Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 67
Текст из файла (страница 67)
8.5.52. Агар Тейера н Мартина Эту среду чаще всего готовят из имеющихся в продаже концентратов и растворов или используют готовую (ВВ1. или 1Исо). Раствор А (основной агар БС двойной концентрации): Паикреатическнй гидролизат ка- 15 г зеина ГАВР Пепгический гидролизат живот- !Бг ной ткани 1)ЯР 345 ЧАСТЬ П. РОСТ Кукурузный крахмал 2г КзНРОз 8 г КНзРОс 2 г ХаС1 10 г Агар (см, примечание) 20 г Дистиллированная иода !000 мл Кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин прн 12! 'С, после чего охлаждают до 50'С. (Примечаниег Файнголд и др. 1201 рекомендуют узеличнть количество агара до 30 г.) Раствор В: 20 г 1000 мл Гемоглобин Дистнллирозаниая кода К небольшому количеству воды постепенно добавляют порошок гемоглобина, чтобы получить однородную пасту; затем постепенно добавляют остальную воду. Стерилизуют 15 мии при !21 С. 0,02 г 0,003 г 25,9 г 1000 мл Раствор Рг 30 мг 75 мг 125 000 ед.
100 мл Ванкомицин Колистин Нистатин Дистиллированная вода Стернлизуют фильтрозаиием. С соблюдением правил асептики объединяют по 1000 мл растворов А и В и по 20 мл растворов С и Р. Среду раз- ливают в чашки Петри. Раствор С: Витамин Вы В-Глутамин Аденин Солянокислый гуанин л-Аминобензойная кислота (.-Цистин Глюкоза Никотииамидадениндинуклеотид Тиамиипирофосфат (кокарбокси. лаза) Нитрат железа Соляиокислый тнамии Солянокислый цистеии Дистиллированная вода Стерилизуют фнльтрозанием. 0,010 г 10 г ! г 0,03 г 0,013 г 1,1 г 100 г 0,25 г 0,1 г а, пОлучение накопительных и чистых культуР 8.5.53. Среда для Т)г!ОЬас!1!из !Е|оох!с)апз 1781 8.5.54.
Среда с триптофаном 1441 МКБОг 7НгО 0,2 г КгНРОг ! г МпС!г 4НгО 0,002 г Ге50г 7НгО 0,05 г СаС!г 0,02 г !ЧаМООг 2НгО 0,001 г 1.-Трнптофаи 1 г Дистиллированная вода !000 мл Доводят рН до 6,8 — 7,0 и стерилизуют автоклавированием. 8.5.55. Среда Велдкампа [771 НаС! КНгРОг ЫНгС1 МЕСИ 6НгО 30 г ! г ! г 0,5 г 347 ЫагБгОг 5НгО 10 г КНгРОг 4 г КгНРОг 4 г МКЕО,.ТН,О 0,6 г !ЧНгС! 0,4 г Раствор микроэлементов (см. виже) 10 мл Деиониэоваиная вода 1000 мл Стерилизуют 15 мин при 121'С. Доводят рН до 3,5 — 4,0 стерильной Нэ304. Для получения твердой среды перед доведением рН добавляют 15 г агара на 1 л.
Кипятят до растворения агара, стерилизуют автоклавированием и охлаждают до 45 — 50'С. Доводят рН до 3,5 — 4,0 стерильной Нг30!. Раствор микроэлементов: ЭДТЛ 50 г кп50г 7НгО 22 г СаС1, 5,54 г МпС1г 4НгО 5,06 г Ре30г. 7НгО 4,99 г (!ЧНг) гМогОИ. 4НгО 1,1 г Сн50г. 5НгО 1,57 г СоС!г ЕНгО 1,6! г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 6,0 с помощью КОН. ЧАСТЬ 11. РОСТ 0,04 г 5 г О,! г 5 мл 2 мл 5 г 0,3 г !000 мл Сасп )ЧаНСОз )Чагб 9НзО Цитрат железа, 0,004 М раствор Раствор микроэлементов (см.
ниже) Агар, порошок Дрожжевой экстракт Дистиллнровапнан вода 8,5.56. Агар с желчью и фиолетовым Дрожжевой экстракт Понтон (1Исо) илн лжелизат (ВВ1.) Смесь желчных солей Лактоза НаС! Нейтральный красный Кристаллический фиолетовый Агар Дистиллированная вода красным [б) Зг 7 г 1,5 г 1О г 5 г 0,03 г 0,002 г !5 г !000 мл Доводяг рН до 7,4, кипятят до растворения агара, охлаждают примерно до 45 'С и используют для заполнения чашек. После застывания среды ее покрывают дополнительным слоем среды, чтобы предотвратить по. верхностный рост и распространение колоний.
Доводят рН до 7,0. Для получения первичной накопительной культуры среду используют без стерилизации. Чтобы получить среду, используемую для посева разливом в чашки, готовят среду двойной концентрации, но без агара, доводят ее рН до указанного значения и стерилизуют фильтрованием (положительное давление). Отдельно готовят 4%-ный раствор агара в свежедистиллированной прокипяченной воде и стерилизуют его кратковременным автоклавированием. Температуру среды двойной концентрации и расплавленного агара доводят до 45 — 50'С и с соблюдением правил асептики смешивают их в равных объемах. Раствор микраэлвмекговз НзВОз 2,8 г МпЯОз НзО 2,1 г Сн((ЧОз)г ЗНзО 0,2 г ХагМоОз 2НзО 0,75 г.
СоС!г ° бНзО 0,2 г Зп(ЫОз)г бНгО 0,25 г Деионизованнаи вода !000 мл а. получение нАкОпительных и чистых культуР 0,2 мг 2 мг 1 мг 1 мг 0,5 мг 5 мг 100 мл Растворяют ингредиенты, стерилизуют их фильтрованием и хранят при 4'С. 8.5.57. Среда Виддла и Пфеннига [81! Ацетат натрия 1,23 г Маг50г 2,84 г КНгРОг 0,68 г МеСг), 0,19 г )г НгС! 0,32 г СаС(г О,О7 г Раствор микроэлементов (см. виже) 10 мл Дистиллированная вода 1000 мл Стерилизуют 15 мин при 121'С. Затем добавляют следующие ингредиенты из стерильных основных растворов: ГеС!г (из подкисленного основного раствора) 0,00025 г )ЧаНСОг (стсрилизован фильтрованием при поло.
1,68 г жительнам давлении) (ЧагБ (стерилизовав фильтрованием) О,!17 г Раствор витаминов (стерилизован фильтровани- 5 мл ем, см. ниже) Витамин Вм (стерилизован фильтрованием) 20 мкг Доводят рН среды до 7,1 стерильным раствором НзРОл. После инокуляции к среде добавляют 0,03!5 г 5)аз5з04- 2Н,О на 1 л (из свежеприготовленного основного раствора, стерилизованного фильтрованием). Для морских микроорганизмов добавляют 20 г )4аС! и 1,14гМоС)з на ! л среды.
Раствор микроэлементов: 2п80г 7НгО 10 мг МпС!г 4НгО 3 мг НгВОг 30 мг СоС!г 6НгО 20 мг СнС!г 2НгО ! мг 5ВС!г 6НгО 2 мг гкагМоОг 2НгО 3 мг Деионизованная вода 1000 мл Раствор витаминов: Биотин Н нации Тиамин л-Аминобензойная кислота Пантотеновая кислота Пиридоксамии НС! Дистиллированная вода чАсть и. Рост 8.5.58. Щелочная среда Вили и Стокса 1821 Дрожжевой экстракт 20 г 1!чн,) эбо, 10 г Тряс 15,7 г Дистиллированная вода 1000 мл Основные растворы каждого ингредиента готовят отдельно и стерилизуют их автоклавированием (рН-трисбуфера должен быть 9,0). Смешивают ингредиенты с соблюдением поавил асептики и проверяют конечный рН, который должен быть 8,7.
Для получения твердой среды добавляют !5 г агара на 1 л среды. 85.59. Агар с дрожжевым акстрактом и маннитом Маннит 10 г 1хэНРОэ 0,5 г Ми5О, 7Н,О 0,2 г ЫаС! 0,1 г СаСОэ Зг Дрожжевой экстракт 0,2 г Агар 15 г Дистиллированная вода 1000 мл Кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121'С. 8.5.60 Среда т'Р 1751 Дрожжевой экстракт 3 г Пелтон 0,6 г Дистиллированная вода !000 мл Доводят рН до 7,2 и стерилизуют 15 мнн при 121'С, Для полужидкой среды т'Р, используемой как покрытие, добавляют 6 г агара на 1 л; для получения твердой среды добавляют 19 г агара на 1 л.
Кипятят до растворения агара и стернлизуют автоклавированием. 8.6. ЛИТЕРАТУРА 8.6.1. Общая литература 1. Алголам 5. Ехрепшеп1а! пнсгоь!а! есо!опу, Асабеш!с Ргеээ, !пс., !Чечг Уог!г, 1970. Содержит очень много подробных методов получения накопительных культур и выделения большого числа бактерий, В.
ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР 2. Со!1!аз (г. 6. 1ьо!апоп, сийгчаИоп впд та!п1епапсе о1 аи1о(горйз, р, 1 — 52. 1п: У. Й. Хогг!ь апб О, УУ. Й(ЬЬопв (ебв.), Мейобз !п т!сгоЫо)оиу, чо(. ЗВ, Лсабет!с Ргезз, 1пс., Нечг Уогй (1969). Обстоятельный обзор прннцняов и методов получения накопительных культур и выделения фото. и хемоавтотрофов. 3, Еепаегге Е. Н., Ва!отея А., Наив!ег ЯГ. У., Уг., Тгиап( У.
Р. (Ыз.). Манив) о1 с!!п1са1 т(сгоЬ(о!оеу, Згб ей, Агпепсап бос)е(у 1ог М(сгоЫо1оеу, УдаьЫпе1ои, О.С., 1980. Принципы и методология получении накопительных нультур и выделения патогенных бактерий, риккетснй, вирусов и грибов, 4, УеЫЬатр Н. Епг(сйтеп! сицигев о1 ргоКагуобс огевп1зтв, р. 305 — 36!.
1п: У. ц. Ногти апб О. %. КЕЬЬопв (ебз.), Мейобв !п т(сгоЫо(оеу, чо!. ЗЛ, Асабет!с Ргезз, 1пс., Ыем Уогй, 1970. Основное внимание уделено теоретическим аспектам получения накопительных культур; описаны методы накопления специфических микроорганизмов. 8.8.2. Специальная литература 5. Апеп 6. А. Ехрепгпепй |п ьой Ьас1епо1обу, Згб еб., Вигееьь РиЬВьЫпй Со,, М!ппеаро!Нь 1957. 6. Агпепсап РиЫ1с Неа)й Аззос!а!!оп. 5(апдагб гпе1Ьобь 1ог йе ехатшв(!оп о1 дв(гу ргобис1в, 11й ей, Атег1сап РиЫ1с Неа(й Льзос!аВоп, Ыетч УогК, 1960.
7, Агауао М„бсЫеуе! Н. 6. Адиаяр!гЬЧит аи!о1горЫсит, а пети зрес!ез о1 Ьудгоееп.ох)41г!пб, 1аси!!аиче!у аи1о1горЫс Ьас(епа, 1п1. У. Зуз1. Вас(ег1о!., 28, 112 — !!б (!978). 8. АгтЬгия1ег Е. Н. 1гпргочеб (есйппйие 1ог ыо!а(юп апб Ыепо(саВоп о! Врйаегог!!ия, Арр(. М(сгоЫо1., 17, 320 — 32! (1969). 9. Аггтоог( л(. М., Нагг)ег ЯГ. А гарЫ апд вресВ!с еппсйтеп1 ргоседиге 1ог Нураот!сгоЬшт врр.
Ап1оп)е чап Кееиигепйоей, У. М(сгоЬю!. Бега!., 38, 369 — 378 (!962). 10. Вагпез Е. Ай Ме(боба 1ог йе 1во)аиоп о( !асса! з1гер1ососс) (1.ап. се11е1д Огоир О) !гоги Ьасоп 1ас1ог(ев, У. Лрр!. Вас1епо1., 19, 193 — 203 (1956). 11, Вгоса Т. О., Ргееге Н. Тйегтиз адиа1(сиз Ееп. п. апб ьр. п., попвроги1абпб ех1гете йегторЫ(е, У. Ввс1ег(о1., 98, 289 — 297 (!969).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
