Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 51
Текст из файла (страница 51)
по 200 мг ООнаолейцнна и РС валина, 600 мг Е глутамнна (стерилизуют отдельно фильтрованием), по Продолжение табл. 7.!3 На 1 л среды добавляют по 100 мг глицива, (..аленина, ООсерниа, Отреонина, Олейцина, Онзолейцима, О(.-валина, Е аспарагйнавой кислоты, Е аспарагмна, С-лизина„ Е.гнстидина, С.аргниина, (-пролнна, С оксипролина, Рфенвлалаинна Е тнрознна, РЕ метнаннна, (,-цветение НС1, а также 40 мг Е трнптофана н 500 мг ((глутамииовоа кислоты, Гидролнзат казвина (4 г(л) манена заменить смесью амино- инслат л На 1 л среды добавляют па 0,1 г О-аистина и Е трнпто- фана Добавляют (мг)л) С цнстина (50), РС нзалелцнна (600), 1.-глутамина (100), 1.-асаарагнна (200), глицнна (100), О(.
аланина (200), ОО феннлзланнна (400), \.-тироаинв (60), Р гистидина НС! (150) 01. леццниа (600), 1. аргииина (200), РЬ метианина (200) и РЕ треанина (400) ЬЬ добапчяют (мг)л) 1. аргинииа (70) Е аспарагиноэов кислоты (60), ь цнстенна (!) е глутамнновой кислоты (75), 1 глутамипа 000) ОЕ наолевцнна (40) Ь метиоинна (15), РС фенилэланнна (501 и РЕ триптофана (20) се Гндралазат казеина можно заменить ачииакнслотачи Хотя на среде с амниакислотамв можно производить сериа ныв пересев «)льтур интенсивность роста некаторыч шгэч мов при этом есе и е значительи ивж че.
ри ут тэна гилролазата казвина Добавляют к среде адсннн гу*инн, трэцил н ксене~я бл до конечной концентрации 0 5 мгиоо л~л ее На 1 л среды добавлиют по 20 мг сериокн лаго здсии на, гуавнна 1!С), урацила, ксантнна и тнчнва На 1 л среды добавляют па 100 мг адсвозниа, гуаиозп на н цвтнлииа На 1 л среды добавляют 1 мг алеиозннтрнфасфата, по 260 мг Вк-нетнонина, Ь-гнстндина НС1, Б.аргнннна НС! и Вк-трнптофана. 5 Добавляют смесь аминокислот, исходя вз процентного соотношения аминокислот в казенне (761. Добавляют (г/л): ОБ.аленина (4); ВЕ-аспарагяновок кислоты (1,6); Е-глутаннновой кислоты (2); Ь.аргиннна.НС] н Е.лизина НС] (по 0.8); Б-гнстидина (0,4); ОБ-ваолейцяна (0,8); Е лейцвна (0,4); ОЕ-метионнна и ОБ-фенилалаинна (по 0,8); (.-пролина (0,4); ВБ.треонииа (0,8); Е-тнрознна (0,4); ОЕ-валина в ОБ-триптофаиа (по 0,8); ].-цвстииа (0,4): ВЕ.сервиз (0,8) и глнцниа (0,4).
Вместо смеси аминокислот можно использовать кислотный гвдролнзат казвина. 102)-нып раствор каз минов х «н лот обраба ызаю ктнв ро аннин углем и добавяяют к нему следующие аминокислоты (мг/л): Е-трнптофан (2000); Б-феннлаланнн н Ь-тирознн (по 400]: 1.-пролив н ОЕ-гнстидин НС) (па 200) н Б-цнсгенн (1000). Для конечной среды используют концентрацию 8 мт/!00 мл.
М 'ю На 1 л среды добавляют 0,7 г Бщистенна, 2 г ОЕ-валина, 0,6 г Б-нетноннна, 0,5 г Ь-тнрозина, 0,75 г Е-пролива, 5 г )(аспарагнновай кислоты, 7,5 г Ь-глутамвиовой кислоты в 2,3 мг В-аленина. в На 1 л среды добавляют 1,5 г Ь-глутаминовод кислоты н 1 г ].-аргннниа. ы , На 1 л среди добавляют по 0,5 г Б-глутаминовой кислоты, Е-аргнннна, Б-пролива н Е-гистндина. Рост культур стимулируется смесью следующих амино.кислот (каждая в концентрации 0,7 г/л): Б.глутамвноаая кислота, (..аспарагнн, Б)Е-а-алании, Е-глутамнн, Б-гистиднн ,н ОЕ.зспзрагнновая кислота.
Раствор фракцим Н бычьего альбумина после стерилизации фильтрованием инактивируют нагреванием да 58 'С н затем добавляют н стерильная среде до конечной концентрации 0,0)зб. 0,3 мг гуанина и гипоксаитииа и по б мг РНК и ДНК. вв Добавляют (мкг/л): рибофлавина (1000); биотииа (1001: тиамява.НС! (1000) и ОЕ-ливневой кислоты (1). В Добавляют (мкг/л) тиамина (80); нирндоксаля (40): пиридоксамииа (4); пнрвдоксина (4): л-аминобензойной кислоты (40); фолиевой кислоты (4); холина (80); иназнта (2000); биотина (0,1); витамина Вм (0,4] и паитотената кальция (80). Добавляют (мкг/л): тиамнна НС! (1000); «-амииобензойной кислоты (500); никотиновой кислоты (100))! холннхлорида и иназвта (по 10 600); пиридокснна (500); пирндоксаля.НС1 н павтатеиата кальция !по 1000); биотина (20); фолневой кислоты н витамина Вм (по 10) и рнбофлавина (500).
Витамины ие являются необходимымв для всех аидов, кроме одного штамма, который в отсутствие аминапнслот нуждается в никотиновой кислоте. На 1 л среды добавляют 2,3 мг никотиновой кислоты. На 1 л срекы добавляют 1 мкг витамина В~г, 0,5 мг фолиевой кислоты, по 2 мг л-амииобензокиод кислоты, тнамнна НС! и рвбофлавина, по 1 мг никотиновой кислоты, ннкотннанида, пнрвдоксаля НС] н пнрндоксамина.2НС), по 2 мг павтотената кальция и инозита и по 0,1 мг ОЕ-липее.
вой кислоты и бнотнна. Бнотнн, инознт, ннкотиновая кислота, пнрндоксаль и рибофлавнн необходимы длн роста бактерий. На 1 л среды добавляют 1 мкг бнотнна н по 1 мг пантотената кальция, тнамина н л-аминобензопноб кислоты. Добавляют (мг/л). никотнновоб кислоты, рнбофлавнна, пнрндаксина НС), пиридоксаля. НС! н тиамнна (по 2 5); фолнновой кислоты (1,01. Добавляют (мг/л); холина (0,5); биотина, фолневоб кнслотм, тнамнна н пантотената кальция (по 0,01); пнрндокснна (0,05).
и С ьс Е Е Л и! Х ж ф Х ы С Я ЧАСТЬ 11. РОСТ 7.2.2. Комплексные и полусинтетнческие среды В табл. 7.2 — 7.7 приведен состав комплексных (кодовая буква А) и полусинтетических (кодовая буква В) сред для бактерий, перечисленных в табл. 7.1. Имеющиеся в продаже готовые среды помечены звездочкой. Для получения твердой среды к бульонной среде добавляют 1,5 — 2% агара, Дополнительные компоненты сред и детальные пояснения даны в сносках, обозначенных строчными латинскими буквами.
7.2.3. Синтетические среды В табл. 7.8 — 7.13 приведен состав синтетических сред (кодовая буква С) и несколько полусинтетических сред (кодовая буква В) для бактерий, перечисленных в табл. 7.1. Дополнительные компоненты сред и детальные пояснения даны в сносках, обозначенных строчными латинскими буквами.
7.3. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ О! !РЕДЕЛЕНИЕ ВЕЩЕСТВ ПО РОСТУ КУЛЬТУР Бактерии широко используются для количественного анализа большого числа веществ, которые способствуют их росту илн ингибируют его: витаминов, аминокислот, микроэлементов, пиримндиновых оснований, полиаминов, дезокснрибонуклеозидов, дезоксирибонуклеотидов, лекарственных препаратов, антибиотиков и других химиотерапевтических агентов 170, 105а). Хотя инструментальные методы (например, анализ аминокислот с помощью амннокислотного анализатора) частично заменили некоторые из бактериологических методов, последние еще используются довольно часто. В некоторых случаях (например, при определении витамина В,) наблюдается различная чувствительность к разным формам витамина, поэтому такой анализ нелегко заменить другими методами До тех пор пока не удастся выдепить и охарактеризовать фактор роста, его влияние на рост соответствующего организма часто служит едннсгвенпым показателем при последующем выделении этого фактора из природного материала.
1. БИОХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ Бактериологические анализы в принципе основаны на линейной зависимости интенсивности (но не скорости) роста микроорганизмов при увеличении количества лимитирующего питательного вещества в ограниченном диапазоне. Разброс результатов при бактериологическом анализе обычно составляет ~ !0$, однако в тщательно контролируемых условиях он может уменьшаться до +ЗТА. В целом количественный анализ необходимого питательного вещества можно провести с более высокой степенью точности, чем количественный анализ стимулирующего фактора.
Для количественного анализа витаминов и аминокислот наиболее пригодны штаммы родов Ьас1ойасИиз, Ягер1ососсиз и Рет1ососсиз, поскольку для нх роста требуются сложные питательные смеси, т. е. в их ростовую среду необходимо добавлять большое число компонентов, Эти микроорганизмы можно использовать для количественного анализа нескольких витаминов и аминокислот. Например, метод анализа с использованием 311ер1ососсиз еда!паз АТСС 8042 !ранее известного как 7.еисопоз1ос а~езеп1егоЫез Р-60) позволяет определить все аминокислоты, кроме аланина 1216). Алании можно определить с помощью этой же среды, если к ней добавить фолиновую кислоту (см.
сноску о в табл. 7.12) и в качестве тест-бактерии использовать Р. сегеосз1ае 8081. Детали метода бактериологического анализа можно проиллюстрировать на примере работы Стила и др. 1216), в которой для определения аргинина используется 5, еди1пиз. 7.3.1. Аминокислоты (аргинин) Аргинин — одна из семнадцати аминокислот, определяемых с помощью 5. еда!паз. Для других аминокислот и витаминов приемы определения сходны, Ссылки на специфические методы, используемые для определения других факторов роста, даны в обзоре Гирарда и Снелла [70], Для изучения путей синтеза и распада витаминов и аминокислот успешно используют мутанты бактерий — ауксотрофы по одному или нескольким веществам, 261 ЧАСТЬ 11.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
