Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 66
Текст из файла (страница 66)
Осадку дают возможность осесть, а надосадочную жидкость сливают. К осадку вновь добавляют кипящей дистиллированной воды и несколько раз переворачивают колбу, ресуспендируя осадок. Дают осадку осесть, надосадочную жидкость сливают, а к осадку опять добавляют кипящую дистиллированную воду и т. д. Таким способом отмывают сульфид железа четыре раза. Осадок хранят в мерной колбе, наполненной водой и закрытой пробкой. Сульфнд железа достают со дна колбы пипеткой. В, ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР К 100 мл осадка сульфида железа добавляют 15 г очн»ценного агара, кипятят среду до расплавления агара и стерилизуют 20 мин при 121'С.
Смесь разливают пипеткой по 10 мл в стерильные прямоугольные 150-миллилитровые молочные бутылки с завинчивающимися крышками и дают агару застыть. Лриготовление жидкого поверхностного слоя В каждой бутылке на агар наносят 50 мл (100 мл в случае получения накопительной культуры с формалином) среды следующего состава: НН,С! 1 г К»НРО» 0,5 г МК50».7Н»О 0,2 г СаСН 0,1 г Бромтимоловый синий О,О!б г Бромкреаоловый фиолето- 0,004 г вый Дистиллированная вола 1000 мл Стерилизуют 20 мин при 121'С. После охлаждения среду вносят с соблюдением правил асептики в сосуды с железосульфидным агаром.
Через жидкий слой в течение 15 с или до снижения рН до 6,0 продувают СОя. 8.5.35. Агар йчР88 Пелтон (Оксо) 5У Янтарная кислота 1 г (мн )»5О 1 г МК50».7Н»О 1 г ГеСН ОН»О 0,002 г Мп50» Н»О 0,002 г Агар !5 г Дистиллированная вода (см. прнмечание) 1000 мл Доводят рН до 7,0 с помощью КОН, кипятят до растворения агара и стернлнзуют 15 мин при 121'С. (Примечание: для морских микроорганизмов вместо дистиллированной воды используют морскую.) 8.5.36.
Реактив, содержащий (Ч(-ацетил-$ цистеин и гидроксид натрия 1201 Объединяют равные объемы 4о/о-ного МаОН и 2,94о7оного цитрата натрия.2НаР и разводят в этом растворе 339 чАсть и Рост порошок Ь)-ацетил-(.-цистеина (0,5о!о). Приготовленный раствор годен в течение суток. 8.5.37. Среда Ы(Ь 1171 5 г 0,5 г 0,2 г О,! г 0,02 г 2 мл 2 мл 10 мг 20 мг 100 мл 8.5.38. Среда для нитрификаторов 1581 Иа»НРО» 13,5 г КН»РО» 0,7 г МдБО, 7Н,О 0,1 г ЫаНСО» 0,5 г ГеС1».ОН»О 0,014 г СаС!г 2Н»О О,(В г Дистиллированная вода 1000 мл Разливают среду по 75 мл в 250-миллилитровые колбы Эрленмейера и стерилизуют 15 мин при 121 С.
В спучае бактерий, окисляющих нитрит, перед стерилизацией 340 1-Яблочная кислота К»НРО» МкБО, 7Н,О 1чаС) С аС1, Раствор микроэлементов (см. ниже) Бромтимоловый синий (5$-ный спиртовой раствор) Ге-ЭДТА (1,54аи.иый раствор) 4 мл Раствор витаминов (см. ниже) 1 мл КОН 4 г Агар 1,75 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 6,8, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мнн при 121'С. Среду охлаждают до 40 — 50'С и разливают по 4 мл в 6-миллилитровые сывороточные пузырьки с резиновыми прокладками.
Раствор минрозлеменгов: !Ча»Моо» 2Н»О 0,2 г Мпзо» Нго 0,235 г НзВО» 0,28 'г Сизо» 5Нзо 0,008,г 2п50» 7Нзо 0,024 г Дистиллированная вода 200 мл Раствор витаминов: Биотни Пиридоксин Дистиллированная вода З ПОЛУЧЕНИЕ НЗКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР в среду добавляют 0,5 г ХаХОз на 1 л. Для бактерий, окисляющих аммоннй, стерилизуют отдельно раствор (ХН4)з504 и добавляют его с соблюдением правил асептики до конечной концентрации 0,5 г/л. 8.5.39.
Среда Пфеннига и Библа для серуокисляющих бактерий 1561 КНзр04 ХН,С1 Ма304 7НзО МЕС14 6НзО ХаС1 (для морских организмов) СаС14.2НзО Раствор микроэлементов (см. ниже) Раствор 2 М Н4504 Дистиллированная вода Стерилизуют автоклавированием и после охлаждения добавляют следующие компоненты основного раствора: 0,5 г 4 г Апетат натрия ХаНСОв (простернлизован фильтрованием при положительном давлении) ХазБ 9Н40 Биотин 0,3 г 20 мкг Доводят рН до 7,8. Растирают высокоочищенный серный цвет с дистиллированной водой в ступке и стерилизуют его 30 мин при 112 — 115 'С; избыток воды декантируют, К каждой порции среды (50 мл) добавляют кусочек серы размером с горошину. Кроме того, в каждую бутыль со средой добавляют стерильные стеклянные бусы.
500 мг 200 мг 10 мг 3 мг 30 мг 20 мг 1 мг 2 мг 3 мг !000 мл 341 Раствор микроээелзентозз ЭДТА, двунатриевая соль Ге504 7НзО Еп304 7Н40 МпСИ 4Н40 НзВОз СоС!з 6НзО СпС14 2Н40 КОС!4 6НзО ХазМо04 2Н40 Деионизоваиная вода 1 г 0,3 г 1 г 2 г (20 г) О,! г 10 мл 2 мл 1000 мл ЧАСТЬ 1!. РОСТ 8.5.40. Феиилэтаноловый агар (ВВ(. или Р((со) 15 г 5 г 5г 2,5 г 15 г 1000 мл Доводят рН до 7,3, кипятят до растворения агара и сте- рилизуют 15 мин при 118'С.
8.5.41. Почвенная среда Прингсхейма [601 Зерно пшеницы или ячменя вносят в большую пробирку и покрывают его садовой почвой толщиной 3— 4 см. Пробирку заполняют водопроводной водой почти доверху. Стерилизуют среду 30 мин при 121'С. 8.5.42. Среда КОСА-8С 127] 0,05 г 1 мл 0,02 мл Среду готовят способом, описанным для бульона РУ (разд. 20.3.28), разливают по 10 мл в пробирки, содержащие 0,2 г агара, и автоклавируют. Для приготовления конечной среды в двух пробирках агар расплавляют и охлаждают до 50'С.
В каждую пробирку добавляют с соблюдением правил асептики: Стерильную инактивированиую сыворотку кроли- 1,5 мл ка, нагревавшуюся в течение 4 ч при 60'С Раствор кокарбоксилазы (тиаминпирофосфата; 0,2 мл 0,025а(с), стерилизованный фильтрованием Стерильный предварительно восстановленный 2,0 мл бульон РУ (равд. 20.3.28) 342 Паикреатический гидролизат казеииа ()БР Напаиновый гидролизат соевой муки 1)5Р МаС1 Фенилэтаиол Агар Дистиллированная вода Глюкоза Целлобноза Растворимый крахмал (МНь) е50ь Раствор ресазурина (0,025е)э) Дистиллированная вода Раствор солей (равд.
20.3.28) Рубцовая жидкость (капдо1рй В1о!оя1са1з, Нопыоп, Тех.) Солянокислый цнстеин Раствор гемина (равд. 20.3,28) Раствор витамина К~ (равд. 20.3.28) 0,0248 г 0,0248 г 0,05 г 0,1 г 0,4 мл 20 мл 50 мл 30 мл 3. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР Смешивают и переливают содержимое двух пробирок в чашку Петри, где среда застывает. Среду либо используют немедленно, либо хранят в анаэростате. 8.5.43.
Агар для салмонелл и шигелл (ВВР или РДсо) Мясной экстракт 5г Пептон 5 г Лактоза 10 г Смесь желчных солей 8,5 г Цитрат натрия 8,5 г Тиосульфат натрия 8,5 г Цитрат железа 1 г Бриллиантовая зелень 0,33 г Нейтральный красный 0,025 г Агар 13,5 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,0 и нагревают до кипения, чтобы растворить агар. Автоклавирования не проводят. Охлаждают до 42 — 45'С и разливают в чашки Петри. 8.5.44.
бульон с селенитом Г (431 (ВВ(. или Рдсо) Полипептои (ВВЦ или триптои (Онсо) 5г Лактоза 4 г 51а,НРО, 10 г Кислый селенит натрия 4 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,0. Среду используют сразу же без стерилизации или хранят пробирки после их стерилизации с текучим паром в течение 30 мии. 8.5.45. бульон гидролизата казеииа и соевой муки [известен также, как триптиказо-соевый бульон (ВВ(.) или триптический соевый бульон (Р1(со)) Панкреатичсский гидролизат казеина 17 г ПБР Папаииовык гидролизат соевой муки Зг !55Р 1ЧаС! 5 г КзНРОз 2,5 г Глюкоза 2,5 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,3 и стерилизуют 15 мин при 118— 121 'С.
чАсть и, Рост 8.5.46. Среда для Зр)таегоИиз 181 При необходимости доводят рН до 7,1 — 7,2. Разливают порции по 50 мл в квадратные бутыли Френча и стерн- лизуют 15 мин при 116'С. 5рогосууорйауа С1зго- 10 г вода 8.5.48. Агар для стандартных методов 16) !ВВ). или 1зИса) Панкреатический гндролизат казеина 115Р Дрожжевой экстракт Глюкоза Лгар Дистиллированная вода Доводят рН до 7,0, кипятят до растворения агара и сте- рилизуют !5 мин при 121 'С.
8 5.49. Среда с сукцинатом и солями 4 г 0,5 г 0,5 г Мд50з 7НзО 0,2 СаС!з 2НзО 0,1 Ре50з 7НзО 0,2 Сукнинат натрия КНОз КзНРОз Доводят рН до 7,0 и стернлизуют 15 мин при 121'С. Лактат натрия ХНзС! КНзРОз КзНРОз НазНРОз 7НзО М85Оз 7НзО СаС! з РеС!з.6НзО Дистиллированная вода 8.5.47. Среда для Бумага %!за!пзап гоез!1а 11 К!ЧОз М250з 7НзО СаС!з 2НзО ГеС1з Дистиллированная !ОО мг 1,7 мг 8,5 мг 21,5 мг 34,4 мг 22,5 мг 27,5 мг 0,25 мг 1000 мл 0,5 г 0,2 г О,! г 0,02 г 1000 мл 5г 2,5 г 1 г 15 г !000 мл 8. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР 8.5.50. Агар ТСВ8 [3] (ВВ).) Тиосульфат натрия 10 г Цитрат натрия 10 г Бычья желчь Е г Халат натрия Зг Сахароза 20 г Панкреатический гидролизат казеина 1)ЗР йг Пептический гидролнзат животных тканей ПЕР Ег Дрожжевой экстракт Бг )ЧаС1 10 г Питрат железа ! г Тимоловый синий 0,04 г Бромтимоловый синий 0,04 г Лгар !4 г Дистиллироваввая вода 1000 мл Нагревают, помешивая, и кипятят 1 мин.
Среду охлаждают до 45 — 50'С н разливают в чашки. Автоклавирования не проводят. Конечный рН должен быть 8,6. 8 5.51. Агар с ацетатом таллин Лиетаг таллня 1 г Пелтон !О г Дрожжевой экстракт 10 г Глкжоза !О г Лгар 13 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 6,0, кипятят до растворения агара и стерилизуют !5 мнн при 118'С. Смесь охлаждают до 45 — 50'С, добавляют к ней с соблюдением правил асептики 10 мл салянокислого трифенилтетразолия (1о)о-ный водный раствор, стерилизованный фильтрованием) и разливают в чашки Петри.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
