Методы общей бактериологии (том 3) (947294), страница 3
Текст из файла (страница 3)
М(сгоЬ1о1оду Буз(егпз, Соскеуяч(11е, Мг(.), или стерильные бумажные диски, пропитанные 0,04 ед. бацитрацина (Б(пща СЬеппса1 Со., 81. (.оп(з, Мо.). Диск помещают на поверхность инокулированного кровяного агара (разд. 20.3.7) и инкубируют в течение 24 ч. Положительная реакция: образование вокруг дисков зоны ингибированного роста. Примеры: положительный результат — Бггер1ососсия руойепея; отрицательный — другие (1-гемолитические стрептококки. 20 овщля хАРАктегистикА 20.1.9. Растворение клеток в желчи Дентрифугируют 24-ч культуру, выращенную в 10 мл бульона Тодда — Хевитта (равд. 20.3.33), и иадосадочную жидкость переносят в колбу с дезинфицирующим веществом.
Клетки суспендируют в 0,5 мл 0,067 М фосфатного буфера, рН 7,0 (разд. 20.4.16). Добавляют 0,5 мл 10%-ного дезоксихолата натрия н инкубируют при 37'С в течение 15 — 30 мин. Положительная реакция: суспензия становится прозрачной. Примеры: положительный результат — Б!гер1ососсиз рпеитоп1ае; отрицательный — другие а-гемолнтическне стрептококки. 20.1.10. Устойчивость к желчи Метод 1. Посев проводят штрихом на желчный агар (равд. 20.3.6) в чашках.
Сравнивают рост на среде с желчью с ростом на среде без желчи. Примеры: положительный результат (10 и 40% желчи) — 51гер1ососсиз (аеса((з; положительный результат (1О, но не 40% желчи) — Ягер1ососсиз за((оаг1из; отрицательный результат (ни 10, ни 40% желчи) — 31гер1ососсиз г(узда!асбае. Метод 2. Этот метод используют для анаэробов [7). Инокулируют пептонно-дрожжевой бульон (равд.
20.3.28), содержащий 2% бычьей желчи и 1% глюкозы, с помощью пастеровской пипетки, пропуская через бульон очищенную от кислорода двуокись углерода. Закрывают пробирки пробками и инкубируют. Наблюдают за ростом н сравнивают его с ростом на среде, не содержащей бычьей желчи. Примеры: рост — Вас(егоЫез огайз; отсутствие роста — Вас1егои1ез те1ап(пойеп(сиз.
20.1.11. Гидролиз казеина Стерильное (автоклавированное) снятое молоко смешивают прн 50'С с равным объемом питательного агара двойной концентрации (разд. 20.3.25) нли другой не содержащей углеводов агаровой среды при 50 — 55'С. Чашки с инокулированной штрихом средой инкубируют до 14 дней и проверяют, не образуются ли просветления вокруг зон роста. Результат проверяют с помощью за- рз ЧАСТЬ Н, СИСТЕМАТИКА ливки среды 10"тч-ной НС1. Примечание: образование кислоты из лактозы может подавлять гидролиз казеина, поэтому необходимо предварительно диализовать снятое молоко.
Примеры: положительный результат — ВасИиз ро1утуха; отрицательный — Вас(1(из тасегат. 20.1.12. Тест на каталазу Метод 1. Посев производят в цробирках на скошенный питательный агар (равд. 20.3.25) или другую среду, не содержащую крови. После инкубации вливают по капле вниз по косяку 1 мл 3» -ной перекиси водорода. Сразу же и через 5 мин наблюдают за образованием пузырьков, которое означает положительную реакцию.
Параллельно добавляют несколько капель 3» -ной перекиси водорода к колониям на чашке или к зонам обильного роста, который может наблюдаться на поверхности полужидкой среды или около нее. В случае бульонной культуры к 0,5 мл культуры добавляют 0,5 мл Зс -ной перекиси водорода и наблюдают за постоянным образованием пузырьков. Примечание: не следует применять для теста на каталазу среду, содержащую кровь, так как кровь, если ее предварительно не прогреть, имеет каталазную активность (метод 3). Некоторые бактерии (например, молочнокислые) в средах с низкими концентрациями глюкозы или вообще без глюкозы образуют негемовую «псевдокаталазу» 1941. Образование псевдокаталазы можно предотвратить введением в среду глюкозы (1ТА). При проверке анаэробов на каталазную активность важно перед добавлением перекиси водорода выдержать культуру на воздухе в течение 30 мин.
Примеры: положительный результат — Иарпу!ососсиз ерЫегтм((з; отрицательный — 51гер1ососсиз 1ас(Гз. Метод 2. Этот метод устраняет проблему впитывания, которая может возникать при добавлении перекиси водорода в колонии, растущие в чашках или на косяках. Выросшую культуру снимают с поверхности агара неметаллическим инструментом и суспендируют в капле Зо -ной перекиси водорода на предметном стекле. Немедленно и через 5 мин наблюдают за образованием пузырьков визуально или в микроскоп с малым увеличением.
!6 зк овщля хАРлктегистикл Метод 3. Метод применяется для определенных бактерий, способных образовывать каталазу только при росте на среде, содержащей гем, например для некоторых молочнокислых бактерий 194!. К стерильной основе кровяного агара (разд. 20.3.31), содержащей 17о глюкозы для ингибирования образования псевдокаталазы, добавляют 5ъ(~ (по объему) смеси дефибринированной крови (равд. 20.3.7) и стерильной воды (1:1). Среду нагревают прн 100'С в течение 15 мии для инактивации каталазы крови, охлаждают до 45 — 50'С и разливают по чашкам.
Рост проверяют непосредственно в чашках с помощью 3%-ной перекиси водорода или по методу 2. 20.1.13. Целлюлолитическая активность Метод!(45). Используемая в этом методе обработка целлюлозы обеспечивает наилучшее определение целлюлолитической активности; другие обработки описаны в работах(12,13). Хорошо измельченную целлюлозувносят в соответствующую агаровую среду, не содержащую углеводов. Чтобы приготовить таную целлюлозу, производят мокрый размол (Зъ(,; вес/объем) фильтровальной бумаги Ъуйа1тап №! в барабанной мельнице, Помещают 30 г бумаги (разорванной на мелкие кусочки) в фарфоровый барабан (емкостью около 4 л), содержащий 1 л воды, вносят нужное количество кремневой гальки (фарфоровые шарики менее эффективны) так, чтобы вода лишь покрывала осадок; барабан вращается в течение суток со скоростью 74 об/мин до получения очень мелкодисперсной и вязкой суспензии. Вращение следует прекратить до того, как начнет снижаться вязкость и образуются вещества, восстанавливающие медь.
!Тест иа их наличие проводят с 1 мл суспензии, как описано в равд. 20.1.30, используя 1 мл реактива Бенедикта (равд. 20.4.1).] Положительная реакция: появление зон просветления вокруг колоний на целлюлозном агаре. Может потребоваться инкубация в течение длительного периода. Примеры: положительный результат — виды Се!!и!отопаз; отрицательный — Езс/тегкЫа со! й Метод 2.
Этот метод менее чувствителен, чем метод !. Перед автоклавированием полоску фильтроваль- ЧАСТЬ Ч. СИСТЕМАТИКА ной бумаги %йа1шап 1че 1 помешают в пробирку с бульоном, не содержащим углеводов. Часть полоски должна выступать выше уровня бульона. Положительная реакция: частичное или полное разрушение полоски бумаги в процессе роста культуры. 20.1.14. Потребление цитрата Метод 1.
Готовят разбавленную суспензию микроорганизмов в стерильной воде или физиологическом растворе. Посевной материал наносят штрихом на косяк цитратпого агара Симмонса 1разд, 20.3.30). Инкубируют 7 дней. Положительная реакция: появление голубойокраски, означающей использование цитрата в качестве единственного источника углерода.
Примеры: положительный результат — ЕатегоЬасгег аегойепез; отрицательный — Езс)гепсп1а со10 Метод 2. Разбавленную суспеазию клеток наносят штрихом на всю поверхность косяка цитратного агара Кристенсена (разд. 20.3.11). Инкубируют 7 дней. Положительная реакция: появление красной окраски или окраски цвета фуксина. Примечание: положительная реакция означает использование цитрата, но не обязательно в качестве единственного источника углерода, т. е.
организм может давать положительную реакцию на агаре Кристенсена и отрицательную — на цитратном агаре Симмонса. 20.1.15. Коагулаза Одну полную петлю бактериальной массы, снятой со скошенного агара, 0,1 мл бульонной культуры или одну колонию, снятую с агара в чашке, смешивают с 0,5 мл неразведенной плазмы крови кролика или плазмы, разведенной физиологическим раствором в соотношении 1: 4. Инкубируют при 37'С и наблюдают через 4 и 24 ч. Положительная реакция: образование плотного или рыхлого сгустка, суспендированного в плазме.
Гранулированные или вязкие образования нельзя считать положительным результатом. Примеры; положительный результат — Яарйу1ососсиз ацгеиз; отрицательный — Яарйу1ососсиз ерЫегт7- Жз. 1З 20. ОЕШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА 20.1.16. Кокковидные тела Культуры, поддерживаемые в статическом состоянии (не встряхивавшиеся во время роста) в течение 4 нед, изучают методом фазово-контрастной микроскопии. Кокковндные тела могут обнаруживаться уже на 2-й или 3-й день.
Положительная реакция: преобладание круглых преломляющнх свет форм с диаметром, превышающим диаметр исходных клеток, и не имеющих утолщенной стенки. Многие формы имеют дискретные темные периферийные участки цитоплазмы, в других случаях клетки выглядят пустыми. Кокковидные тела встречаются у некоторых спирилл, вибрионов и кампилобактеров. Примеры: положительный результат — Адиазргг(1- 1игп гуегзопа'; отрицательный — АдиазрГгШит зегршгж 20.1.17. Колонии Измеряют диаметр колоний в миллиметрах, описывают их пигментацию, форму, высоту и вид края, как показано на рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
