Методы общей бактериологии (том 2) (947293), страница 24
Текст из файла (страница 24)
)4.4 Количество основного раствора, добавляемого иа ! л минимальной среды, мл Конечная нонцеитра- ция в мини. Концентрация основного раствора, мг/мл Соединения мальных средах, мкг/мл Витамины Ъиотин Никотиновая кислота Пантотенат кальция 0,25 2,0 0,5 0,5 2,0 0,5 2,0 Пнридокснн НС! Тиамин.НС! 0,5 0,5 2,0 2,0 дящаяся в упаковке, как правило, стерильна), стерильные емкости (бутыли или пробирки) и стерильную воду или спирт для приготовления суспснзий.
Заметим, что ампициллин, рифампин и тетрациклин относительно нестойки; в связи с этим среды, содержащие этн антибиотики, должны быть израсходованы в течение нескольких дней. Срок хранения сред с тетрациклином и рифампи- )23 а Все основные ноицентрнровгииые растворы готовят на дистиллированной нли деионизованно/< воде и хранят при 4 'С, если нет других указаний.
Стерилнзовап можно либо автохлавировзиием (Гб мии для обьемов, не превышающих !ОО мл), либо фильтрованием. б Приведенные концентрации обеспечивают оптимальный рост ауксотрофов Л. со/б Для мутаитиых штаммов других видов бактерий могут понадобиться несколько отличные концентрации. з Ынзомеры реномендуются в том случае, если их цена не более чем вдвое превышает цену Омрацемата, г Бащерин, обладающие аланинрацемазой, способны утилизировать ная Рэ теи и !.-изомеры. д Раствор Ьщвстениа НС! должен быть свежеприготовлеииым (ие более недельной давности), так как цистеин быстро окнсляется до цистнна, который очень плохо растворяется. Другой способ предохранения основного раствора Ь-цнстеина НС! от окисления — после автоклавнрования наслоить на него стерильное вазелииовое масло. е Готовят в 0,00! и.
НаОН и хранят при комнатной температуре. ж Готовят в О,О! н. НаОН и храпят при комнатной температуре. э Готовят в 0,03 н. НС!. !ОуЛ-Мутантам эитеробактернй требуются относительно большие концентрации тимина или тимпдина. Штаммы !ОрА с мутациями ИеоВ влн бгос (при которых блокируются фуииция дезоксирнбомутазы и дезокснрибоальдолаэы соответственно) не способны утилизировать дезокснрибозо-!-фосфат и поэтому растут прн поинясеииых концентрациях либо тнмвва, либо твмидина. ЧАСТЬ !!! ГЕНЕТИКА Таблаца 14.5. Коацентрвцкк автабаотвков длв основных растворов к добавок к средам Конечная концентрация в среде (мкг/мл/ для выявленн» Концентрация основного раствора, мг/ил Антибиотик устойчивости, обусловленной хромосомной мутацией устойчиво- сти, обуслов- ленной П-плезми- дамн 25 — 50 25 — 50 1Π— 20 50а 50 100 †4 дмппцпллкп Хлорвмфекпкол Налкдкксовня кислота Рвфамппп Стрептомпцкп Тетрнцкклап 25б 1О 20 50г ж 25 — 50 25 — 50 ном продлевается, если они содержатся в темноте.
Про- дукты же распада тетрадиклина токсичны как для Тс', так и для Тс'-бактерий. 14.4.9. Приготовление агаровых сред Агар для приготовления и определения титра фаголизатов нужно разливать в чашки, находяшиеся на выставленной по уровню горизонтальной поверхности. Выход фага и размер стерильных пятен увеличиваются, 124 а Растворы ампицпллииа нестабильны, поэтому взвешенный порошок зв. тибнотика суспендируют в стерильной воде и сразу добзвлшот к средам до желаемых конечных концентрация Маигио также приготовить искадный кан центрированный раствор и хранить его при †20 'С, Чтобы получить точную концентрацию чистого ампицнллииа, следует ввести поправки иа буферы и другие ингредиенты.
б Суспеиднруют в б0%-нем этаиоле н хранят при 4'С. в Суспеиднруют в О,! н. МаОН, превращающем кислоту в натриевую соль, и хранят при 4 'С г д Добавлять к ЕМВ-агару в концентрации 70 мкг/мл Растворяют в !00гй ном метаноле в концентрации 20 чг/мл, после чего раствор разводят стерильной водой да получения 2 мг/мл в !Оа иом метаноле Хранят при 4 'С в темноте и каждую неделю готовят заново. е Суспеидируют в стерильной воде и хранят прн 4 'С ж Растворы тетрациклииа нестабильны, поэтому взвешенный порошок аи. тнбиотнка суспеидируют в стерильной воде и сразу добавляют к средам до желаемых конечных концентраций Можно также ориготовнть исходный концентрированный раствор и хранить его в темноте при — 20'С В связи с тем что в препаратах теграциклииа час~о присутствует аскорбиновая кислота в довольно большой концентрации, следует лопать необходимые поправки 14 ПЕРЕНОС ГЕНОВ если в чашку заливают 35 — 40 мл агаровой среды.
Важно также, чтобы агар в чашках, предназначенных для спот-теста, не был ни слишком подсохшим, ни слишком увлажненным. Качество агара улучшается, если его разливают в чашки за два дня до использования; затем оба дня или один день перед работой его выдерживают при комнатной температуре и инкубируют с закрытой крышкой 12 ч при 37'С. Если лизат готовят из сплошного газона в чашке, агар заливают в чашки за день до опыта и не подсушивают при 37'С. Минимальный агар в чашках, которые часто необходимо инкубировать по двое суток, должен иметь объем -25 — 30 мл. Процессы брожения на ЕМВ-агаре или агаре Мак-Конки также идут лучше, если в чашках содержится по крайней мере по 25 мл агаровой среды. 14.4.10.
Хранение агаровых сред Большинство агаровых сред, за исключением тех, которые содержат нестабильные антибиотики ?табл. 14.5), можно помещать в пластмассовые мешки и хранить при 4 'С в течение нескольких месяцев. Среды с красителями и другими окрашенными соединениями следует хранить в темноте. Это особенно важно для ЕМВ-агара, который, подвергшись фотоокислению, тормозит рост бактерий. 14.4.11.
Поставщики штаммов бактерий и фагов Штаммы. Е. со)Ь СоВ бене?!с 5?ос)с Сеп1ег, Рг. ВагЬага ВасЬтап, ?)ераг1теп! о1 Нпгпап Пепе!!Сз, Уа!е ?)п)негзйу ВСЬоо! о1 Мег?!С!пе, ЗЗЗ Се!!аг 51гее1, ?х)ечг Науеп, СЬ? 06510. Штаммы других бактерий и фагов. АтеНсап Туре СН11пге Со!!есБоп, 12301 РаГЫахнп ?)Г!че, Кос?сн!11е, М?х 20852. 14.5.
ЛИТЕРАТУРА 14.5.1. Общая литература 1. С!огнев !1. С, Бауаз !Р Ехрегнпев!з !п гп!сгоша! Кспенсз. В1аг!4- тве!! 8с!еп1!Пс РпЬ1!са1~опз, Ох!огф 1968. Книга немного устарела, но содержит много полезных методов и прописей длн зксперимеитов в области молекулярной генетики. 128 ЧАСТЬ ГИ. ГанатИКА 2, М!!!ег У. Н. Ехрег1гаеп!в 1п гпо1еси!аг йене!1св. Со!й Ярг1пй НагЬог 1.аЬога1огу, СоЫ Брина НагЪог, Ы. У., 1972. Современное и полное собрание методов и прописей длн экспериментов в области молекулнрной генетики и молекулярной биоло.
гии. 14.5.2. Специальная литература 3. АсМтап М. Сигг. Тор. М!сгоЫо!, 1пппипо1., 60, 79 — 123 (1973). 4. Айатя М. Н. Вас1епорЬайев, !п(егвс)енсе РиЬВвЬегя, !пс., Ыеиг Уог)г, 1959. 5. Васйтапп В. У., Еоиг К. В., Тау!ог А. Е. ВасЛено1, Веч., 40, 116— 167 (1976). 6. Веги С. М., Сит!!яя !г., П!. Сепсиса, 56, 503 — 525 (1967). 7. Виййаг! А, !., Яйаргго У, А., Аййуа Я. Е. (ей.). ОЫА !пяегноп е1етепЬЬ р)аягпЫя, апй ер!ветен. Со!й Ярг!пй НагЬог ЕаЬога1огу, СоЫ Ярг!пй НагЬог, ЬЕ У., 1977. 8.
Саго Е., Вегу С. М. Ме1Ьойя Епвуто!., 210, 444 — 458 (!971). 9. Соя)оу Я. О., О!яйг' М. Ргос. Ыа11. Асай. Ясй Е!5.А., 70, 84 — 87 (1973). 10. Сит!!яя !7, УП. Л. Вас1еио1., 89, 28 — 40 (1965). 11. Ситная У!., УП. Аппп. Йеч. М1сгоЫо1,, 23, 69 — 136 (1969). 12. Ситная )7., УП, Рета!сй !!. О., Уг., Оо!Йясйт!й! )7., Ра!Мпдйат У.
О„П!. 1п; 5. МнвииавЫ (ей.). В 1ас1ог йгий геив1апсе р!аята!й, р. !09 — 134. 1)п1чегяйу о1 То)гуо Ргеяя, Тонус, 1977. 13. Сит!!яя гс., УП, Масина Р. Е., Ра!Мпуйат У. О. !П. 1п: Й. С. К)пй (ей.), НапйЬоо)г о1 йепенсв, чо!, 1, р, 115 — 133. Р!епшп РиЫ11яЫпй Согр., Ыехч Уогй, 1975. 14. Оетегес М., Айейбегу Е. А., С1агй А. У., Наггтап Р. Е. Оепенсв, 54, 6! — 76 (1966). 15.
Епеа )г., Усе!я О. Р., 2ийег Н. О. Л. Мо1. В!оЕ, 96, 495 — 509 (1975). 16. Раййом Я. !п1еснопв пшийр!е йгий гев(я1апсе. Р(оп 1.ипней, 1.опйоп, 1975. 17. ОоЫЬегу УЕ В., Вепйег )7. А., ЯНе!сйег Я. Е. Л. Вас1ег1о!., 118, 810 — 814 (1974). 18. Науея йг. ТЬе йепенсв о1 Ьас1еиа апй 1Ье!г ч)гияея, 2пй ей. Лойп Уч1!еу апй Яопя, 1пс., Ыетч Уог)г, 1968 19. Негяйеу А.
О. ТЬе Ьас1ег!орйаае !агПЬй. СоЫ Ярипа НагЬог, Ыегч Уог)г, !97!. 20. Попу У.-Я., Агпех В ЬЕ Ргос. Хан, Асай. 8с1. ЕГ.Я.А., 68, 3!58— 3162 (1971). 21. УасоЬ Р., иго!!тап Е. !. Яехиа! Ву апй ЬЬе аепейсв о1 Ъас1ег!а. Аса. йепис Ргеяв, 1пс., Хехч Уог1г, ! 961. 22.
Уип! Е. Л. Вас1епо1, 1! 2, 917 — 931 (1972). 23 Уип! Е., Уапнй А, Л Вас1еио!., 98, 281 — 288 (1969). 24. !.еппох Е. Я. У)го1ойу, 1, 190 — 206 (1955) . 25. УетМ В. Оспе ехргевя!оп — 3. Р)автЫя апй р)гайся, Лойя Уяг!!еу апй Бопв, 1пс., алехе Уог)г (!977). 26. Еой!яй Н. Р. Л. Мо!. В!оЕ, 50, 689 — 702 (1970).
27. Еога К. В. Вас1ег1о1. Иеч., 36, 587 — 607 (1972). 126 !4. ПЕРЕНОС ГЕ?!ОП 28. Маиде! М., Н!аа А. 3. Мо1, В!о1., 53, 159 — 162 (! 970). 29. Матпиг У. Л. Мо1. В!о!., 3, 208 — 218 (1961). 30. У?в!г!тига у., Саго Е., Вег5 С. М., Н!го!а у. Л. Мо1. В!о1., 55, 44!в 456 (1971). 31. Уо!аМ У. К., БеНот Х. К.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
