Диссертация (Анализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов у больных бронхиальной астмой)
Описание файла
Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Анализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов у больных бронхиальной астмой". PDF-файл из архива "Анализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов у больных бронхиальной астмой", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "медицина" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве РНИМУ им. Пирогова. Не смотря на прямую связь этого архива с РНИМУ им. Пирогова, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата медицинских наук.
Просмотр PDF-файла онлайн
Текст из PDF
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «РОССИЙСКИЙНАЦИОНАЛЬНЫЙ ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙУНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ Н.И.ПИРОГОВА» МИНИСТЕРСТВАЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИНа правах рукописиОгурцова Анастасия ДмитриевнаАнализ экспрессии и функциональной активности Toll-подобных рецепторов убольных бронхиальной астмой14.03.09 – клиническая иммунология, аллергологияДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучные руководители:доктор медицинских наук,доцент М.В.Хоревадоктор медицинских наук,профессор Т.В. ЛатышеваМосква – 20182СодержаниеВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 5ГЛАВА 1.
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .............................................................................. 131.1 Характеристика Toll-подобных рецепторов ........................................................ 131.1.1 Характеристика и функции Toll-подобного рецептора 2 ................................ 171.1.2 Характеристика и функции Toll-подобного рецептора 4 ................................ 191.1.3 Сигнальные пути TLR2 и TLR4.......................................................................... 201.2 Роль Toll-подобных рецепторов в патогенезе аллергических заболеваний .....
211.2.1 Роль Toll-подобных рецепторов в патогенезе бронхиальной астмы .............. 241.3 Роль цитокинов в патогенезе бронхиальной астмы ............................................ 311.3.1 Роль цитокинов адаптивного иммунитета в патогенезе бронхиальной астмы......................................................................................................................................... 311.3.2 Роль цитокинов врожденного иммунитета в патогенезе бронхиальной астмы.........................................................................................................................................
341.4 Современные представления о роли механизмов врожденного иммунитета впатогенезе бронхиальной астмы .................................................................................. 38ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .................................... 472.1. Объекты исследования .......................................................................................... 472.2 Разработка дизайна исследования .........................................................................
502.3. Реактивы .................................................................................................................. 532.4. Анализ экспрессии TLR2 и TLR4 на поверхности моноцитов методомпроточной цитофлюориметрии.................................................................................... 542.5. Выделение мононуклеарных клеток из периферической крови человека ....... 552.6. Культивирование МНК периферической крови человека .................................
5632.7. Определение концентрации цитокинов в культуральных супернатантахметодом иммуноферментного анализа ....................................................................... 562.8. Оценка экспрессии генов TLR2, TLR4 в мононуклеарных клеткахпериферической крови человека ................................................................................. 582.8.1 Выделение РНК из мононуклеарных клеток периферической крови человека.........................................................................................................................................
582.8.2 Проведение реакции обратной транскрипции .................................................. 592.8.3 Постановка полимеразной цепной реакции с детекцией в режиме реальноговремени ........................................................................................................................... 602.9. Статистическая обработка результатов ............................................................... 62ГЛАВА 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ ............................................................ 633.1 Анализ экспрессии генов TLR2, TLR4 в мононуклеарных клеткахпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................
633.2 Определение экспрессии TLR2, TLR4 на поверхности моноцитовпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 673.3 Анализ функциональной активности TLR2 и TLR4 по индуцированнойлигандами продукции TNFα МНК периферической крови больных бронхиальнойастмой .............................................................................................................................
733.4.1 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-18 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 803.4.2 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-33 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой ...........................................
833.4.3 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-10 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 863.4.4 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-4 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой ...........................................
9043.4.5 Анализ спонтанной и TLR2- и TLR4-индуцированной продукции IL-13 МНКпериферической крови больных бронхиальной астмой............................................ 913.5 Исследование влияния Der p и комбинации Der p с ЛПС на продукцию TNFα,IL-4, IL-13 у больных аллергической бронхиальной астмой. .................................. 94Заключение .................................................................................................................. 101Выводы .........................................................................................................................
112Практические рекомендации……………………………………………………………...….113Список сокращений .................................................................................................... 114Список литературы ..................................................................................................... 1155ВВЕДЕНИЕАктуальностьВ настоящее время одной из актуальных проблем фундаментальной иклинической иммунологии является изучение механизмовврожденногоиммунитета. Ключевой функцией врожденного иммунитета считают способностьк распознаванию патоген-ассоциированных молекулярных паттернов (PAMP)паттерн-распознающими рецепторами (PRR). К ним, в частности, относят Tollподобные рецепторы (TLR), которые играют решающую роль в ранней защитеорганизма от патогенов.
TLR представлены на поверхности и в эндосомахразличных гемопоэтических и негемопоэтических клеток человека, таких какмоноциты/макрофаги, эпителиальные клетки и пр. [215]. При распознаваниилигандов TLR происходит запуск каскада сигнальных молекул, в результатекоторого экспрессируютсягены про- и противовоспалительных цитокинов,хемокинов, костимуляторных молекул.В связи с тем, что TLR экспрессируются на многих клетках организма ираспознают широкий спектр лигандов, они вовлечены в патогенез многихзаболеваний.ПолиморфизмгеновTLR,нарушенияэкспрессииданныхрецепторов на клетке, распознавания лигандов или трансдукции сигнала могутспособствоватьразвитиюинфарктамиокарда,острогодеструктивногопанкреатита, различных аллергических заболеваний, в том числе бронхиальнойастмы, и др. заболеваний [23, 33, 135]. Астма является хроническим, широкораспространенным заболеванием, характеризуется обструкцией дыхательныхпутей и воспалением.
В настоящее время заболеваемость бронхиальной астмойсоставляет более 334 миллионов человек по всему миру[230]. Благодарямногочисленным исследованиям в этой области появляются новые данные опатогенезе бронхиальной астмы, характере течения заболевания, новые подходы кклассификации и терапии. Современные стандарты лечения и профилактикибронхиальной астмы, включающие применение глюкокортикостероидов ибронходилататоровкороткогоипролонгированногодействия,позволяют6успешно контролировать течение заболевания [230], но несмотря на это причиныи механизм развития заболевания полностью не установлены, и продолжаетсяпоиск новых мишеней для эффективного лечения больных.
Одним изперспективных направлений современной клинической иммунологии являетсяприменение агонистов и антагонистов TLR в терапии аллергических заболеваний.Известны экспериментальные работы на животных моделях, показывающиеэффективность использования антагониста TLR4 для уменьшения воспаления вдыхательныхпутях[126].АгонистыTLR2рассматриваютвкачестветерапевтических агентов, однако они могут не только ингибировать каскадвнутриклеточных реакций, но и поддерживать развитие воспалительногопроцесса [61].
