Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 65
Текст из файла (страница 65)
Среда СН88 для Бр(г(1(ит оо!и(апа Кислотный гидролизат казеина, без витаминоа и солей (!СМ Хн!ги!опа! Вшсйепт С!ече!апд, Ои(о) Янтарная кислота (МНг) г30г МИ30г. 7НгО !чаС! геС!г бНгО й(пЗОг.НгО Дистиллированная вода 8.5.16. Кровяной агар с цистином и теллуритом [8] Агар с зкстрактом сердечной мышцы (основной кровяной агар, равд. 20.3.3!) Агар !О г !О г ! г 2 г 5 г О,! г !5 г !000 мл ! г ! г ! г О,! г 0,002 г 0,002 г 1000 мл а, пОлучения нАкОпительных и чистых культуР С соблюдением правил асептики добавляют следующие ингредиенты: Во время разлива в чашки Петри смесь помешивают, чтобы цистин оставался в суспендироваином состоянии.
8.5.17. Агар Е 13) 20 г Яг 1О г 1000 мл Папанновый гндролнзат соевой муки Б5Р ЫаС! Агар Деноннзованная вода Смесь нагревают до растворения ингредиентов, охлаждают и с помощью МаОН доводят рН до 7,4. Разливают и стерилизуют 15 мин при 121 "С, а затем охлаждают до 50'С.
К 65 мл раствора добавляют с соблюдением правил асептики 10 мл дрожжевого диализата (см. ниже), 25 мл лошадиной сыворотки, 2 мл пенициллина (10000 ед./мл) и 1 мл 3,3%-ного ацетата таллия (стерилизованного фильтрованием). Среду разливают по 5 мл в чашки Петри (10рс',35 мм) и перед использованием инкубируют в течение ночи при комнатной температуре. Дрожжевой диолизот; 450 г активных сухих дрожжей суспенднруют в 1250 мл днстнллярованной воды прн 40'С. Нагревают 5 мнн прн 121'С н дналнзуют против 1 л дистиллированной воды в течение 2 дней прн 4'С. Дналвзный мешок вместе с содержимым удаляют, а дналнзат стернлнзуют 15 мнн прн 121 'С н хранят в морозильной камере.
Двухфазная среда Для получения двухфазной среды в стерильные пробирки (16)с,25 мм) с завинчивающимися крышками с соблюдением правил асептики разливают по 3 мл Е-агара. После затвердения на среду наслаивают 3 мл Е-бульона (равд. 8.5.18) и хранят пробирки при комнатной температуре. 331 Дефнбрннврованная кроличья нлн овечья кровь 25 мл (равд. 20.3.7) О,зсь'-ный раствор теллурнта калия, стерилизованный 75 мл автонлавнрованнем 1.-Цкстнн чАсть и.
Рост 8.5.18, Е-бульон [31 Папаиновый гидролнзат соевой муки 1)БР !ЧаС! Глюкоза Феиоловый красный, 27юный водный раствор Деионизованная вода Доводят рН до 7,6, разливают и стерилизуют 15 мин при 121'С. После охлаждения к бульону добавляют те же компоненты, что и в случае Е-агара (равд. 8.5.17). 8.5.19. Основная среда Гизбергера [831 !4Н~С1 КзНРОз М03О, Дистиллированная вода (см. примечание) ! г 0,5 г 0,5 г 1000 мл Доводят рН до 7 и стерилизуют 15 мин при 121'С. (Примечание! для морских микроорганизмов вместо дистиллированной воды используют морскую.) 8.5.20, Глюкозо-триптоновый агар [61 Триптон (Онсо) или триптиказа Глюкоза Агар Бромнрезоловый фиолетовый Дистиллированная вода Доводят рН до 6,7, кипятят до растворения агара и сте- рилизуют 15 мин при 121*С.
Среда для галофилов [651 75 г КС! МК50а 7НзО 1О г РеС)з Ь!аС! 3 г Дистиллированная вода 8.5.21. 332 Казаминовые кислоты Дрожжевой знстракт Тринатрий. нитрат 10 г 5 г 15 г 0,04 г 1000 мл 20 г 5 г ГО г 2 мл 1000 мл 2г 20 г 0,023 г 250 г 1000 мл а. получение накопительных и чистых культуР Перечисленные ингредиенты растворяют в 800 мл дистиллированной воды и доводят рН до 7,5 — 7,8 с помощью 1 н. КОН. Автоклавируют среду 5 мнн при 120 С н затем фильтруют для удаления осадка. Доводят рН до 7,4 с помощью 1 н.
НС1, а объем среды — до !000 мл и стерилизуют автоклавнрованием. Если необходима твердая среда, то добавляют 20 г агара на 1 л, кипятят до его растворения, а затем автоклавируют. Среду разливают в чашки Петри при 60 — 70'С, чтобы предотвратить ее преждевременное отвердение, 8.5.22. Среда для Нур)тотгсгоб!ит 191 (см, ниже) Доводят рН до 7,0 с помощью НаОН. Среду, используемую для получения накопительных культур, не стерилизуют. Среду, используемую для выделения чистых культур, стерилизуют 15 мин при 121'С перед добавлением метанола. Для приготовления твердой среды, используемой при выделении бактерий, добавляют 15 г агара на 1 л и исключают из смеси К!)Оз.
Перед добавлением метанола среду стерилнзуют 15 мин при 121'С. Для удаления кислорода из всех жидких сред перед использованием через ннх продувают азот. В анаэробных условиях К!чОз в этих средах служит акцептором электронов. 50 мг 400 мг 1 мг 0,4 мг 2000 мг 500 мг 1000 мл 333 КгНРОз ЫамзРОз НзО 1)ЧНз)з50з МК50з ТНгО СаС)з 2НгО РеСВ 4НзО Метанол К)ЧОз Раствор микроэлементов Деионизованная вода Раствор микроэлементов: 2п50з УН,О МиСВ 4НзО СоС!г 6НзО СнБОз 5НзО НзВОз )ЧазМоОз.
2НзО Деионизованнан вода 1,74 г 1,38 г 0,5 г 0,2 г 0,025 мг 3,5 мг 5 мл 5 г 0,5 мл 1000 мл часть !!. Рост 8.5.23. Среда Иверсова [331 40 г Триптиказо-соевый агар (обезвоженный, ВВЬ! Агар 5 г Лактат натрия, 04Уз-ный раствор 600 мл М65О,.ТН,О 2 г Железоаммонийсульфат 0,5 г дистиллированная вода 400 мл Доводят рН до 7,2 — 7,4, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121 С.
8.5.24. Лактатная среда 8.5.25. Бульон для листернй [31 Пептон, триптоза (Онсо) или 20 г биосейт (ВВ1.) Глюкоза (декстроза) 2 г !ЧаС! 5г !ЧазНРОг 2,5 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,3 и стерилизуют 15 мин при 121'С. 334 дрожжевой экстракт Лактат натрия (ЧН,С( К НРО Мп50ь 7Н,О СаС)з 2НзО Ре50м 7НгО !Чаз50! !ЧаС! (для морских организмов) Стерилизуют 15 мпн при 121'С. 8.5.26. Среда Левенп!Тейпа — Иенсена КНзРОг Ми50! 7НтО Цитрат магния Аспарагин Картофельная мука Глицерин Дистиллированная вода Гомогенизированные яйца Малахитовый зеленый 2-з(,ный водный раствор 1 г 4 г 0,5 г 1 г 0,2 г 0,1 г 0,1 г 0,5 г (20 — 30 г) (ВВ1. или О!(со) 2,4 г 0,24 г 0,60 г 3,6 г 30 г 12 мл 600 мл 1000 мл 200 мл а. получение нлкопителъных и чистых культуР 8.5,27.
Агар Мак-Конки (ВВ1. или Р!(со) Пептои (Эисо) или джелизат 17 г (ВВЦ Протеозопептои (Виго) или по. 3 г липептон (ВВь) Лактоза 10 г Смесь желчных солей 1,5 г Ь1аС1 5 г Нейтрал»ный красный 0,03 г Кристаллический Фиолетовый 0,001 г Агар 13,5 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН до 7,1, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин прн 121 С, или РИсо) 1 г 1О г 8.5.28.
Солевой агар с маннитом (ВВ1. Мясной зкстракт Пептон (ьЗИсо) или полипептон (ВВС) )ЧаС1 Маннит Феноловый красный Агар Дистиллированная вода 335 75 г 1О г 0,025 г !5 г 1000 мл Соли и аспарагин растворяют в воде, добавляют к иим глицерин и картофельную муку и автоклавируют 30 мин при 121'С. Скорлупу свежих (хранящихся не более педеля) яиц тщательно моют в 5о1о-ном мыльном растворе. Оставляют яйца в этом растворе на 30 мин, а затем скорлупу вновь тзцательно моют в проточной холодной воде.
На 15 мин погружают яйца в 707о-ный этанол, затем вынимают их и разбивают в стерильную колбу. Гомогенизируют яйца встряхиванием со стеклянными бусами, гомогенат фильтруют через четыре слоя стерильной марли и 1 л отфильтрованного яичного гомогената вливают в колбу с охлажденной картофельно-солевой смесью. Добавляют малахитовый зеленый, хорошо перемешивают и разливают по 6 — 8 мл в стерильные пробирки (20)с',150 мм) с завинчивающимися крышками.
Наклоняют пробирки и выдерживают их в течение 50 мин при 85'С для сгущения содержимого, Стерильность пробирок проверяют инкубацией в течение 48 ч при 37'С. Хранят пробирки с плотно завинченными крышками в холодильнике. чАсть ц, Рост Доводят рН до 7,4, кипятят до растворения агара, стерилизуют 15 мин при 121'С, охлаждают до 55'С и разливают по чашкам Петри.
8.5.29. Среда Мак-Брайда для лнстерий 131 ()Исо) Пептон, трнптоэа (Висо) нлн 1О г бносейт (ВВЕ) Мясной экстракт 3 г НаС1 5 г Ангидрид глнцнна 10 г 1.1С! 0,5 г Феннлэтанол 2,5 г Агар 15 г Днстнллнрованная вода 1000 мл Доводят рН до 7,3, кипятят до растворения агара и стерилизуют 15 мин при 121'С. Среду охлаждают до 45 — 50'С и добавляют к ней стерильную дефибринированную овечью кровь до конечной концентрации 5о/о. 8.5.30. Минеральный агар [7] )Ча»РО». 12Н»О 9 г КН»РО» 1,5 г Мя50» 7Н»О 0,2 г ЫН С! 1 г Желеэоаз»моняйцнтрат 0,005 г СаСЬ 2Н»О 0,010 г Раствор мнкроэлементов (см. 3 мл ниже) Бнднстнллнрованная вода 1000 мл Доводят РН до 7,1 и стерилизуют 15 мнн при 121'С. Для получения твердой среды добавляют 17 г агара на 1 л, смесь кипятят до его растворения и стерилизуют автоклавированием. После охлаждения среды до 45— 50'С добавляют нужное количество раствора ХаНСОа (стерилизованного фильтрованием) до конечной концентрации 0,5 г)л.
Раствор микроэлементов; Еп50» 7Н»0 !О мг МпСЬ 4НзО 3 мг Н»ВОз 30 мг СоС!з 6Н»О 20 мг СцС!з.бН»О 0,79 мг Н)С!з 6Н,О 2 мг Ыа»МоО» 2Н»О 3 мг Бнднстяллнрованная 1000 мл вода 336 8. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР 0,75 г 0,02 г 0,038 г 0,018 г 0,003 г 0,003 г 0,0005 г 0,02 г ! мл НаНОг КгНРОг. ЗНгО М880г 7НгО СаС5.2НгО Лимонная кислота Железоаммонийцитрат ЗДТА, двунатриевая магниевая соль МагСОг Смесь микроэлементов А5 (см.
среду ВО-11 в равд 858) Морская вода Дсионизованная вода После автоклавирования и охлаждения рН жен быть 8,3, 750 мл 250 мл среды дол- среда Рогозы (46) 8.5.33. Модифицированная Раствор Аг МОВОг 7НгО МпВОг 4НгО Рея 0г. 7НгО Дистиллированвая вода Раствор В; Дрожжевой экстракт Кислый аммонийцитрат КНгРОг Глюкоза Твин 80 Дистиллированная вода Н,5 г 2,8 г 0,08 г 100 мл О,г 2,4:г 7,2гг )24 г 1,2 г 100 мл 337 8.5.31. Агар для $(гер1ососсия т(г(я и 5. яа!(саг(ия 113) (г)1(со) Триптон (Омсо) 1О г Протеозопептон № 3 (ОИсо) 5 г Протеозопептон (Онсо) 5 г Глюкоза 1 г Сахароза 50 г КгНРОг 4 г Трипановый синий 0,075 г Кристаллический фиолетовый 0,0008 г Агар 15 г Дистиллированная вода 1000 мл Доводят рН, кипятят до растворения агара, стерилизу.
ют 15 мин при 121'С и затем охлаждают до 50 — 55 С. Добавляют 1 мл 0,18)в-ного телдурита калия (стерилизованного фильтрованием), перемешивают и разливают в чашки Петри. 8.5.32. Среда МТ) 159) ЧАСТЬ Н. РОСТ Раствор С: К 100 мл раствора В добавляют 6 мл раствора А. Слабо нагревают до растворения ингредиентов, а затем добавляют 60 мл 4 М апетатного буфера, рН 5,37, и доводят дистиллированной водой объем раствора до 200 мл. Конечный рН среды равен 5,0. Раствор йн Снятое сырое молоко (рН доведен до 8,5) 1000 мл Трипсин 5 г Хлороформ 1О мл Инкубируют 24 ч при 37'С, стерилизуют паром 20 мин, фильтруют горячий раствор и доводят рН до 6,65 ледяной уксусной кислотой 1около 0,5 мл на 1 л). Для приготовления полной среды добавляют к 700 мл раствора П 19 г агара, который растворяется во время автоклавирования при 121'С в течение 20 мин. К этому горячему раствору добавляют 185 мл раствора С, предварительно нагретого до 50'С, и доводят объем до 1 л горячим раствором О.
Проба из полученной среды, разведенная в 3 раза теплой водой, должна при 30'С иметь рН 5,35~0,05. Среду разливают по 1О мл в пробирки и без стерилизации хранят в холодильнике. При разливе среды по чашкам ее расплавляют слабым нагреванием, стараясь избежать потемнения среды н образования осадка. 8.5.34. Модифицированная среда Вольфа 140, 541 Приготовление железосульфидного игори Равные количества железоаммоннйсульфата н сульфида натрия вливают в кипящую дистиллированную воду, заполняют этой смесью мерную колбу и закрывают ее.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
