Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 59
Текст из файла (страница 59)
8.5.26), в целях подавления роста других бактерий. чАсть и. Рост 8.2.10. Ингибирование солями для получения культур стафилококков Для выделения стафилококков в среду добавляют 7,5$, МаС! (см. солевой агар с маннитом; равд. 8.5.28), При этой концентрации ИаС! рост других бактерий подавляется. 8.2.11. Ингибирование солями для получения культур галобактерий !23] Красные галофильные палочковидные бактерии Ни!обас1ег1ит и кокки На!Ососсиэ можно обнаружить в очень соленых белковых продуктах, например на соленой рыбе. Они обитак1т в солеварнях, в морской воде (1'тертвого моря) и в водоемах с очень высоким содержанием солей.
Для оптимального роста этих экстремальных галофилов необходима концентрация 5)аС! -25%. Они обычно не растут при концентрации ХаС! ниже !5% и даже после кратковременной экспозиции в таких растворах гибнут, Поскольку при концентрации МаС! 203о и выше растут только галофилы, их селекция из природного материала осуществляется довольно просто. Подходящая среда для получения накопительных культур таких бактерий приведена в равд.
8.5.21, После внесения проб колбы инкубируют при 37 'С на качалке и затем получают отдельные колонии путем посева культуры в чашки с этой же средой, содержащей 2$ агара. Чашки инкубируют при 37'С в течение 3— 14 дней в пластмассовых коробках илн мешках, предохраняющих среду от высыхания. 8.2.12. Ингибнрование желчью для получения нультур энтеробактерий Желчь или ее соли часто добавляют в культуральные среды для селекции энтеробактерий. Однако на средах с такими добавками способны расти не только кишечные бактерии, например, на чистой желчи может раетИ УЕГЗ1а!а рЕЗИЗ '(Ог31. ТЕМ НЕ МЕНЕЕ дО СИХ ПОр желчь используют в качестве ва нного селектирующего фактора при выделении грамотрицательных палочковид- а пОлучения нлкопительных и чистых кулътуР пых энтеробактерий и энтерококков.
Для селекции представителей сем. Еп|егобасгег|асгае желчь или ее соли добавляют к таким средам, как агар Мак-Конки (равд. 8.5.27), агар для салмонелл и шигелл (равд, 8.5.43), агар с желчью и фиолетовым красным (равд. 8.5.56) и многим другим, Для получения накопительных культур энтерококков [201 хорошей селективной средой оказался питательный агар с желчью (равд. 8.5.9). 8.2.13. Ингибирование пенициллином для получения культур микоплазм Поскольку микоплазмы лишены клеточной стенки, они устойчивы к высоким концентрациям пенициллина, который подавляет рост многих бактерий, имеющих клеочную стенку. Антибиотик используют в концентрации 194 ед./мл, добавляя его, например, к таким средам, как агар Е (разд. 8.5.17).
8.2.14. Ингибирование пенициллином для получения культур Вогг)е(е)(а рег!изз(з Полученные с помощью тампонов пробы из носоглотки суспендиру|от в бульоне и затем рассевают в чашки с агаром Борде — Жангу (равд. 8,5.! 1), содержащим пенициллин (0,5 ед(мл). Пенициллин способствует подавлению роста обычно содержащихся в таких пробах микроорганизмов, но не мешает В, рег(пзз1з образовывать (в течение 4 дней) характерные жемчужно-серые (типа кртутной каплиц) колонии. 8.2.15.
Набор антибиотиков для получения культур Сатру1ОЬас1ег ге|из 168, 691 Добавление бацитрацина (2 ед./мл) и новобиоцина (2 мкг|мл) к среде с агаром для бруцелл (равд. 8.5.14) позволяет выделять С. Гейм из испражнений и кишечного содержимого крупного рогатого скота, овец, свиней и птиц. Этот метод можно использовать вместе с методом фильтрации, описанным ранее для получения накопительных культур С.
)егиэ (разд. 8.1.16). 301 ЧАСТЬ 11. РОСТ 8.2.16. Набор антибиотиков для получения культур !т'е1ззег(ае Добавление к агару Тэйера — Мартина (разд, 8.5.52) ванкомицина, колистипа и нистатина позволяет выделить Хе1зэег1а те1117гр71йз из слизи носоглотки илн !у.йопогг!1оеае из отделяемого уретры и шейки матки, так как эти антибиотики способствуют подавлению роста остальной микрофлоры. 8.2.17. Обработка формальдегидом для получения культур 6аНопе1(а )етгийтеа [54! Микроаэрофильный хемолитотроф 6. 1еггийтеа встречается в холодных железистых водах, где он образует характерные изогнутые стебельки, покрытые окисью железа. В прямоугольную молочную бутылочку с завинчивающейся крышкой емкостью 150 мл, содержащую 10 мл агара с сульфидом железа и 100 мл жидкой среды, например модифицированной среды Вольфа (разд.
8.5.34), вносят 0,5 мл формалина (40%-ный раствор). Пробы, содержащие 6аИопе!(а из природных источников, центрифугируют 3 мин при 3000 д. 1 — 5 мл осадка вносят в сосуд со средой и инкубируют 1 — 2 дня при 25 "С. Формалин убивает сопутствующие бактерии, но не влияет на рост 6а61опе11а. 1 мл обработанной формалином культуры переносят в сосуд со свежей средой, но без формалина и инкубируют при 25'С, пересевая каждые 2 — 3 нед.
Выделяемые бактерии образуют пушистые участки на поверхности агара, содержащего сульфид железа. Пробы из этих участков используют для получения субкультур, Чистоту культуры проверяют с помощью микроскопии и п!Тем ее высева на другие среды, на которых 6аИопе((а не растет. 8.2.18. Разбавленная среда для получения культур каулобактеров 157! Каулобактеры представляют собой стебельковые бактерии, способные расти на средах с таким малым содержанием питательных веществ, которые не обеспечивают рост большинства других микроорганизмов. Про- К ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПНТЕЛЪНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЪТУР бы воды из прудов, ручьев, озер или даже водопроводной воды вносят в колбы или бутыли и добавляют к ним 0,01% пептона. Культуральные сосуды неплотно закрывают бумагой или алюминиевой фольгой и инкубируют при 20 — 25'С.
Ежедневно с помощью фазовоконтрастной микроскопии рассматривают поверхностную пленку. После появления (обычно на 4-й день) стебельковых бактерий (1 на 10 — 20 клеток) делают посев из поверхностной пленки в чашки с агаровой средой, приготовленной на водопроводной воде с 0,05% пептона, и затем никубируют их при 30 'С. В условиях низкого содержания пептона обеспечивается рост мелких колоний каулобактеров, но ингибируется рост других бактерий. Примерно через 4 дня (или более) исследованные с помощью препаровальной лупы кусочки среды с микроколониями каулобактера переносят в чашки со средой, содержащей 0,2% пептона, 0,1% дрожжевого экстракта, 0,02% МНБО~ 7НУО и 1% агара. После двухдневной инкубации готовят на стеклах влажные препараты каулобактеров.
Отдельные колонии пересевают с агара в чашки со свежей средой. В случае морских каулобактеров к пробам морской воды добавляют 0,01 % пептона и инкубируют их около 7 дней при 13 'С. Когда с помощью микроскопа обнаруживают достаточно большое число стебельковых бактерий, делают пересев из поверхностной пленки в чашки с агаром, приготовленным на морской воде с 0,05% пептона, и инкубируют их при 25'С. Часть выросших микроколоний переносят в чашки со свежей средой и очищают их путем пересева. 8.2.19. Разбавленная среда для получения культур водных спирилл [ВЗ) При росте в разбавленных средах азробные хемоге. теротрофные спириллы (родов Аг)иазр7гйит и Осеапозр(гИилг) часто успешно конкурируют с другими бактериями за необходимые питательные вещества. Для выделения спирилл из пресных вод к пробам воды (например„из стоячих водоемов) добавляют 1% пептона или дрожжевого автолизата и ннкубируют их при комнатной температуре около 7 дней или до появления зна- ЧЛСТЬ 11 РОСТ чительного количества спирилл.
Часть исходной культуры добавляют к равному объему воды из того же водоема и смесь стерилизуют автоклавированием. В эту смесь вносят пробу из нестерилизованной порции исходной культуры. После инкубации и появления колоний спирилл часть вторичной культуры разводят водой из того же источника, смесь стерилизуют и инокулируют ее культурой из нестерилизованной порции, Продолжают такое разведение питательных веществ в среде до тех пор, пока в культуре не будут преобладать спириллы.
Отдельные колонии спирилл получают путем посева культур в чашки с агаром МР85 (равд. 8.5.35). Другой подход к выделению спирилл основан на ис. пользовании низкого содержания в среде источников азота 183). Прн его применении к пробам воды добавляют малат или лактат кальция (1%) и инкубируют их при комнатной температуре около 1 нед.
Затем производят серию пересевов в стерильную воду, содержащую 1% источника азота, н снова инкубируют смесь, Процедуру пересева повторяют 3 — 4 раза до тех пор, пока в культуре не будут преобладать спнриллы. Важно не добавлять в среду такие источники азота, как ХН1С1, чтобы не допустить преимущественного роста сопутствующих бактерий, В случае морских спирилл пробы морской воды смешивают с равными объемами основной среды Гизбергера (разд.
8.5.19), содержащей 1% лактата кальция [831. После инкубации отбирают часть культуры и смешивают ее с равным объемом среды Гизбергера, содержащей лактат, но лишенной ХН,С1. Стерилизуют эту смесь автоклавированнем, вносят в нее нестерильную исходную культуру и инкубируют Истощение среды по азоту проводят до тех пор, пока в культуре не будут преобладать спириллы. Отдельные колонии получают путем посева на агар МР55 (равд. 8.5.35). Для получения накопительных культур спирилл используется также проточное (непрерывное) культивирование, при котором обеспечивается низкий уровень питательных веществ, Яннах 134) показал, что в условиях хемостата скорость роста морских спирнлл выше скорости роста чсевдомонад в смеси этих бактерий, если скорость разведения снижается до такой величины, К ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР при которой содержание лимитирующего источника углерода и энергии (лактата) становится ниже 10 мг/л.
В других экспериментах скорость роста спирилл превышала скорость роста Езс/гег/сл/а со/1, если концентрация лактата падала ниже 5 мг/л [35], В подобных экспериментах с пресноводными спириллами и псевдомоиадами Матин и Велдкамп [49] обнаружили, что при концентрации лактата ниже 0,09 мг/л псевдомонады исчезают из хемостата, так как они не растут. Эффективное использование спириллаии лактата из среды может быть связано с более низким Км и более высокой 1'«а«их транспортной системы для данного субстрата по сравнению с другими микроорганизмами, а также с более высоким отношением у клеток этих бактерий поверхности к объему [49]. Оказалось, что в условиях гслодания спириллы выживают лучше [48].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
