирующих молекул, CD40 и CD86.

Была установлена сильная корреляциямежду усилением экспрессии CD40 и CD86 и активацией TLR4 [44, 84].Макрофагилегкихпредставляютсобойгетерогеннуюклеточнуюпопуляцию, в которую входят альвеолярные и интерстициальные макрофаги.Легочные макрофаги выполняют несколько функций, например поддержаниестерильности дыхательных путей [28].Альвеолярные макрофаги происходят либо из циркулирующих моноцитовпериферической крови, либо из интерстициальных макрофагов. После контакта спатогеном в зависимости от цитокинового микроокружения альвеолярныемакрофаги могут пойти по классическому пути дифференцировки, M1 тип, или поальтернативному пути, M2 тип [91].

M1 макрофаги играют большую роль принеаллергической бронхиальной астме, а M2 макрофаги – при аллергическойбронхиальной астме [170].M1 макрофаги являются провоспалительными. Индукция M1 макрофаговIFNγ и ЛПС приводит к продукции оксида азота, TNFα, TNF-β, IL-1β, IL-6 и IL-12[91]. При этом все больше данных, что M1 макрофаги, продуцируя IL-1β и IL-6,усугубляют Th2-воспаление, способствуют активации фибробластов [206]. Наэкспериментальной животной модели показано, что продукция M1 макрофагамиIL-1β, ΙL-6 и TNFα индуцирует продукцию Th2 цитокинов [80]. При этом, убольныхтяжелойбронхиальнойастмой,резистентныхклечениюглюкокортикостероидам, популяции макрофагов смещены в сторону M1 [103].45Эти клетки продуцируют TNFα, IL-1β и оксид азота (NO), таким образомусугубляя повреждение легких и ускоряя ремоделирование дыхательных путей.Альтернативно активированные M2 макрофаги, под воздействием IL-4, IL13, вырабатываемых Th2 клетками, продуцируют IL-10 и ΤGF-β [68].

Среди M2макрофагов выделяют несколько подтипов, среди которых принципиальную рольв развитии аллергического воспаления могут играть M2a макрофаги. Данный типклетокпринимаетучастиевполяризацииTh2иммунногоответаиремоделировании тканей, за счет высокой продукции IL-4 и IL-13. Помимо этого,CCL-17, CCL-18, CCL-22 и эотаксин-2, которые также вырабатываются M2клетками, усиливают привлечение Th2-лимфоцитов и эозинофилов в легкие [203].Показана более существенная роль циркулирующих моноцитов, чемальвеолярных макрофагов, в поддержании аллергического воспаления [203].Согласно экспериментальному исследованию, при удалении циркулирующихмоноцитов, в БАЛе существенно снижался уровень TGF-β.

Циркулирующиемоноциты периферической крови являются продуцентами IL-5, являющегосяхемоаттрактантом для эозинофилов [244]. Также, в эксперименте на мышах былоустановлено, что именно циркулирующие моноциты,привлеченные в тканилегкого в ответ на аллергены клещей домашней пыли, в больших количествахвырабатывают IL-33 [203].Таким образом, согласно современным представлениям о патогенезебронхиальной астмы, в развитии и поддержании воспаления дыхательных путейиграет множество клеточных и гуморальных факторов врожденного иммунитета.Индукция механизмов врожденного иммунитета с одной стороны вноситсобственный вклад в поддержание воспаления, а с другой – активирует клеткиадаптивного иммунитета (рис.

5).46Рисунок 5. Роль факторов врожденного иммунитета в патогенезе бронхиальной астмы (модифицировано изDeckers J., 2013) [47].47ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1. Объекты исследованияВ настоящей работе исследовали периферическую кровь здоровых донорови больных контролируемой БА разных форм (аллергической, смешанной инеаллергического) легкого и среднетяжелого течения.Группа здоровых доноров составила 30 человек от 18 до 45 лет, среди них14 мужчин и 16 женщин. Кровь была предоставлена отделением переливаниякрови и гравитационной хирургии РДКБ ФГБОУ ВО РНИМУ им.

Н.И. ПироговаМинздрава России.Группа больных контролируемой БА легкого и среднетяжелого течениясоставила 77 человек.Критериями включения в исследование являлся установленный диагнозаллергической,смешаннойилинеаллергическойбронхиальнойастмы,контролируемое течение заболевания (медикаментозный контроль или периодремиссии заболевании – вне сезона цветения), ингаляционная базисная терапия,отказ от приема глюкокортикостероидов системного действия минимум за 4недели до забора крови для проведения исследования, отсутствие хроническихзаболеваний в анамнезе.Критериями исключенияиз исследования являлись:хроническиевоспалительные заболевания; сахарный диабет; болезни щитовидной железы;дыхательная недостаточность II–III степени; хроническая обструктивная болезньлегких (ХОБЛ); хроническая сердечная недостаточности (ХСН); приемсистемных ГКС минимум за 4 недели до забора крови.Всем больным бронхиальной астмой диагноз был поставлен в отделениеиммунопатологии ФГБУ «ГНЦ Институт иммунологии» ФМБА России всоответствии с принятой Международной классификацией болезней десятогопересмотра(МКБ-10).Всепациентыполучалибазиснуютерапию,предусмотренную протоколом ведения больных БА, в соответствии с48верифицированным диагнозом и степенью тяжести заболевания (GINA 2015)[64].В соответствии с выбранными критериями были отобраны больныеконтролируемойБАлегкогоисреднетяжелоготечениязаболевания.Учитывалась клиническая картина пациентов, жалобы и анамнестическиеданные; проводилось клинико-функциональное обследование с целью оценкиобратимости обструкции дыхательных путей, специфическое аллергологическоеобследование (определение уровня специфического IgE и результаты кожныхтестовсаллергеном).Дифференциальнаядиагностикапроводиласьвсоответствии с действующими клиническими рекомендациями (2016 г, РААКИ).Пациентов разделяли на 3 группы с учетом МКБ-10.I группу составили больные контролируемой аллергической бронхиальнойастмой легкого и среднетяжелого течения заболевания (n= 49) в возрасте 19-53лет.

В группу входили пациенты с установленным диагнозом аллергической БАлегкой степени тяжести (n=21) в возрасте 19-53 лет, среди них 10 мужчин и 11женщинипациентысустановленнымдиагнозомаллергическойБАсреднетяжелого течения (n=28) в возрасте 19-44 лет, среди них 11 мужчин, 17женщин.Диагноз аллергической БА устанавливался при наличии у пациентовподтвержденной атопии (на основании клиники и повышения уровняспецифического IgE в сыворотке крови к одному или нескольким аллергенамили положительных результатов кожных тестов с аллергеном).В данную группу входили пациенты с поливалентной сенсибилизацией каллергенам пыльцы деревьев и сорных трав (n=17), пациенты с поливалентнойсенсибилизацией к аллергенам деревьев, сорных трав и бытовым аллергенам(n=16), а также группа пациентов с сенсибилизацией только к бытовымаллергенам, имеющих круглогодичный характер заболевания (n=16).II группу составили больные контролируемой смешанной бронхиальнойастмой среднетяжелого течения заболевания (n=17) в возрасте 28-61 года, срединих 4 мужчины и 13 женщин.49У пациентов в данной группе была подтверждена атопия (на основанииклиники и повышения уровня специфического IgE в сыворотке крови к одномуили нескольким аллергенам или положительных результатов кожных тестов саллергеном).

Все 17 пациентов имели поливалентную сенсибилизацию каллергенам деревьев и сорных трав. Круглогодичный характер течениязаболевания наблюдался за счет присоединения инфекционного компонента исопровождался наиболее тяжелыми обострениями в осенне-зимний период нафоне развития ОРВИ или другого инфекционного процесса.III группу больных составили больные контролируемой неаллергическойбронхиальной астмой среднетяжелого течения заболевания (n=11) в возрасте 2065 лет, среди них 1 мужчина и 10 женщин.У пациентов данной группы отсутствовали данные о наличие атопии(отрицательные кожные пробы/отсутствие специфического сывороточного IgE).Ведущий компонент воспаления – инфекция (обострения в зимне-осеннийпериод на фоне инфекционных заболеваний).

Из данной группы исключенытакие диагнозы как астматическая триада, астма физической нагрузки.Кровь забирали из кубитальной вены в гепаринизированные пробирки,(гепарин, из расчета 25 ед. на 1 мл крови). Забор крови осуществлялся утром,натощак.Всеобследуемые,включенныевисследование,подписывалиинформированное согласие.