Диссертация (Свободные и координированные ионами Pt(II), Pd(II) тетразолилуксусные кислоты как перспективные скаффолды в синтезе новых биологически активных веществ), страница 6

Три из них (R = 2NO2-фенил,3-NO2-фенили4-NO2-фенил)показализаметноеингибирующее действие по отношению к клеточной линии MCF-7. В то жевремя, соединение с R = 2,4-диметоксифенил демонстрирует более заметныйингибирующий эффект для MDA-MB-231 и клеточной линии ZR-75 вконцентрации 10-5 М [79].Схема 1.3747Схема 1.38Противоопухолевой активности новых производных 79-81 индолатетразолсодержащих содержащего было документально подтверждено [80].Этисоединениябылисинтезированыиз2-(2-фенил-1H-индол-1-ил)ацетонитрила в несколько стадий (схема 1.38).Согласно исследованию их противоопухолевой активности противклеточной линии карциномы печени человека (HepG2), соединение 79является наиболее активным (IC50 4,2 мкг / мл) [80].За последние 10-15 лет, тетразолы стали широко использоваться приразработкеновыхэффективныхпротивоопухолевыхагентов.Тетразолильный фармакофорный фрагмент может быть введен в структуруорганическихиметаллоорганическихсоединений,обладающихпротивоопухолевой активностью (координационных соединений переходныхметаллов и природных противоопухолевых агентов) с целью оптимизации ихсвойств или даже сам может выступать в качестве основы биологически48активных соединений.

Было показано, что, используя тетразолы в качествелигандов,можнополучитьвысокоэффективныеметаллсодержащиепротивоопухолевые агенты, проявляющие меньше побочных эффектов посравнению с другими соединениями данного типа. Изучение тетразолильныхкомплексовнеплатиновыхметаллов(золото,медь,железоит.д.)представляется достаточно перспективным, поскольку такие соединениямогут ингибировать рост раковых клеток одновременно по различныммеханизмам.Включениестабильного,медленнометаболизируемоготетразольного фрааагмента в структуру природных противоопухолевыхагентов (биогенные кислоты, пептиды, стероиды, комбретастатин и т.д.)являетсятакжеперспективнымподходомдляразработкиновыхпротивоопухолевых препаратов.

Активность некоторых таких соединенийсопоставима или превышает активность природных аналогов. Были такженайденырядытетразолов,которыеперспективныдлядальнейшейоптимизации.49ГЛАВА 2ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ2.1. Приборы и методыМасс-спектры регистрировали на спектрометрах Bruker MicroTOF иShimadzu MALDI-TOF Axima Resonance. Спектры 1H иC{1Н} записывали13спектрометре «Bruker 300 МГц DPX, Bruker 400 МГц WB Avance III и Bruker500 МГц Avance III при рабочих частотах 300, 400 МГц (1Н) и 100 МГц (13С).1H и13C{1Н} химические сдвиги определяли по отношению к сигналудейтерированных растворителей (ДМСО-d6, D2O, CDCl3) при 298 К.Синхронный термический анализ комплексов проводили на прибореNETZSCH STA 449F1 в потоке аргона (100 мл мин-1) со скоростью нагрева10°C мин-1 в алюминиевых тиглях.

ИК-спектры образцов регистрировали наспектрометрах IRAffinity-1 и Shimadzu FTIR-8400 в таблетках KBr.Температуру плавления определяли на приборе ПТП со скоростью нагрева1°С в минуту в интервале плавления. Величины удельного вращенияплоскости поляризации монохроматического света [α]tD измеряли на прибореAutomatic Polarimeter AA-55.Энантиомерная чистота синтезированных производных аминокислотопределялась методом высокоэффективной жидкостной хроматографии нахроматографе Dionex ICS-500.

Условия анализа: колонка Chirobiotic T (Astec)250 х 4,6 мм, элюент – этанол/1% водный раствор триэтиламмоний ацетата(рН 4): (90:10), скорость потока 1 мл/мин, длина волны детектирования – 254нм.Анализ ВЭЖХ-МС проводили на приборе Shimadzu LCMS-8030(колонка Luna С18(2) 2,1 × 150 мм, 5 мкм) с использованием градиентоврастворителей: 30-95% растворителя A (ацетонитрил) и растворителя B (0.1%раствор муравьиной кислоты). Анализ ТСХ проводили на пластинах MerckTLC Silica gel 60 F254, элюент – смесь хлороформ-метанол,в смеси50хлороформ-метанол, детектирование УФ-излучением с длиной волны 254нм. Колоночную хроматографию проводили на силикагеле Acros organics(0.06-0.20 мм, диаметр пор 6 нм), а элюент – смесь хлороформ-метанол.УФ-спектрыультрафиолетовогопоглощенияраствороврегистрировали в диапазоне 220-320 нм на спектрометрах Shimadzu UV 2401PC и Shimadzu UV-1800 с использованием кварцевой кюветы.

Спектрыкругового дихроизма (КД) растворов регистрировались в диапазоне 220-300нм с помощью дихрографа Joben-Yvon Мark IV (длина пути 1 см),спектрополяриметра Jasco J-810 (длина пути 0.2 см) и приведены в единицахизмерения М-1∙см-1. Спектры флуоресценции записывали на флюорометре ПКShimadzu RF-5301.Рентгенструктурныйанализмонокристаллов.Длярентгеноструктурного анализа монокристаллы соединений 20, 29 · Н2О, 34 и35 выращивали, содержащей 5% (w/w) MeOH и 1М HCl; 23, 24 и 25 – в 1МHCl, содержащей 5% (w/w) EtOH, 22 – в смеси 50% (w/w) MeOH с 1М HCl;кристаллы комплекса 31 выращивали из смеси 20% (w/w) н-бутанола с 1 МHCl путем медленного испарения реакционной смеси при комнатнойтемпературе в течение 14 дней.Рентгеноструктурный анализ монокристаллов комплексов выполненна приборе SuperNova, Dual, Cu на нулевом атласном дифрактометре.Используя Olex2, структуры 20, 31 и 34 были расшифрованы с помощьюпрограммы ShelXS с использованием прямых методов и уточнены спомощью пакета уточнения ShelXL с использованием метода наименьшихквадратов.

Структуры соединений 23, 24, 25 и 35 были расшифрованы спомощью программы Superflip [32-34] с использованием Charge Flipping.Уточнение проведено с помощью пакета уточнения ShelXL также сиспользованием метода наименьших квадратов. Подходящие кристаллы 22 и29 · H2O отбирали и измеряли на рентгеновском дифрактометре Xcalibur.Используя Olex2 [29], структура была расшифрована с помощью программыSuperflip [32-34] с использованием Charge Flipping и уточнена с помощью51пакета уточнения ShelXL с использованием метода наименьших квадратов.Эмпирическая коррекция поглощения была применена в программномкомплексе CrysAlisPro (Agilent Technologies, 2014) с использованиемсферическихгармоник,реализованныхвSCALE3валгоритмемасштабирования ABSPACK.

Диффракционный анализ монокристалловвыполнен в ресурсном центре СПбГУ «Ренгтгенодифракционные методаисследования»2.2. Реагенты и растворителиPdCl2, K2PtCl4, все исходные реагенты, синтез которых не описан, атакже все растворители, были закуплены у коммерческих источников(качество не ниже «х.ч.») и использованы без дополнительной очистки.Азид натрия. Коммерческий образец азида натиря дополнительноочищали перекристаллизацией из водного ацетона [46].Диметилформамид.

Очистку диметилформамида проводили путемперегонки под вакуумом в токе аргона над молекулярными ситами. Для этогобрали не более, чем 1 литр растворителя, подлежащего осушке, встряхивалив течение 24 ч примерно с 30-50 мг молекулярных сит (4Å); после егоседиментации жидкость декантировали в перегонную колбу и перегоняли втоке аргона, защищая от атмосферной влаги [47]. ДМФА перегонялиописанным выше способом дважды. Содержание примесей в очищенномДМФА не превышало по данным ГЖХ и методу Фишера 0.1%. Дляизмерений применяли свежеперегнанный ДМФА.Ацетонитрил. Кипятили с обратным холодильником с KMnO4, затем спятиокисью фосфора, после чего отгоняли растворитель и перегонялиокончательно над прокаленным поташом [47].Остальные реактивы и материалы соответствовали нормам ГОСТ и ТУ.522.3. Синтез тетразолилуксусных кислот и их производных2.3.1.

Синтез эфиров тетразол-5-илуксусных кислотЭтиловый эфир 1Н-тетразол-5-илуксусной кислоты (1)14.58 г (0.13 моль) цианоуксусного эфира в 100 мл диметилформамидасмешивали с 10.00 г (0.15 моль) азида натрия и 12.70 г (0.16 моль)гидрохлорида диметиламмония. Полученную реакционную смесь нагревали15 часов при 115 oС. После охлаждения и отделения осадка хлорида натрия,фильтрат, содержащий диметиламмониевую соль этилового эфира тетразол5-илуксусной кислоты, упарили в вакууме и подкисляли 0.1 М солянойкислотой до pH 2. Осадок этилового эфира тетразол-5-илуксусной кислотыотфильтровывали,промываливодойивысушили.Продуктперекристаллизовали из изопропилового спирта.Выход: 7.04 г (41%). Т.пл. = 110 – 111оС. Спектр ЯМР 1Н (ДМСО-d6), ,м.д.: 1.19 т (3H, CH2CH3), 4.15 c (2H, C5-CH2), 4.13 м (2H, CH2CH3). СпектрЯМР 13С{1H}, , м.д.: 13.94 (CH2CH3), 29.53 (С5-СH2), 61.26 (CH2CH3), 150.53(CN4), 167.73 (C=O).

Найдено, %: C 38.62, H 4.94, N 35.63. C5H8N4O2.Вычислено, %: C 38.46, H 5.13, N 35.90Этиловый эфир (2-изо-пропил-2H-тетразол-5-ил)уксусной кислоты (2)К раствору 15 мл ледяной уксусной кислоты в 30 мл серной кислотыпри комнатной температуре добавляли 2.4 г (32.4 ммоль) трет-бутанола и2.53 г (16.2 ммоль) этилового эфира тетразол-5-илуксусной кислоты.Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре 2 ч, послечего добавляли 150 мл воды со льдом и обрабатывали хлористым метиленом.Органическую фазу промывали последовательно 5% раствором NaHCO3,водой и высушивали над безводным CaCl2 и упаривали в вакууме.