Диссертация (Свободные и координированные ионами Pt(II), Pd(II) тетразолилуксусные кислоты как перспективные скаффолды в синтезе новых биологически активных веществ), страница 9

Спектр ЯМР 1H (ДMСO-d6), δ, м.д.: 1.18 т (6H, CH2CH3),1.67 с (18H, CH(CH3)2), 3.92 м (4H, CH2CH3), 4.03 с (4H, C5-CH2). Спектр ЯМР13С{1H} (DMСO-d6), δ, м.д.: 13.9 (СH2CH3), 28.8 (C(CH3)3), 31.3 (С5-CH2), 60.8(CH2CH3), 63.7 (CH(CH3)2), 159.5 (CN4), 168.4 (C=O). Масс-спектр (HRESI+MS), m/z: 623.0839 [M+Н]+. C18H32Cl2N8NaO4Pd. Вычислено М 623.0856.транс-[PdCl2L2], L = этиловый эфир 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксуснойкислоты (34)Выход: 74.7 (89%).

Спектр ЯМР 1H (ДMСO-d6), δ, м.д.: 1.25 т (6H, CH2CH3),2.53 с (6H, N1-CH3), 4.22 м (4H, CH2CH3), 5.39 с (4H, CH2). Спектр ЯМР13С{1H} (DMСO-d6), δ, м.д.: 8.6 (CH3), 48.1 (CH2), 153.6 (CN4), 168.2 (C=O).Масс-спектр: m/z: 516.1109 [M]+. C12H20Cl2N8O4Pd. Вычислено М 516.0019.Синтез комплексов хлорида палладия (II) с бутиловым и изобутиловымэфирами 5-метил-1N-тетразолилуксусной кислоты (35, 36)Раствор 0.07 ммоль 5-метил-1Н-тетразол-1-улуксусной кислоты (11) в5 мл 1 М HCl добавляли к раствору 0.035 ммоль PdCl2 в 3 мл 1М HCl. Затем креакционной смеси добавляли 2 мл соответствующего ROH, интенсивноперемешивали в течение 1 ч.

Раствор изменил окраску с коричневой нажелтую. Реакционную смесь выдерживали при при комнатной температуре663-4недели.Отделялипорциюжелтогокристаллическогопродукта,промывали этанолом и сушили.транс-[PdCl2L2], L = бутиловый эфир 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксуснойкислоты (35)Выход: 165.5 мг (82%). Спектр ЯМР 1H (400 МГц, ДMСO-d6), δ, м.д.: 0.87 м(6H, CH3), 1.3 м (4H, CH2), 1.57 м (4H, CH2), 2.48 с (6H, CH3), 4.15 т (4H, CH2),5.5 с (4H, CH2). Спектр ЯМР13С{1H} (DMСO-d6), δ, м.д.: 8.0 (CH3), 13.4(CH3), 18.4 (CH2), 29.9 (CH2), 47.5 (CH2), 65.5 (CH2), 153.2 (CN4), 166.4 (C=O).Найдено, %: C, 33.67; H, 4.91; N, 19.69. C16H28N8Cl2O4Pd. Вычислено, %: C,33.49; H, 4.92; N, 19.53.транс-[PdCl2L2], L = изобутиловый эфир 5-метил-1Н-тетразол-1илуксусной кислоты (36)Выход: 179.7 мг (89%). Спектр ЯМР 1H (ДMСO-d6), δ, м.д.: 0.82 т (6H, CH3),1.19 д (6H, CH3, 3J 8.0 Гц), 1.54 м (4H, CH2), 2.47 с (6H, CH3), 4.83 м (2H, CH),5.48 с (4H, CH2).

Спектр ЯМР 13С{1H} (ДMСO-d6), δ, м.д.: 8.0 (CH3), 19.0(CH3), 28.0 (CH), 47.6 (CH2), 74.2 (CH2), 153.2 (CN4), 166.0 (C=O). Найдено,%: C, 32.90; H, 4.41; N, 19.69. C16H28N8Cl2O4Pd. Вычислено, %: C, 33.49; H,4.92; N, 19.53.Синтез комплексов палладия(II) и платины(II) c этиловым эфиром 2гидроксиэтил-2Н-тетразол-5-илуксусной кислоты (30, 31)Раствор 0,07 ммоль этилового эфира 2-гидроксиэтил-2Н-тетразол-5илуксусной кислоты в 3 мл 96% (V/V) этанола добавляли к раствору 0,035ммоль PdCl2 или K2PtCl4 в 7 мл 1 М соляной кислоты и выдерживали безперемешивания при комнатной температуре в течение 3-4 недель. По мереиспарения растворителя и концентрирования раствора формировалиськристаллы желтого цвета. Порцию желтого кристаллического продуктаотделяли, промывали этанолом и сушили.

Очистку полученных продуктов67осуществляли методом колоночной хроматографии (хлороформ/метанол, 9.5:0.5).транс-[PdCl2L2], L = этиловый эфир 2-гидроксиэтил-2Н-тетразол-5илуксусной кислоты (30)Выход: 102.5 мг (71%). Спектр ЯМР13С{1H} (101 МГц, ДMСO-d6), δ, м.д.:31.4 (CH2), 55.4 (CH2), 59.0 (CH2), 62.1(CH2), 160.2 (CN4), 169.8 (C=O).

Массспектр (HRESI+-MS), m/z: 598.0748 [M+Na]+. C14H24Cl2N8NaO6Pd. ВычисленоМ 576.0231.транс-[PtCl2L2], L = этиловый эфир 2-гидроксиэтил-2Н-тетразол-5илуксусной кислоты (31)Выход 103.2 мг (62%). Спектр ЯМРС{1H} (101 МГц, ДMСO-d6), δ, м.д.:1331.0 (CH2), 52.2(CH2), 55.5(CH2), 59.0(CH2), 159.7 (CN4), 168.9 (C=O). Массспектр(HRESI+-MS),m/z:687.9490,686.9491,688.9493[M+Na]+.C14H24Cl2N8O6Pt. Вычислено М 665.0844, 664.0822, 666.0845.Синтез комплексов хлорида платины (II) с этиловыми эфирамитетразолилуксусных кислот (25, 33)К раствору K2[PtCl4] (52 мг, 0,125 ммоль) в 5 мл 1М растворе солянойкислоты добавляли 5 мл раствора этанола, содержащего 46 мг (0.25 ммоль) 2трет-бутил-тетразол-5-илуксусной кислоты (в случае комплекса 28) или0.25ммоль () 5-метил-тетразол-1-илуксусной кислоты (в случае комплекса37).

Реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч при комнатнойтемпературе. Образовавшийся желтый раствор выдерживали при комнатнойтемпературе в течение 2 недель. Желтый кристаллический продуктпостепенно отделяли в течение этого периода, объединенную порциюкристалловочищалиметодомколоночнойхроматографии(хлороформ/метанол, 9.5:0.5).68транс-[PtCl2L2], L = этиловый эфир 2-трет-бутил-2Н-тетразол-5илуксусной кислоты (29)Выход: 110 мг (65%). Спектр ЯМР 1H (400 МГц, CDCl3), δ, м.д.: 4.54 с(2H, CH2CO2Et), 4.27 м (2H, CH2CH3), 1.78 с, (18H, С(СH3)3), 1.30 м, (6H,CH2CH3).Спектр ЯМР13С{1H} (CDCl3), δ, м.д.: 14.2 (CH2CH3), 29.2(C(CH3)3), 32.5 (CH2CH3), 62.1 (C5-CH2), 67.7 (C(CH3)3), 160.7 (C=O), 166.8(CN4).

195Pt {1H} ЯМР (86 МГц, CDCl3): δ = –2168.9 м.д. Найдено, %: C, 31.13;H, 4.71; N, 16.41. C18H32Cl2N8O4Pt. Вычислено, %: C, 31.31; H, 4.67; N, 16.23.транс-[PtCl2L2], L = этиловый эфир 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксуснойкислоты (37)Спектр ЯМР 1H (ДMСO-d6), δ, м.д.: 2.47 с (6H, CH3), 2.96 (с, 6H, CH3),5.36 с (4H, CH2), 5.57 с (4H, CH2), 4.15 т (4H, CH2), 5.5 с (4H, CH2). СпектрЯМР 13С{1H} (ДMСO-d6), δ, м.д.: 8.1 (CH3), 9.8(CH3), 47.6(CH2), 49.4(CH2),154.8 (CN4), 166.9 (C=O).2.7.3.

Синтез комплексов хлоридов платины(II) и палладия(II) самидами тетразолилуксусных кислот (32, 38-42)0.025 моль (214 мг) PdCl2∙2H2O растворяли в 30 мл 1М солянойкислоты при нагревании. После охлаждения до комнатной температуры кполученному раствору при перемешивании добавляли раствор 2 ммольтетразолсодержащего лиганда в 10–15 мл этилового спирта. Реакционнуюсмесь перемешивали 15 мин, при этом окраска раствора изменялась откоричневой до светло-желтой. Через 4-5 недель желтый кристаллическийосадок отфильтровывали, промывали водой и сушили. Очистку проводилиметодом колоночной хроматографии (хлороформ/метанол, 9.5:0.5).69транс-[PdCl2L2], L = амид 2-трет-бутил-тетразол-5-илуксусной кислоты(32)Выход: 0.33 г, (61%).

Желтые кристаллы. Спектр ЯМР 1Н (ДMСO-d6), ,м.д.: 1.78 c (18H, CH3), 3.95 c (4H, N1-CH2), 6.74 д, (, 1H, NH2, 2J = 7.8 Гц);Спектр ЯМР13С{1H} (ДMСO-d6), , м.д.: 29.32 (С(CH3)3), 33.40 (C5-CH2),64.23 (CH), 160.45 (CN4), 169.34 (C=O). Масс-спектр (HRESI+-MS), m/z:544.1271 [M+H]+. C14H28Cl2N10O2Pd. Вычислено 544,0809.транс-[PdCl2L2], L = амид 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксусной кислоты(38)Выход: 0.34 г (78%).

Желтые кристаллы. Спектр ЯМР 1H (ДMСO-d6), δ,м.д.: 2.45 с (6H, CH3), 5.11 с (N1-CH2), 7.47 (уш. c, NH2). Спектр ЯМР 13С{1H}(ДMСO-d6), δ, м.д.: 8.28 (CH3), 48.40 (N1-CH2), 153.23 (CN4), 166.36 (C=O).Масс-спектр: m/z: 440.0139 [M-Сl]+. C9H17Cl2N10O2Pd. Вычислено М472.9948.транс-[PdCl2L2], L = изобутиламид 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксуснойкислоты (39)Выход: 0.33 (81%).

Жёлтые кристаллы. Спектр ЯМР 1H (400 МГц,ДMСO-d6), δ, м.д.: 0.83 (6Н, CH2CH3), 1.06 д (6H, CH3, 3J 8.0 Гц), 1.41 м (2Н,СН2), 2.45 c (6H, CH3), 3.67 м (2H, CH), 5.10 c (4H, N1-CH2), 8.26 (уш.с, 2H,NH). Масс-спектр:, m/z: 571.1043 [M+H]+. C16H30Cl2N10O2Pd. Вычислено М570.0965.транс-[PdCl2L2],L=циклопропиламид5-метил-1Н-тетразол-1-илуксусной кислоты (40)Выход: 0.43 г, (80%). Жёлтые кристаллы. Спектр ЯМР 1H ЯМР (400МГц, ДMСO-d6), δ, м.д.: 0.46 м (4Н, СH2) 0.66 м (4Н, СH2), 2.45 с (6Н, CH3),2.64 м (2Н, СН), 5.07 с (4Н, N1-CH2), 8.52 уш.c (2Н, NH). Спектр ЯМР 13С{1H}(ДMСO-d6), δ, м.д.: 5.54 (CH2), 8.28 (С5-СH3), 22.36 (CH), 48.45 (N1-CH2),70153.20 (CN4), 165.50 (C=O).

Масс-спектр (HRESI+-MS), m/z: 541.0727 [M+H]+.C14H23Cl2N10O2Pd. Вычислено М 539.0417.транс-[PtCl2L2], L = амид 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксусной кислоты(41)Выход: 0.36 г, (66%). Жёлтые кристаллы. Спектр ЯМР 1H ЯМР (D2O), δ,м.д.: 3.01 с (6H, CH3), 5.19 с (N1-CH2), 7.44 c (NH2). Масс-спектр (HRESI+MS), m/z: 548.0370 [M+H]+. C8H15Cl2N10O2Pd.

Вычислено 548.0404.транс-[PtCl2L2], L = втор-бутиламид 5-метил-1Н-тетразол-1-илуксуснойкислоты (42)Выход: 0.41 г, (62%). Жёлтые кристаллы. Спектр ЯМР 1H ЯМР (400МГц, ДMСO-d6), δ, м.д.: 0.83 м (6Н, СH2CH3) 1.05 м (6H, СНCH3), 1.41 м (4Н,СH2CH3), 3.67 м (2Н, СН), 5.10 (N1-CH2), 8.26 c (NH2). Спектр ЯМР 13С{1H}(101 МГц, ДMСO-d6), δ, м.д.:8.29 (C5-CH3), 10.29 (СH2CH3), 19.98(CH(CH3)2), 28.73 (СH2CH3), 48.61 (CH), 153.19 (CN4), 163.66 (C=O). Массспектр (HRESI+-MS), m/z: 682.1463 [M+Na]+.

C16H30Cl2N10O2Pt. Вычислено М659.1578.712.8. Взаимодействие комплексов с ДНКВзаимодействие металлических комплексов с ДНК тимуса теленка(ДНК ТТ) («Сигма») изучалось с использованием спектроскопии УФпоглощения, кругового дихроизма (КД) и гель-электрофореза.Концентрацию ДНК определяли методом Спирина [183] по разностипоглощения при 270 нм и 290 нм ее гидролизованных растворов в 4 % HClO 4по формуле:С = (D270 – D290) · 50 · 10–4Нативность ДНК в используемых растворах контролировали покоэффициенту молярной экстинкции при 260 нм до и после измерений.Величину ε260 (P) вычисляли по формуле:ε260 (P) = 31.1 · D260 / C · l,где D260 – оптическая плотность раствора ДНК при 260 нм; С –концентрация раствора, выраженная в г/дл; l – длина пути (1 см). Вэксперименте использовали растворы, коэффициент молярной экстинкциикоторых при 260 нм соответствовал ее нативному состоянию: 6 200 < ε260 (P) <6900.

Маточный раствор ДНК ТТ хранился при 278 К и использовался втечение не более 4 дней.РабочиеспектроскопиирастворыбылидляисследованияполученыпутемметодамисмешиванияУФприиКД-комнатнойтемпературе растворов ДНК ТТ и растворов комплекса для получениярастворов с разными значениями r-1 (0.3, 0.7 и 1.0, 1.5).Спектральные эксперименты по поглощению ультрафиолетовогоизлучения с использованием ДНК CT проводили в 5 мМ NaCl (pH 7.0), либов буферном растворе 50 мМ трис-(гидроксиметил)аминометан-HCl (Tris-HCl)(pH7.2)/50мМNaCl,которыйполучалисиспользованием72деионизированнойидистиллированнойводы.Исходныерастворыкомплексов получали путем растворения комплексов в 5 мМ NaCl, либо вбуфере Трис-HCl до требуемых концентраций для всех экспериментовнепосредственно перед использованием.2.8.1.

Исследования методом УФ-спектроскопииЭкспериментыпоопределениюультрафиолетовогопоглощенияпроводились при постоянной концентрации комплекса металла (4.55 мкМ) иразличной концентрации ДНК ТТ (от 1.0 до 30 мкМ), а также при постояннойконцентрации ДНК ТТ (4.55 мкМ) и различной концентрации комплекса (от2 до 40 мкМ) в трис-буфере (50 мМ NaCl / 50 мМ Трис-(гидроксиметил)аминометан-HCl, pH 7.2) при комнатной температуре. Рабочие растворыполучали смешиванием растворов ДНК и комплекса с последующимвыдерживанием в течение 24 ч при 6 °С.