Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 58
Текст из файла (страница 58)
Одним из недостатков этого метода является то, что в чистой культуре могут содержаться цианобактерии, у которых в результате ультрафиолетового облучения возникли мутации, 8,1.22. Ультразвуковая обработка при получении культур Брогосу~орйада тухососсоп1ез Накопительные культуры образующей микроцисты и целлюлолитической бактерии О. тухососсОЫез можно получить, исходя из наличия в жизненном цикле этого организма форм, устойчивых к ультразвуку (! еаббе1- 1ег, Вас1ег!о!. Ргос., р. 42, !963). !00 мл среды для 5ро- 3. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЬТУР госу1орйайа (разд.
8.5.47) помещают в 500-миллилнтровую колбу Эрленмейера и вносят в нее примерно 0,1 г почвы, ила или растительного материала. После инкубацни в течение 7 — !О дней при 30'С с периодическим перемешиванием отбирают 5 мл культуры, обрабатывают ее ультразвуком в течение !5 — 30 с и затем высевают в другую колбу с такой же средой. Через 5— 7 дней среда приобретает характерный желтый оттенок.
С помощью фазово-контрастной микроскопии находят микроцисты и вегетативные клетки на волокнах целлюлозы и вокруг них. Часть этой культуры вновь обрабатывают ультразвуком и затем дея получения отдельных колоний используют метод посева разливом в чашки, как описано в равд. 8.2.25. 8 !.23. Использование антисывороточной агглютинации при получении культур бактерий Использование антисывороткн может обогатить минорную фракцию в популяции, состоящей из двух видов микроорганизмов. При исследовании смешанной культуры, в которой присутствуют два вида морской спнриллы — крупные и мелкие, Линн и Криг !451 обнаружили, что мелких спирнлл значительно больше.
Это делало невозможным получение отдельных колоний крупных спирнлл методом посева в чашки. Более того, для этих целей не подходил ни один из многочисленных методов селекции. Для получения накопительных культур крупной спнриллы авторы выделили мелкую спириллу и использовали ее для иммунизации кролика. Когда полученную антисыворотку добавили к смешанной культуре, мелкие спириллы агглютиннровали н осели на дно пробирки. Для получения отдельных колоний методом посева в чашки использовали надосадочную жидкость, содержащую теперь много крупных спнрилл. 8.2. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ 8.2.!. Шелочные условия инкубации при получении культур Мусойас1ег(пт 1ибегси1оз1е [201 В центрифужную стерильную пробирку (емкостью 50 мл) с завинчивающейся крышкой, содержащую !О мл 29б ЧАСТЬ н.
Рост раствора И-ацетил-1-цистеина в НаОН (разд. 8.5.36), добавляют 10 мл исследуемой мокроты. Крышку завинчивают, хорошо перемешивают содержимое в миксере Уог!сх в течение 5 — 20 с н оставляют пробирку на !5 мин при комнатной температуре. Ы-ацстил-!.-цистеин является муколнтическим веществом, превращающим вязкую мокроту в жидкую, водянистую массу. Гидроксид натрия разрушает многие примеси, присутствующие в мокроте, тогда как клетки М, 1пЬегси1ози относитсльно устойчивы к воздействию щелочи. Для нейтрализации гидроксида натрия в пробирку добавляют стерильный 0,067 М фосфатный буфер, не доливая до края 1,3 см, а затем цептрнфугнруют !5 мин при 1800— 2400 и, чтобы сконцентрировать микобактерин, и удаляют надосадочную жидкость.
К осадку добавляют 1 мл стерильного 0,2'/е-ного бычьего сывороточного альбумина и осторожно перемешивают, Эту суспензию используют для ннокуляцни соответствующих культуральных сред (равд. 8.5,26). 8.2.2, Щелочные условия инкубации для получения культур вибрионов !37) Для получения накопительных культур У(Ьг!о сйо1егае и У. рагайаето1у1(сиз клинический материал (жидкий стул или соскобы из прямой кишки) сеют легким штрихом иа поверхность неселективной агаровой среды, например питательного агара (равд. 20.3.25), и густо рассевают по селективной среде типа агара ТСВ5 (равд.
8.5.50). Материал, полученный из мазков жидкого кала, инокулнруют также в питательный бульон (! Р1, пептона, рН 8,4 — 8,5). В случае выделения У. рагайаето1у11снз к этому пептонному бульону добавляют 37, ХаС!. При высоких значениях рН агара ТСВ5 и питательного бульона рост большинства посторонних бактерий подавляется, В случае У, сйо(егае инкубация в бульоне продолжается от 6 до 8 ч при 35'С, после чего делают пересев штрихом на неселектнвную и селективную агаровые среды, Для У. рагайаето(у!1сиз инкубация в бульоне продолжается ночь, после чего де. лают пересев на агар ТСВ5. Колонии У. сйо1егае в чашках имеют желтый цвет (сбраживают сахарову) и 296 а получение нхкопителъных и чистых культуР оксидазоположительны, Колонии )г. рагайаето!ргСсиу имеют голубовато-зеленый цвет и также окспдазопозо жительны. 8.2.3.
Кислые условия иикубации для получения культур лактобацилл 146'( Для выделения лактобацилл нз сыров типа Чеддер делают посев штрихом нз разведений на модифицированную среду Роговы (раза. 8.5.33). Эта среда за счет ацетатной буферной системы имеет рН 5,35. При этих значениях рН такие лактобацнллы, как й.
сазе! и 7,. р!ап!агит, способны образовывать колонии, тогда как обычная молочнокислая бактерия 5!гер!Ососсиз !асйа не растет. 8.2.4. Кислые условия инкубации для получения культур ТЬ(ОЬас(!!из гй!Оох!с!апз (781 Пробы почвы, ила или иоды (лучший источник— морской ил) вносят в среду для Т. (Ь!Оох(!апз (раза. 8.5.53). После 3 — 4 дней ннкубации рН должен снизиться до 2,0, прн котором растут преимущественно этн кнслотоустойчивые микроорганизмы. Очистку культур производят путем посева штрихом на твердую среду.
8.2.5. Ингибирование теллуритом для получения культур коринебактерий и некоторых стрептококков В соответствующих концентрациях теллурит калия подавляет рост грамотрицательных бактерий и боль. шннства грамположительных бактерий. Для селекции таких корииебактерий как С. йрйгьеггае, к кроняному агару с цистпном добавляют калиевую соль теллурита в концентрации 0,03758(8 (раза. 8.5.16). В результате восстановления теллурита колонии коринебактернй при обретают серый нли чепный цвет. Для селекции некоторых стрептококков (5.
и!!!з, 5. Уа((иагсиа и энтерококков) используют калиевую соль теллурита в концентрации 0,0018(8, которую добавляют к специальной среде с агаром (разд. 8.5.3!). 5. Либз образуют очень мелкие синие колонии, Я, хайпаНиз — более крупные синие ко- ЧЛСТЬ !1.
РОСТ лопни типа «приклеенной капли», а энтерококки — небольшие черно-синие колонии. 8.2.6. Ингибирование таллием для получения культур микоплазм и энтерококков 110, 381 Для выделения микоплазм из дыхательных путей к Е-агару (разд. 8.5.17) и Е-бульону (разд. 8.5,18) добавляют ацетат таллия в концентрации 0,032% . Экстракты проб тампоном переносят в жидкую среду (2 мл), содержащую соевую муку и гидролизат казеина (разд. 8.5.45) и 0,5% бычьего сывороточного альбумина, 0,1 мл суспензии ннокулируют в двухфазную среду Е (разд. 8.5.!7), а также в чашки с агаром, приготовленным на среде Е. Культуру выращивают в аэробных условиях при 37'С, поместив чашки в закрытые контейнеры.
В течение 30 дней с помощью препаровальной лупы (Х20 — 50) следят за появлением мелких колониИ (10— 100 мкм в диаметре), напоминающих яичницу-глазунью. В случае двухфазной культуры наблюдают в микроскоп через боковую стенку пробирки, стараясь обнаружить так называемые «сферулы», т. е.
колонии в жидкой среде. Контролируют также подкнсленне среды, сопровождающееся пожелтением индикаторного красителя фенолового красного. Для получения отдельных колоний содержимое двухфазной среды ннокулнруют в чашки с агаром Е. Энтерококки выделяют на агаровой среде (разд. 8.5.51) с добавлением ацетата таллия (О,! %). 8.2.7. Ингибирование селенитом для получения культур салмонелл К Р-бульону (разд. 8.5.44) добавляют кислый селенит натрия в концентрации 0,4%. В этих условиях временно прекращается рост колиподобных бактерий, но салмонеллы продолжают расти.
Пробы из кала рассевают штрихом на селектнвные и неселективные агаровые среды, а также вносят большое количество пробы в Р- бульон (1 г или 1 мл на 8 — 10 мл бульона). Инкубацию проводят при 35 †37 'С в течение 12 в 16 ч, а затем делают пересев в чашки с агаром. В. ПОЛУЧЕНИЕ НАКОПИТЕЛЬНЫХ И ЧИСТЫХ КУЛЪТУР 8.2.8. Ингибирование фенилэтанолом для получения культур стрептококков и стафилококков При добавлении в агаровую среду (равд. 8.5.40) фенилэтанола в концентрации 0,25% подавляется рост грамотрицательных бактерий, главным образом РТО1еиз, тогда как на грамположительные кокки фенилэтанол не действует.
Эга среда пригодна, например, для выделения из проб кала коагулазоположительных стафилококков. 8.2.9. Ингибирование трифенилметановым красителем для получения культур грамотрицательных бактерий и микобактерий Обычно для подавления роста грамположительных бактерий достаточно добавления трифеннлметановых красителей (кристаллический фиолетовый, основной фуксин, бриллиантовая зелень и малахитовый зеленый) в более низкой концентрации, чем для подавления роста грамотрицательных. Например, при концентрации в среде 1:4 000000 малахитовый зеленый подавляет рост Вас(1(из зибп(1з, а в концентрации 1: 1000000 — рост стафилококков.
Однако для подавления роста ЕзсйегкЫа соИ или Яа!толеНа 1урй( необходима концентрация этого красителя — ! . 30000 — 1: 40000 1211. Бриллиантовая зелень используется для выявления колиподобных бактерий 1в составе бульона с желчью и лактозой (разд. 8.5.13)1 и в нескольких селективных средах для ЕН1егоЬас1емасеае, таких, как агар для салмопелл и шигелл (разд. 8.5.43) и агар с бриллиантовой зеленью (равд. 8.5.12).
Крис|аллический фиолетовый также используют для селекции Еп1егоЬас1еНасеае, например в составе агара с желчью и фиолетовым красным (равд. 8.5.56) и агара Мак-Конки (равд. 8.5.27). Мико- бактерии очень устойчивы к этим красителям. Поэтому малахитовый зеленый часто включают в среды, используемые для выделения й4усобасГепит 1ибегси1оз(з (например, в среду Левенштейна — Иенсена; равд.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
