Диссертация (Свободные и координированные ионами Pt(II), Pd(II) тетразолилуксусные кислоты как перспективные скаффолды в синтезе новых биологически активных веществ), страница 11

PDF-файл Диссертация (Свободные и координированные ионами Pt(II), Pd(II) тетразолилуксусные кислоты как перспективные скаффолды в синтезе новых биологически активных веществ), страница 11 Химия (47654): Диссертация - Аспирантура и докторантураДиссертация (Свободные и координированные ионами Pt(II), Pd(II) тетразолилуксусные кислоты как перспективные скаффолды в синтезе новых биологически ак2019-06-29СтудИзба

Описание файла

Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Свободные и координированные ионами Pt(II), Pd(II) тетразолилуксусные кислоты как перспективные скаффолды в синтезе новых биологически активных веществ". PDF-файл из архива "Свободные и координированные ионами Pt(II), Pd(II) тетразолилуксусные кислоты как перспективные скаффолды в синтезе новых биологически активных веществ", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "химия" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве СПбГУ. Не смотря на прямую связь этого архива с СПбГУ, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата химических наук.

Просмотр PDF-файла онлайн

Текст 11 страницы из PDF

На основанииполученных данных рассчитывали 50% эффективную концентрацию (EC50),т.е. концентрацию препарата, снижающую вирусную продукцию вдвое ииндекс селективности SI – отношение CTD50 к ED50.Исследованиефармацевтическойпроводилосьхимиив«ИнститутетехническогомедицинскойуниверситетаиБрауншвейха».Антипролиферативные эффекты на клетках HT-29, MDA-MB-231 и RC-124оценивали через 72 часа (HT-29), 96 ч (MDA-MB-231), 96 ч (RC-124) сиспользованием кристалл фиолетового реагента. Клетки HT-29, MDA-MB231 и RC-124 выдерживали в клеточной культуральной среде (дополненная2,2 г NaHCO3, 110 мг L-1 пируватом натрия и 50 мг L-1 гентамицинасульфата, рН 7.4), содержащую 10% (V/V) фетальной телячьей сывороткипри 37 ° С в 5% СО2.

Для экспериментов использовали свежеприготовленныерастворы соединений.Исходные комплексы растворялив ДМФА иразбавляли культуральной средой до рабочих концентраций (0,1% ДМФА).Значение IC50 определялось как концентрация, уменьшающая пролиферациюнеобработанных контрольных клеток на 50%.2.12. Биологические эксперименты для соединений(анализ клеточной культуры и цитотоксичности в клетках MCF-7)Культураклеток.Исследованиецитотоксическойактивности,клеточного цикла и колориметрические тесты для оценки метаболическойактивности клеток были проведены в «Научно-исследовательском институтебиомедициинской химии им. В.Н.

Ореховича».Раковые клетки рака молочной железы MCF-7 были получены изколлекцииАТСС,ибылисохраненывкриобанкедонастоящихэкспериментов. Клетки MCF-7 культивировали в среде Игла в модификацииДульбекко (DMEM). К среде была добавлена 10% эмбриональная телячьясыворотка (FBS) («Sigma», США), L-глутамин («Sigma», США) (250 мг/л),пенициллин (100 ед/мл), стрептомицина (100 мг/л). Полученную смесь78помещали в лунки 96-луночных микропланшет и инкубировали 24 ч при 37ºС в атмосфере воздуха с 5 % СО2. Клетки субкультивировали два раза внеделю после стандартной трипсинизации.2.12.1. Колориметрические тесты оценки жизнеспособности клетокКолориметрические тесты основаны на способности дегидрогеназживых клеток превращать бледно-желтые соли 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)2,5-дифенилтетразолий бромид (МТТ) или [3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-5-(3карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)]-2H-тетразолий(МТS)вокрашенные в темно-синий цвет производные формазана.

Количествообразовавшегося формазана (определяемое колориметрическим методом)характеризует интенсивность окислительно-восстановительных процессов вопухолевыхклеткахиможетявлятьсякритериемстепениихчувствительности к противоопухолевым свойствам препарата [180, 181]. Внастоящей работе жизнеспособность клеток оценивали с помощью 3-(4,5диметилтиозол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолий бромида (МТТ). Для этого5.0∙105 клеток MCF-7 в среде погружали в лунки и выдерживали в течение 24часов.

Клетки (70-80% конфлюентных) обрабатывали комплекснымисоединениями в концентрациях 1-60 мкМ, выдерживали в течение 48 ч вкультуральнойсреде.Клетки,используемыевкачествеконтроля,инкубировали с максимальным количеством разбавителя ДМФА (0.1%).После инкубации в течение 48 часов добавляли МТТ-раствор (5 мг/мл) иклетки инкубировали в течение 4 часов.

Концентрацию, при которойпроисходит ингибирование жизнеспособности, определяли путем измеренияоптической плотности , используя тест-фильтр 570 нм. Величина поглощенияпрямо пропорциональна числу живых клеток.Жизнеспособность обработанных клеток выражали в процентахотносительножизнеспособностиклеток,обработанныхконтрольнымсредством. Каждый эксперимент выполняли независимо, повторяя по трираза.792.12.2. Исследование клеточного циклаВ каждую лунку в среду наносили 5.0∙105 клеток MCF-7 на 6-луночныепланшеты. После 24-часовой инкубации клетки обрабатывали эффективнымиконцентрациями, описанными выше. В качестве контроля использоваликлетки, обработанные ДМСО (1%). После 24 ч инкубации клетки дваждыпромывали натрий-фосфатным буфером (pH 7.4), трипсинизировали ицентрифугировали при 360 g в течение 5 мин.

Затем супернатант удаляли иклетки фиксировали в охлажденном этаноле (70% V/V). Чтобы определить вних содержание ДНК, клетки окрашивали пропидий йодидом (PI) ианализировали с использованием проточного цитометра Beckman CoulterCytomicsFC500.Полученныерезультатыбылиобработанысиспользованием программного обеспечения Multicycle AV (Phoenix FlowSystems, США).80Представленные в главе 2 экспериментальные данные иллюстрируютразработанные в рамках диссертационной работы методы синтеза иисследования некоторых тетразолильных производных аминокислот, а такжекомплексов хлоридов платины(II) и палладия(II) с 2R-2Н-тетразол-5-ил- и 5метилтетразол-1-илуксусными кислотами и их производными. Описанные вработе методики являются удобными, безопасными и, как правило,характеризуютсявысокимивыходамипродуктов.Структурасинтезированных комплексов была установлена современными физикохимическими методами исследования.

Характеристики использованногооборудования позволяют говорить о точности и достоверности проведенныхизмерений.Для установлениясоставаистроениясинтезированныхсоединений применялись методы рентгеноструктурного анализа, массспектрометрии,ИК-спектроскопии,элементногоисинхронноготермического анализа. Чистота соединений контролировались методами 1Н и13С ЯМР-спектроскопии и высокоэффективной жидкостной хроматографией.Исследованиебиологическойактивностиinvitroпроводиласьсиспользованием современных биофизических и биохимических методик,совокупностькоторыхпозволяетохарактеризоватьпротивовируснуюактивность тетразолильных аналогов некоторых природных аминокислот, атакже противоопухолевую активностьпроизводных тетразолилуксуныхкислот, координированных с ионами Pt(II), Pd(II).81ГЛАВА 3Синтез тетразолилуксусных кислот и их производных3.1.

Синтез 1Н-тетразол-1-ил- и 2Н-тетразол-5-илуксусных кислоти их производныхЭтиловые эфиры 1- и 2-тетразол-5-илуксусных кислотЭтиловый эфир 1Н-тетразол-5-илуксусной кислоты (1) синтезирован сиспользованием 1,3-диполярного циклоприсоединения из цианоэтилацетата иазида натрия в присутствии триэтиамингидрохлорида в среде ДМФА притемпературе 100-120 °С по известной процедуре (Схема 3.1). [9].Схема 3.1Целевой продукт был очищен от примесей перекристаллизацией изизопропилового спирта.Присутствие тетразолильного фрагмента в структуре исследуемогосоединения подтверждается наличием сигнала гетероцикличекого атомауглерода в спектре ЯМР 13С при δ 153.48 м.д.Этиловые эфиры 2-изо-пропил-2Н- и 2-трет-бутил-2Н-тетразол-5илуксусных кислот (2, 4) были получены селективным алкилированиемэтилового эфира 1Н-тетразол-5-илуксусной кислоты изо-пропиловым итрет-бутиловым спиртами соответственно, в смеси серной и уксуснойкислот при комнатной температуре.

По окончании реакции продуктыэкстрагировали хлороформом из разбавленного водного раствора. Строениесоединений 2, 4 подтверждено методами HRESI+-MS, 1H,спектроскопией. В спектре ЯМР13C{1H}ЯМР-13C наблюдается сигнал четвертичногоэндоциклического атома углерода при 150 - 160 м.д., который надежноподтверждает 2Н-изомерию продуктов реакции 2, 4.82Схема 3.2.Схема 3.3.N-(2-гидроксиэтил)производные получали посредством неселективногоалкилирования NH-незамещенного тетразола галогеналканом.

В результатереакции этилового эфира 1Н-тетразол-5-илуксусной кислоты с бромэтаноломбыла получена смесь, которую впоследствии разделили методом колоночнойхроматографии.Врезультатебылиполученыэтиловыеэфиры2-гидроксиэтил-2Н-тетразол-(7) и 1-гидроксиэтил-1Н-тетразол-5-илуксуснойкислоты (8) (Схема3.3).Этиловый эфир5-метил-1Н-тетразол-1-илуксусной кислотыЭтиловый эфир получали алкилированием триэтиламмониевой соли 5метил-1Н-тетразола (9) этилхлорацетатом в среде ацетонитрила.

Продуктыалкилирования – этиловые эфиры тетразол-1-ил- (10) и тетразол-2илуксусных кислот разделяли с помощью колоночной хроматографии.Эфир 10 очищали методом дробной кристаллизации из водногоэтанола. Этиловый эфир 5-метилтетразол-1-илуксусной кислоты был далееиспользован в синтезе амидов.83Схема 3.4.Схема 3.5.Тетразол-5- и тетразол-1-илуксусные кислотыПроцесс гидролиза эфиров тетразолилуксусных кислот протекает вводной среде полностью в течение часа. Выход продуктов этой реакциипрактическиколичественный.Полученныетакимобразомтетразолилуксусные кислоты представляют собой чистые соединения имогут быть использованы для дальнейших исследований без дополнительнойочистки.

Таким образом была получена 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксуснаякислота 11, а также 2-изо-пропил- (3) и 2-трет-бутил-2Н-тетразол-5илуксусные кислоты (6) (cхема 3.7)Схема 3.6.84Схема 3.7.Амиды тетразол-5-ил- и тетразол-1-илуксусных кислотАмиды тетразолилуксусных кислот получали с использованиемреакций соответствующих кислот или их эфиров с аминами (Схема 3.8).Для проведения аминолиза использовали высокоосновные амины:(рКВН+= 11.18.5), аммиак, втор-бутиламин, циклопропиламин.

Процессаминолиза осуществлялся при избыточном содержании амина по отношениюк эфиру тетразолилуксусной кислоты в метанольном растворе.Схема 3.8Схема 3.9.853.2. Синтез аналогов аминокислот, в которых α-NH2-группа замещена на1Н-тетразол-1-ильный фрагмент(2S)-4-(Бензилокси)-4-оксо-2-(1Н-тетразол-1-ил)бутановая кислота (15),(2S)-5-(Бензилокси)-5-оксо-2-(1H-тетразол-1-ил)пентановая кислота (16)1-Замещенные-1Н-тетразолы могут быть получены гетероциклизациейпервичных аминов с азидом натрия и ортоэфирами [91-96].

В литературеимеютсяданныеосинтезететразолильныханалоговприродныхаминокислот, содержащих 1Н-тетразол-1-ильный фрагмент в боковой цепина значительном удалении от асимметрического атома углерода, чтообеспечивало сохранение их оптической чистоты [97 ,98]. Такие соединениябыли использованы в том числе в синтезе пептидомиметиков [98].В работе [99] описан метод получения производных 1R,1H-тетразол-1илуксусной кислоты с использованием реакции -аминогруппы природныхаминокислот. В данной работе, однако, оптическая чистота получаемыхпродуктов реакции не обсуждалась. Учитывая то, что аминогруппа в этомслучаенепосредственносвязанас хиральнымцентром,вопрособэнантиоселективности таких реакций остается открытым.В настоящей работе из соответствующих энантиомерно чистых γбензиловых эфиров L-аспарагиновой и L-глутаминовой аминокислот намисинтезированы соответствующие 2-1Н-тетразол-1-илпропионовые кислоты15, 16 (схема 3.10).

Строение и состав полученных соединений былиустановлены методами 1Н и 13С ЯМР спектроскопии и масс-спектрометрии, атакже с использованием метода хиральной высокоэффективной жидкостнойхроматографии была определена их энантиомерная чистота.86Схема 3.10Тетразолильные аналоги 15, 16 были получены из соответствующих Lаминокислот, азида натрия и триэтилортоформиата в среде ледяной уксуснойкислоты при умеренном нагревании.

Оба соединения были выделены схорошими выходами.Структуратетразоловспектроскопии ЯМР1H и15,1316былаустановленаC. Так, в спектрах ЯМРметодами1Н данныхтетразолильных соединений сигнал атома водорода при эндоциклическомуглероде (С5-Н) проявляется синглетами в области слабого поля при δ 9.19.4м.д. Сигналы эндоциклических атомов углерода в спектре ЯМРС13наблюдаются при δ 144146 м.д.Определенные методом хиральной ВЭЖХ величины энантиомерногоизбытка (ее) для соединений 15, 16 приведены в таблице 3.1.

Свежие статьи
Популярно сейчас
А знаете ли Вы, что из года в год задания практически не меняются? Математика, преподаваемая в учебных заведениях, никак не менялась минимум 30 лет. Найдите нужный учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
5288
Авторов
на СтудИзбе
417
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее