Диссертация (Производные замещенных бензаминоиндолов и пирролохинолонов – новый класс соединений с противомикробной активностью), страница 3

Впервыедоказана способность исследуемых соединений в минимальных подавляющихконцентрациях оказывать бактериостатическое действие и устойчивая тенденцияк задержке роста и размножения тест-штаммов микроорганизмов в присутствиипроизводных 4-, 6-, 7-аминоиндолов.Впервые выявлено отсутствие токсического воздействия соединений спотенциальнойпротивомикробнойактивностью,производных4-,6-,7-аминоиндолов на клетки прокариот и эукариотические клетки in vitro.ВпервыевыявленадозозависимаяSOS-индуцирующаяактивностьсинтетических производных 4-, 6-, 7-аминоиндолов in vitro. Выявленнаяспособностьопределяетодинизмеханизмовбиологическогодействияисследуемых соединений на прокариотическую клетку – воздействие на ДНК.Впервые подтверждена противомикробная активность замещенных амидовна основе 4-, 6-, 7-аминоиндолов в отношении грамположительных играмотрицательныхмикроорганизмовнамоделиэкспериментальнойхирургической раневой инфекции in vivo.

Местное лечение исследуемымисоединениями,приводилоксокращениючислажизнеспособныхмикроорганизмов в ранах значительно раньше, чем можно было бы ожидать приестественном заживлении необработанных ран, что приводило к элиминации13бактерий из инфицированной ткани. Исследуемые соединения эффективнопрепятствовали распространению микроорганизмов в подлежащие ткани игенерализации инфекционного процесса и ускоряли заживление зараженных ран.Впервые установлены закономерности зависимости противомикробнойактивности от структуры молекулы и характера заместителей в исследованныхиндолиламидах и пирролохинолонах. Противомикробная активность, полученныхи изученных производных индола и пирролохинолонов, из анализа результатовпроведенных исследований и литературных данных обусловлена боковой цепьюмолекул.

Выраженная антибактериальная активность характерна для соединений,имеющих трифторметильную группу в амидной части молекулы. Отсутствие вмолекуле фторсодержащего заместителя приводит к потере активности препаратапротив микроорганизмов. Так соединения 17, 6D не обладают в приемлемыхконцентрациях каким-либо заметным действием против исследуемых штаммовкакграмположительных,такиграмотрицательныхмикроорганизмов.Наблюдается также тесная зависимость противомикробной активности от тонкойструктуры препарата. Из литературных данных известно, что важными классамиантимикробных препаратов являются спирты и амиды, т. е. содержание НО- илиО=С-NH-функции.

Этим требованиям отвечают, полученные и исследованные,циклические амиды HD, 5D, 7D, в молекулах которых имеются как закрепленнаягидроксильная, так и амидная группы. Действительно, эти соединения посравнению с другими показывали наибольшую противомикробную активность.Нециклическиеузконаправлены,амиды,либополученныемалоактивнынавосновеотношении5-аминоиндолов,изученныхлибоштаммовмикроорганизмов. Активность нециклических амидов зависит от характеразамещения в бензольном и пиррольном кольцах индольной системы, а такжеположения амидной группировки. Наличие или отсутствие метильных групп виндольномфрагментеамидовневносятсущественногоизмененияпротивомикробной активности. Метоксильная группа в положении 6 индолил-5амида резко снижает противомикробную активность.14Научно-практическая ценность работыРезультаты настоящей работы значительно расширяют существующиепредставления о соединениях обладающих противомикробной активностью, как сточки зрения микробиологии прокариот, так и в аспекте фармакологиилекарственных средств.

Представлен экспериментальный фактический материал озакономерностях синтеза новых соединений, на основе замещенных 4-, 5-, 6-, 7аминоиндолов. Показана перспективность поиска соединений с высокойпротивомикробнойактивностьюсредипирролохинолонов.Висследованияопределениятипапроцессепротивомикробногозамещенныхиндолиламидовразработандействияновыхновыйиспособсоединенийсантимикробной активностью. На основе скрининга получена и исследована новаясерия синтетических производных 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов, обладающих тойили иной противомикробной активностью в отношении грамположительных играмотрицательныхмикроорганизмов.Полученныерезультатыявляютсяоснованием для дальнейшего исследования синтетических производных 4-, 5-, 6-,7-аминоиндолов с целью клинического применения изученных соединений вкачестве противомикробных препаратов.Связь диссертации с основными научными темами университетаНастоящая работа выполнялась в соответствии с Паспортом научныхнаправлений ФГБОУ ВО «МГУ им Н.

П. Огарева» (Решение НТС, протокол №1от 09.02.2018г.) и с научной тематикой «Исследование чувствительностимикроорганизмов к традиционным антимикробным средствам и поиск новыхсоединенийспротивомикробнойактивностью»кафедрыиммунологии,микробиологии и вирусологии Медицинского института ФГБОУ ВО «МГУ им Н.П.

Огарева».15Соответствие диссертации паспорту научной специальностиДиссертационное исследование соответствует паспорту специальности14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология, включая следующие областиисследования:- поиск новых биологически активных фармакологических веществ средиприродных и впервые синтезированных соединений, продуктов биотехнологии,генной инженерии и других современных технологий на экспериментальныхмоделях патологических состояний;- исследование зависимости «структура-активность» в различных классаххимическихвеществ,проведениенаправленногосинтезаискринингафармакологических веществ;- экспериментальное (доклиническое) изучение безопасности фармакологическихвеществ – токсикологические исследования, включающие изучение токсичностипотенциальных лекарственных препаратов и их готовых лекарственных форм вусловиях острых и хронических экспериментов на животных, а также оценкувозможных специфических видов токсичности и проявление нежелательныхпобочных эффектов (мутагенность, эмбриотоксичность, тератогенность, влияниена репродуктивную функцию, аллергизирующее действие, иммунотоксичность иканцерогенность).Основные положения, выносимые на защиту1.

Синтезированная серия индолиламидов и пирролохинолонов, полученная засчет реализации синтетических возможностей использования в качествеисходных соединений, замещенных 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов обладаетпротивомикробнойактивностьюиявляетсяновымнеблагоприятнымабиотическим фактором для прокариотических микроорганизмов.2. Проведен скрининг противомикробной активности замещенных амидов ипирролохинолонов на основе 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов и изучен спектр и тип16противомикробного действия отобранных потенциальных противомикробныхсоединений с низкой токсичностью в отношении грамположительных играмотрицательныхусловно-патогенныхинекоторыхпатогенныхмикроорганизмов in vitro.

В процессе проводимого исследования разработанновый способ определения типа противомикробного действия новых соединенийс противомикробной активностью.3.Определеноотсутствиетоксическихэффектовпотенциальныхпротивомикробных соединений, производных 4-, 6-, 7-аминоиндолов привоздействии на клетки прокариот и эукариотические клетки в условиях in vivo ивозможностьповреждениягенетическогоматериалаклетокпрокариотсинтетическими производными замещенных 4-, 5-, 6-, 7-аминоиндолов in vitro.4. Исследована эффективность потенциальных противомикробных соединений,производныххирургической4-,6-,раневой7-аминоиндоловинфекции,намоделивызваннойэкспериментальнойграмположительнымииграмотрицательными микроорганизмами в условиях in vivo.5.

Установлены закономерности зависимости противомикробной активности отструктуры молекулы и характера заместителей в исследуемых индолиламидах ипирролохинолонах.Внедрение результатов диссертацииРезультаты представленной работы внедрены в учебный и научноисследовательский процесс кафедры химии, технологии и методик обученияФГБОУ ВО «МГПИ им. М. Е. Евсевьева», кафедр иммунологии, микробиологии ивирусологии и фармакологии, клинической фармакологии ФГБОУ ВО «МГУ им.Н. П.

Огарева». Результаты исследовательской работы включены в программуобучения ординаторов и аспирантов Медицинского института ФГБОУ ВО «МГУим. Н. П. Огарева» и аспирантов ФГБОУ ВО «МГПИ им. М. Е. Евсевьева» вкачестве лекционного и дополнительного учебно-методического материала.17Результаты работы стали основой для выпуска ряда документов таких как,«Внебольничная пневмония: практические рекомендации по диагностике илечению: Методические рекомендации» (Н. М. Селезнева, И. С.

Степаненко, И. В.Акулина. – Саранск : Изд-во Мордов. ун-та, 2005. – 51 с.); «Культуральныесвойства клинически значимых микроорганизмов (пособие для врачей)» (И. С.Степаненко, Г. Н. Холодок, И. П. Кольцов. – Хабаровск, 2007. – 76 с. : ил.);Патент на изобретение «Противомикробное средство» №2556509 приоритет от11.02.2014 (дата публикации 10.07.2015); «Культуральные свойства клиническизначимых микроорганизмов: учебное пособие» (И. С.

Степаненко, Г. Н. Холодок,И. П. Кольцов. – 2-е изд., перераб. и доп. – Саранск : Изд-во Мордов. ун-та, 2014.– 76 с. : ил.); в ФГБУ «Федеральный институт промышленной собственности»подана заявка на изобретение («Способ определения типа противомикробногодействиясоединений,обладающихантимикробнойактивностью»,регистрационный номер: 2018128308) по которой по результатам проведенияэкспертизы по существу принято положительное решение; Патент на изобретение«СпособполученияобладающихN-(индолил)трифторацетамидов,противомикробным действием», № 2675806 приоритет от 20.07.2018 (датапубликации 25.12.2018).Степень достоверности и апробация диссертацииДостоверностьполученныхвработерезультатовподтверждаетсяиспользованием для синтеза исследуемых соединений коммерчески доступныхреагентов известных фирм (Sigma-Aldrich, Acros Organic и др.), спектроскопииядерного магнитного резонанса (ЯМР1Н), ультрафиолетовой спектроскопии(УФ), инфракрасной спектроскопии (ИК), масс-спектрометрии, тонкослойнойхроматографии (ТСХ), элементного анализа для доказательства строения, составаи индивидуальности соединений, полученных при выполнении химическогоэксперимента, достаточным объемом микробиологического материала, наличиемдокументации к используемым тест-культурам микроорганизмов, использованием18дляокончательнойидентификациииисследованиячувствительностикантибиотикам исследуемых опытных штаммов автоматической бактериальнойсистемы «Sensititrе» (UK), достаточным объемом исследований с использованиемсертифицированных животных, корректно проведенной обработкой данных сприменением современных методов статистического анализа, соблюдениемэтическихтребованийипроведениемисследованийвсоответствиисмеждународными стандартами.Апробация диссертации проведена на расширенном заседании кафедрфармакологии и клинической фармакологии с курсом фармацевтическойтехнологии и иммунологии, микробиологии и вирусологии Медицинскогоинститута ФГБОУ ВО «МГУ им.