Методы общей бактериологии (том 3) (947294), страница 4
Текст из файла (страница 4)
20.1. Для рассмотрения краев может потребоваться микроскоп с малым увеличением. Следует описать также поверхность колоний, которая бывает гладкой (блестящей, сверкающей), шероховатой (тусклой, неровной, гранулированной, матовой), мукоидной (слизистой нли клейкой на вид). Отмечают степень прозрачности колоний (прозрачные, полупрозрачные или непрозрачные) и их консистенцию при проверке иглой: маслянистую (маслоподобную), вязкую (клейкую) нли сухую (хрупкую или порошкообразную). Описывают колонии как молодых, так и старых культур.
На характеристики колонии могут влиять среда, возраст культуры, газовый состав среды, степень освещенности н другие условия культивирования. 20.1.18. Цнсты и микроцисты Культуры ежедневно просматривают с помощью фазово-контрастной микроскопии. С возрастом палочковидные клетки приобретают сферическую форму, а стенки клеток утолщаются, Сферические формы могут быть оптически плотными или светопреломляющими. Они не !9 ЧАСТЬ и. СИСТЕМАТИКА РОРМА ° ФФФФФ ° ° Круглая Волокниапая Неграбильная Ризоидная То не зноя Вор егп ено- одразная ПРОгРИЛЬ Подушеико- Пулодидный образный Вылукгыи Плоскии Высокии КРАИ Рис.
20И. Различные формы, профили и края колоний бактерий. (Приводится в измененном виде из работы [74) с разрежения Мсбтаяг-НП Воой Со.) обладают устойчивостью эндоспор к нагреванию (равд. 20.1.52), за исключением некоторых видов Хосагг)(а, но чрезвычайно устойчивы к высушиванию. У АеогоЬасгег эти образования называют цветами, у МухоЬас1епа1ез — микроцистами, термин же «диета» у последних относится к спорангию, содержащему микроцисты, если он имеется. У гтгосагг1(а сферические образования называют микроцистами или хламидоспорами.
Методы окраски цист описаны в равд. 3.3.8. 20.1.19. Жгутики Окрашивание жгутиков проводят для исследования с помощью светового (равд. 3.3.10) или электронного микроскопа (равд, 4,1.1 и 4.1.4). Во время окраски сле- 20 Гладкий Волнисгпьш Лопосгпной Зуднагпьш" Волокнисгпьы Складнагпьк Еь ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА дует как можно меньше встряхивать бактерии, так как жгутики легко отрываются от клеток. При окрашивании жгутиков для световой микроскопии не исключены ошибочные результаты, так как у бактерий с полярно расположенными жгутиками пучок из нескольких жгутиков может иногда выглядеть как один жгутик (971 Имеют значение и условия культивирования, например некоторые бактерии, такие, как НЬг1о рагайаето!уПсиз, прв росте на жидкой среде образуют один полярный жгутик, а при росте на твердой среде имеют еще и боковые, более короткие жгутики 1821.
Некоторые бактерии. например 1.Ь1ег(а топосу1одепез, не способны образовывать жгутики при высокой температуре, тогда как при пониженной они их имеют (501. В некоторых случаях среды, содержащие глюкозу, могут подавлять образование жгутиков [151. 20.1.20. Флуоресцнрующнй пигмент Делают один штрих на чашке со средой В (равд. 20.3.5). Снимают крышки и проверяют чашки через 24, 48 и 72 ч под ультрафиолетовым светом. ((260 нм). Можно пользоваться коротковолновой лампой, применяемой для изучения образцов минералов.
Чашки не следует продолжать иикубировать после просмотров, поскольку ультрафиолетовый свет оказывает бактерицидное действие. Положительная реакция: флуоресцирующая зона на агаре вокруг участков роста. Флуоресцирующие псевдомонады образуют желто-зеленый пигмент; некоторые виды Аео(ОЬас1ег, Аютопаз и Ле1(ег(псЫа могут образовывать зеленый или белый флуоресцирующий пигменты. Примеры: положительный результат — Рзеиг(отопаз '1(иогезсепз; отрицательный — Езсйег(СИа соГи 20.1.21.
Потребность в формнате н фумарате Этот тест применяют для выявления некоторых анаэробов, которые окисляют формиат и попутно восстанавливают фумарат в сукцинат. Готовят основной формиатно-фумаратный раствор (Ф-Ф) (равд. 20.4.6) и добавляют 1 каплю раствора на 1 мл предварительно 21 ЧАСТЬ Ч. СИСТЕМАТИКА восстановленного пептонно-дрожжевого бульона Р т' (равд, 20.3.28) в момент его инокуляцин в атмосфере очищенной от кислорода двуокиси углерода.
Сравнивают рост на этой среде с ростом на среде без Ф-Ф. Положительная реакция: рост сильно стимулируется Ф-Ф. В некоторых случаях в отсутствие добавок вообще не наблюдается роста. Примеры: положительный результат — Вас1егоЫез согго1епз; отрицательный — Вас1егой(ез огаЕз. 20.1.22. (1-Галактозидаза (56) Бактерии культивируют в течение 18 ч при 37'С на скошенном агаре, содержащем три углевода и железо (разд. 20.3.34).
Снимают выросшую культуру петлей с косяка и суспенднруют в 0,25 мл физиологического раствора (0,85'/а-ный 5)аС1) до получения густой суспензии. Добавляют каплю толуола, встряхивают суспензию и инкубируют в течение 5 мин при 37'С. Добавляют 0,25 мл диагностического реактива ОНФГ (равд. 20,4.13) . Инкубируют в водяной бане при 37'С и проверяют с интервалами до 24 ч. Следует также приготовить н инкубировать контрольную пробу без клеточной суспензии. Положительная реакция: появление желтой окраски. Примеры: положительный результат — Езсйег1сй1а со)й отрицательный — Рго1еиз пи1йапз.
20.!.23. Образование газов из сахаров Метод 1. Перед автоклавированием бульона с угле. водами в пробирку помещают вверх дном стеклянный поплавок ( 10Х75 мм). После автоклавирования он полностью заполняется средой. В случае термолабильных сахаров после автоклавирования н остывания к основной среде с соблюдением правил асептики добавляют их концентрированные растворы, стерилизованные фильтрованием, Пробирки оставляют приблизителыю на день для диффузии сахаров в перевернутые поплавки.
Среду инокулнруют и инкубируют. Положительный результат: накопление газа в поплавке. 77рил~ечание; если среду перед использованием хранят в холодильнн- РХ ОВЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ке, а затем инокулируют и инкубируют, растворенные. газы в среде могут высвобождаться и накапливаться в поплавках, приводя к ложноположительной реакции. В качестве контроля используют стерильные пробы.
Если клетки образуют очень небольшое количество двуокиси углерода, ее трудно обнаружить из-за высокой растворимости и быстрой диффузии в воздух. Такая проблема не возникает при применении методов 2 и 3. Метод 2. Этот метод совпадает с мегодом 1 с той лишь разницей, что после инокуляции для предотврашения диффузии двуокиси углерода в воздух в пробирки добавляют — 1 мл стерильного минерального (вазепинового) масла. Используют содержащую сахар агаровую среду, охлажденную после автоклавирования до 45'С (в случае термолабильных сахаров к основной агаровой среде, расплавленной и охлажденной до 45'С, добавляют концентрированный раствор сахара, стерилизованный фильтрованием).
Пробирки инокулируют и позволяют агару затвердеть. Покрывают застывший слой приблизительно 6-мм слоем 2%-ного агара, не содержащего питательных веществ (т. е. агара, приготовленного на воде), а затем тонким слоем стерильного масла. Культуры инкубируют. Положительный результат: разрывы в среде и поднятие слоя агара. Метод 3 [7]. Этот метод применяют только для анаэробов. Охлаждают расплавленный предварительно восстановленный пептонно-дрожжевой агар Р'2' (разд.
20.3.27), содержащий 121, глюкозы, до 45'С и инокулируют столбик его 2 — 3 каплями культуры. Пробирни закрывают стерильной алюминиевой фольгой (не пробками), оставляют до затвердения среды и инкубируют, Положительный результат: образование пузырьков газа в среде или разрывов в агаре. 20.1.24.
Гидролиз желатины Метод 1. Используют бульон, содержащий 12% желатины. (А) Пробы инкубируют при 20 — 22'С 6 нед. Положительная реакция: разжижение по крайней мере части среды. При длительной инкубации следует предот- ЧАСТЬ Ч. СИСТЕМАТИКА вратить испарение среды. Примеры: положительный результат — Рго1еиа пи1даги; отрицательный — Езспег1сй»а со11. (Б) Если температура 22'С слишком низка для роста, культуру инкубируют при оптимальной температуре роста, а затем охлаждают в холодильнике вместе с неинокулированной контрольной пробой.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
