Методы общей бактериологии (том 2) (947293), страница 67
Текст из файла (страница 67)
!7Л. Минимальные количества азота Веществе, ме. шающие опре- делению Аналитический метод Соединение азота Источник данных Основные достоинства Основные недостатии Длительность ана- лиза [6$, 73, 79, 9В! Суммарный азот а См. сведении об анализе этого типа соединений азат». б Сюда включеаы новые методы н (илиг некоторые из методов, «е при.
меавмыс к большинствг проб бсэ мадксйнкацнй. Расщепление по Кьельдалю, восстановле- ние НОз н ХОт- до ХНз+ и ана- лиз на ННзл, отдельное оп- ределение азотсодержащих соединений н суммирование результатов' Определение суммарного азота; можно использовать реаити. вы, приготовленные для других опре- делений гх химическии сОстАВ колориметрическом анализе, присутствие в образце окрашенного соединения или вещества в виде частиц может мешать определению, особенно при использовании кювет толщиной 1О см. Ошибку за счет присутствия окрашенных веществ можно уменьшить путем предварительного разбавления раствора, если концентрация ИОздостаточно высока.
Другим выходом является обработка раствора активированным углем, с помощью которой часто удается удалить мешающие определению соединения. Частицы (например, бактериальные клетки) можно удалить центрифугированием или фильтрованием через мелкопористый 0,4б-мкм фильтр. Обработка ггроб Пробы следует анализировать немедленно или хранить замороженными при — 20'С до проведения анализа. Пробы для теста на ХОз нельзя хранить вместе с кислотой. Перед анализом рекомендуется нейтрализовать все пробы до рН 7,0. Реактиве! Вода, не содержащая ИО,—. В большинстве случаев дистиллированная вода не содержит ИОз-.
Прн отсутствии источника такой воды ее можно приготовить самим: на 1 л воды добавляют 1 мл концентрированной НзЯОг (осторожно; НзЯО, — едкое соединение; нельзя допускать ее расплескивания, нельзя насасывать ее в пипетку ртом) и 0,2 мл МпЯО, (36,4 г МпЯОг Н,О иа 100 мл дистиллированной воды). Раствор окрашивают в розовый цвет, добавляя 1 — 3 мл КМп04 (400 мг КМп04) на 1 л. Сульфаниламидный реактив: 5 г сульфаииламнда добавляют к 300 мл дистиллированной воды, содержащей 50 мл концентрированной НС!. (Осторожно! Концентрированная НС) — едкое вещество. Ее необходимо добавлять в воду медленно. Следует избегать вдыхания ее пзров.) Объем доводят до 500 мл дистиллированной водой.
Раствор хранят при комнатной температуре несколько месяцев. Раствор И-(1-нафтил)-этилеидиаминдигидрохлорида: 500 мг И-(1-нафтил)-зтнленднамнндигидрохлорнда растворяют в 500 мл воды. Раствор хранят в темном месте. Примерно через месяц появляется коричневая окраска, свидетельствующая о том, что реактив ис. порчен. Стандартные растворы ИО, — (631. Готовят основной раствор ИОт-, растворяя О,!4!! г ИаИОт в 500 мл дистиллированной воды, Используют свежецриготовлеииый раствор, так как ИО, — легко окисляется в присутствии воды. Бутыль с основным раствором хранвт закупоренной.
В 1 мл раствора содержится 50 мкг азота в форме ИО, †. Разбавляя основной раствор, готовят стандарты для получения калибровочной кривой. 349 ЧАСТЫЧ. МЕТАБОЛИЗМ Методика 1 мл раствора сульфаниламида добавляют к 50 мл пробы и оставляют не менее чем на 2 мин, но не более чем на 8 мин. Нежелательные побочные реакции и распад веществ начинаются после 10 мин 1731. Добавляют 1 мл Н-(1-нафтил)-этилендиамина и немедленно перемешивают. Ждут развития окраски по меньшей мере в течение 10 мин и затем определяют оптическую плотность при 543 нм (разд.
16.1.1). Из основного раствора ХОЗ с концентрацией 50 мкг/л готовят серию стандартных растворов с концентрациями от 0 до 25 мкг/л нитритного азота. Строят график зависимости между концентрацией (ХОЗ "1 и оптической плотностью при 543 нм (равд. 16,1.1). Концентрацию нитритного азота в образце определяют по калибровочной кривой или по коэффициенту экстинкцин (е) (наклон кривой) с помощью линейной регрессии. Этот коэффициент экстинкции применяют в последующих определениях с теми же реактивами.
При использовании новых реактивов получают новую калибровочную кривую. 17.6.2. Нитрат (см. также равд. 16.2.2) Выбор описываемой здесь методики определения КОЗ обусловлен ее относительной простотой, а также тем, что в ней используются реактивы, приготовленные для определения КОЗ-. Этот метод основан на восстановлении ХОЗ в КОЗ- и последующем анализе НОз —. Обычно используют один из двух способов восстановления ХО,— в НО,—, которые описаны здесь: цинком [81, 92) или кадмием (68, 861. Восстановление 1чОЗ в КОЗ- с помощью Еп — это несложная процедура, включающая реакцию пробы с цинковой пылью в течение 30 мин и фильтрование. Недостаток данной методики — длительность анализа каждой пробы.
Восстановление ХОд- с помощью Сд, амальгамированного Сп, осуществляют, пропуская пробу, обработанную 5)Н4С! (для предотвращения инактивации колонки), через заранее приготовленную колонку с Сб и Сп'+. 1А ХИМИЧВСКзГН СОСТАВ Проведение самого анализа отличается простотой, однако необходима предварительная подготовка колонки с восстановлением. После восстановления ХОз в ХОз — по любой из приведенных методик последний анализируют описанным выше методом.
Поскольку этот метод предназначен для определения суммарного количества )ь)Оа-, часть пробы следует анализировать на ХОз — до восстановления. Содержание ХОз определяют, вычитая полученный результат из суммарного количества ХОз . Обработка проб Пробы обрабатывают, как описано выше в методике определения интрига. Восстановление цинком Реактивы. Все реактивы рекомендуется готовить на дистиллированной воде, не содержащей ХОз- (раза. 17.6.1). Буферный раствор: 50 мл 0,2 М КС1 смешивают с 34 мл 0,2 и. НС1 и объем аовоцят водой до 400 мл. рН доводят ло 1,5 с помощью НС1.
ХН,С1: 2$-ный раствор (вес/объем), Порошок цинка. Методика. Пробы по 25 мл вносят в 50-мл колбы, закрывающиеся пробками, добавляют к ним 1,0 мл 2/о-ного ХН4С! и 2 мл буфера и нагревают до 20— 25 С. Добавляют по 0,2 г цинкового порошка и оставляют на 30 мин, изредка помешивая. Частицы цинка удаляют фильтрованием через крупиопористую фильтровальную бумагу, Восстановление кадмием Реагенты, Раствор сульфата меди: 2зл -ный (вес!объем) раствор. Концентрированный раствор 1ЧН,С1: 175 г ХН„С! растворяют в 500 мл дистиллированной воды.
Разбавленный раствор ХН4С1: ! часть концентрированного раствора ХН,С1 разбавляют 40 частями воды, ие содержащей ХОз-, лля получения концентрации 4,33 г в 500 мл воды. 351 ЧАСТЬ 1У МЕТАБОЛИЗМ Приготовление колонки. Верхняя часть колонки размером 1ХЗО см специально приспособлена для одновременного внесения всей пробы. Нижняя часть колонки должна быть снабжена краном типа бюреточного или же соединена с помощью резиновой трубки с пружинным зажимом, позволяющим останавливать поток, что необходимо для предотвращения высыхания сорбента в колонке. На дне колонки должна быть стекловата или тампон из тонкой медной проволоки. Небольшое количество стекловаты или медных опилок часто помещают в верхнюю часть колонки для предотвращепня нарушения слоя кадмиево-медных амальгамированных опилок при внесении пробы. Кадмиевые опилки получают, обрабатывая бруски чистого кадмия !ч.д.
а.; геапеп1 птабе) грубым ручным металлическим напильником, Отбирают фракцию, проходящую через 2-мм сито, но задерживающуюся на 0,5-мм сите. Приблизительно 50 г опилок перемешивают с 250 мл 2%-ного Сп504 5Н,О до тех пор, пока не исчезнет голубая окраска раствора и над осадком не начнут появляться полуколлоидные частицы меди. Суспензии дают отстояться в течение 10 мин.
Колонку заполняют разбавленным раствором 5!Н4С! или надосадочиой фракцией, полученной в результате амальгамирования Сб — Сп; затем медленно вливают в нее суспензию опилок Сб — Сп до образования столбика высотой около 30 см. Колонку трижды промывают 100 мл разбавленного раствора ХН4С!. Скорость потока устанавливаюг около 10 мл/мин, Методика. К 100 мл пробы добавляют 2 мл концентрированного раствора НП4С!.
5 мл этого раствора наносят на колонку и позволяют жидкости подняться до верхней части колонки. Это делается для того, чтобы при введении в колонку оставшейся части пробы не возникало ошибок за счет остатков предыдущей. Вводят оставшуюся часть пробы в колонку, Первые 25 — 30 мл элюата отбрасывают, а последующие 50 мл собирают для анализа. Остальную часть элюата отбрасывают. Колонку можно использовать повторно до 100 раз; при этом промывания ее между анализами обычно не требуется.
Однако, если колонку не исполь- ы химичвскип сОстАВ зуют в течение нескольких часов, ее следует промыть разбавленным раствором хлорида аммония. 50 мл отобранного для анализа элюата тестируют на ХОз — (разд. 17.6.1) как можно быстрее после восстановления. 17.6.3. Определение аммония в реакции с образованием индофеиолового синего [100) Для определения концентрации ХН4э разработано много методов (табл. 17,1). Один из нанболег простых методов основан на реакции аммиака, гнпохлорита и фенола с образованием индофенолового синего, Реакцию катализируют ионы Мп'+. Окраску измеряют с помощью колориметра илн спектрофотометра при 630 нм [64, 68, 99[. Неудобство этого способа закл|очается в необходимости применения фенола и неустойчивости реактивов. Другим простым способом (по методу Несслера) ХН4+ определяют в реакции со ртутью и иодидом калия в щелочном растворе, где он образует окрашенное соединение, которое анализируют с помощью спектрофотометра или колориметра [64, 68).
Основной недостаток этого способа — необходимость применения ртутных соединений. Оба метода описаны ниже. Еще одна почти столь же простая методика позволяет использовать реактивы, приготовленные для определения МОэ, она заключается в окислении МН4г до ХОх- [73) и последующем определении ХОь Однако для окисления КНь которое занимает 3,5 ч, необходимы дополнительные реактивы, поэтому мы рекомендуем применять индофеноловый метод нли метод Несслера. При необходимости очень специфического способа определения ХН4+ наиболее удобным может быть пириднн-пнразоловый метод [73, 88). См. также равд. 16.2.2.
Обработка проб Пробы обрабатывают, как описано в разд. 17.6.1. При большом содержании мешающих определению веществ (табл. 17.1) иногда некоторые реактивы приходится перед проведением анализа перегонять [681. члсть !у мвтлволизм Реактивы Вода, не содержащая аммония, На каждый 1 л дистиллированной воды добавляют по 0,1 мл концентрированной НзВО„(осторожно: НзБ΄— едкое соединение; нельзя насасывать ее в пипетку ртом и допускать ее разбрызгивания) и проводят перегонку. Для каждой серии проб готовят свежую воду, так как она быстро загрязняется парами ХНгг из окружающего воздуха.
Можно также использовать нонообменную колонку. Выбирают ионообменную смолу, максимально связывающую )4Н,+ и другие мешающие определению органические вещества. 0,003 М Мп80в 50 мг Мп80г НзО растворяют в 100 мл дистиллированной воды, очищенной от ННгг.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
