Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 55
Текст из файла (страница 55)
Получение накопительных культур и выделение мутантных штаммов рассматриваются в равд. 13.4 — 13.6. 8.1. БИОФИЗИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ 8.!.1. Инкубация при низкой температуре для получения культур психрофилов и психротрофов [521 Поскольку низкая температура способствует задержке роста многих бактерий, но не влияет на рост психрофилов и психротрофов, прежде чем начать выделение бактерий, культуры инкубируют при температуре 0— 5 *С, Так, Ину 1311 удалось изолировать психрофильные бактерии из почвы Антарктиды, внеся разведенную суспензию бактерий в чашки с агаром, содержащим глюкозу, дрожжевой экстракт н пептон. Чашки инкубировали при температуре ниже 5'С в течение 14— 24 дней.
Таким методом были получены девять штаммов бактерий с оптимальной температурой для роста около 20'С, т. е. это были облигатпые психрофнлы 1321, 8.1.2. Инкубация при низкой температуре для получения культур 1.Мепа топосу1ойелез 1391 Клетки 1лз!ела с трудом поддаются выделению из клинического материала, содержащего большое количе- ЧАСТЬ !!. РОСТ ство других бактерий (это материал из шейки матки, влагалища, мекония, фекалиев, носоглотки или тканей). Весьма полезной для получения накопительной культуры этой бактерии оказалась предлагаемая ниже процедура.
Мазки помещают в пробирки с 5 мл бульона для листерий (равд. 8.2.25) и закрывают их завинчивающимися крышками. В случае проб из фекалий и тканей готовят 10'1!-ную (объем1объем) суспензию в бульоне для листерий. Бульон можно хранить при 4'"С до 3 мес. Поэтому целесообразно проводить выделение в первые 4 нед с недельными интервалами и затем делать месячный перерыв. При хранении на холоду бульон обогащается 7ьа1ег!а. Это обусловлено лучшим по сравнению с другими бактериями выживанием листерий при 4'С [841', их способностью размножаться при 4'С [671 и выходом микроорганизма из клеток ткани [15). После такого обога!цения на холоду 0,2 мл суспензии переносят в пробирку с 5 мл бульона для листерий, содержа. щего КСХ5 (до стерилизации бульона к нему добавляют 3,75а!а тиоцианата калия), и инкубируют 48 ч при 25'С. Для получения отдельных колоний петлю вводят непосредственно под поверхность среды и переносят ее на поверхность чашек с агаром Мак-Брайда для листерий (равд.
8.5.29). 8.1.3. Инкубация при высокой температуре для получения культур термофилов [61 В отличие от термофилов рост остальных микроорганизмов при высокой температуре подавляется. Поэтому для обогащения термофиламн смешанную культуру инкубируют при достаточно высокой температуре. Например, в случае молочнокислых термофилов серийные разведения молока пересевают в чашки со стандартной агаровой средой (равд. 8.5.48) и инкубируют их при 55'С.
8.1.4. Инкубация при высокой температуре для получения культур Тлеггпиз а!)иайсиз [11) Т. адиа1!сиз имеет оптимальную температуру роста 70 — 72 'С; эта бактерия не растет при температуре ниже 40'С и выше 79'С. Ее можно выделить из горячей 260 3. получение ИАкопителъных и чистых культуР водопроводной воды, микробных матов, из горячих источников или рек, загрязненных горячими сточными водами. С этой целью исследуемые пробы добавляют к 1О мл основной солевой среды (равд. 8.5.7), содержащей 0,17л панкрсатического гидролизата казеина и 0,1% дрожжевого экстракта, Инкубируют без встряхивавия при 70 — 75'С и следят за изменением мутности в течение 1 — 2 дней.
Если мутность увеличивается, микробная масса обычно приобретает желтый или оранжевый цвет. Суспензию исследуют под микроскопом с целью обнаружения коротких и длинных нитей или сферопластов. Чистую культуру выделяют путем посева на чашки с той же средой, содержащей 3% агара. На чашках ищут компактные разрастающиеся желтые колонии, состоящие из нитевидных микроорганизмов. 8.1.6.
Нагревание для получения культур термоустойчивых микроорганизмов 161 Пробы сырого молока пастеризуют нагреванием до 62,8'С и выдерживают их при этой температуре в течение 30 мин, затем их охлаждают, разводят, переносят на стандартную агаровую среду (равд. 8.5.48) и инкубируют чашки при 32'С. 8.1.6. Нагреваиие для получения культур мезофильных спорообразующих бактерий Пробы воды или взвеси почвы нагревают до 80'С, выдерживают 10 мин и затем наносят штрихом ва поверхность твердой среды в чашках.
Для штаммов ВасИиэ обычно используют питательный агар; штаммы С1озгг1йит рассевают по стенке вращающейся пробирки с восстановленным мясным агаром (равд. 20.3.10) или на поверхности свежеприготсвленной агаровой среды и инкубируют в анаэростате. Если в пробах есть небольшое количество спор, то их число можно увеличить, внеся пробы в подходящую для споруляции среду и инкубируя культуру в течение 2 — 21 дней перед тепловой обработкой. Для большинства видов ВасИЕЕ средой, на которой происходит образование спор, является питательный бульон (разд. чьсть и.
Рост 20.3.25), содержащий 0,5% дрожжевого экстракта, 7 10 — 4 М СаС1,, 1 10-' М МпС1! и 5 10 — ' М МпС!ь Для большинства видов С1озггЫ!ип! ие существует оптимальной среды для образования спор, однако известно, что их споруляцию можно вызвать инкубацией в мясной среде (равд. 20.3.10) как в присутствии глюкозы, так и в ее отсутствие )27). Еще один способ получения накопительных культур заключается в добавлении проб, содержащих споры, к соответствующей среде, которую затем прогревают 10 мин при 80'С н инкубнруют около 1 сут. Выросшую культуру высевают на твердые среды, Для видов Васй1из наиболее подходящей средой является питательный бульон с 0,5ь7ь дрожжевого экстракта, а для С1оз1г!21!и ит — восстановленный крахмальный бульон 1бульон Р!'+1% растворимого крахмала; разд.
20.3.28). Для некоторых спорообразующих бактерий иногда приходится изменять режим тепловой обработки, поскольку эндоспоры разных штаммов могут различаться по термоустойчивости. Поэтому, если не удается получить удовлетворительных результатов при стандартной температуре 80 'С, ее следует снизить до 75 или 70 'С. 8.1.7. Нагреваиие для получения культур термофильных спорообразующих бактерий 16) Термофильные спорообразующие бактерии встречаются в различных сладких веществах, используемых при изготовлении мороженого.
Обычно готовят 20$-ную пробу исследуемого объекта (свекловичный или тростниковый сахар, лактоза, церелоза, искусственный, кукурузный или кленовый сироп, кукурузный или жидкий сахар, мед), выдерживают ее 5 мин при 100'С и затем доводят стерильной водой до конечной концентрации 13,3 О!О, Получение культур термофильных азробных слабоацидофильных микроорганизмов 2 мл прокипяченного раствора сахара наносят на поверхность глюкозо-триптонового агара в чашках Петри (равд. 8.5.20) и инкубируют 48 ч во влажной камере к полячвние накопительных и чистых кяльтл прн 55 "С. Характерные колонии круглой формы (2— 5 мм в диаметре) с темной центральной частью, окруженные желтым ореолом„растут на поверхности агара. Колонии, растущие под поверхностью агара, более компактны и имеют размеры булавочной головки, Их следует пересеять на глюкозо-триптоновый агар.
Получение культур термофильных анаэробов, образующих сероводород Пробы прокипяченного раствора сахара вносят в глубокие пробирки, содержащие сульфитный агар (1% триптона или триптиказы, 0,1 % сульфита натрия и 2% агара). Перед инокуляцией агар в пробирках должен быть расплавлен и охлажден до 55 С. Содержимому пробирок даюг застыть и затем инкубируют при 55'С в течение 72 ч.
Бактерии, выделяющие сероводород, образуют в среде темные сферические зоны, 8.1.8. Нагревание для получения культур ВасИия 'ГаяНйояия 141] 0,2 г почвы добавляют к 50 мл среды, содержащей 1% мочевой кислоты и 0,1% КзНР04 в дистиллированной воде. Пробу инкубнруют с встряхиванием в течение 48 ч, нагревают до 80'С и выдерживают 15 мин при этой температуре, а затем переносят в чашку с агаром, приготовленным на этой же среде. В этом методе учитывается не только термоустойчивость В.
Гаяйг)1ояия, но также и то, что данная бактерия способна использовать источники углерода н энергии, недоступные другим микроорганизмам. 8.1.9. Нагревание для получения культур Васйия рая1еигй 182] Споры разлагаюшей мочевину бактерии В. рая1еигН обладают высокой термоустойчивостью и способны расти на средах с таким значением рН, при котором большинство других видов не растет. Последнее свойство используется в описываемом ниже методе. Для роста В.
рая1еигй значение рН должно быть выше 8. После чАсть н. Рост нагревания суспензии почвы (для сохранения исключительно спор) пробы инкубируют при 30'С в щелочной накопительной среде (1% дрожжевого экстракта и 5% мочевины), простерилизованной фильтрованием. После завершения роста культуру пересевают на твердую щелочную среду Уилли и Стокса (разд.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
