Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 47
Текст из файла (страница 47)
Смесь аминокйслот в виде «азамииовых кислот способствует более быстрому и иитенсив. ному росту культур. При замене глюкозы на сахарову, глицерин или сукцииат в качестве источника углерода, микроорганизм может использовать неорганические источники азота. о Необхадиммй для роста витамин Вп (кобаламнн) до. бавляют в концентрации 0,005 мг/л. Необходим биотнн Н5 мкг/л). л Необходим витамин В~з (0,005 мг/л): дл» некоторых штзммов нужен биотин (0,005 мг> н соляиокислый тиамии (0.1 мг/л>.
У некоторых штампов Зрйаегоц/из па/опт обнаружена потребность в биотиие (0,005 мг/л). Ни один из вмделеиных штаммов ие растет на среде без витаминов; для поддержания нлн стимуляции роста большинства штаммов необходимы бнотии, тиамии и витамин Вм. Готовит раствор, в 1 л которого содержатся следующие витамины: 2 мг биотииа, 2 мг фолиевой кислоты, !О мг солянокислого пиридоксина, 5 мг рибофлавина, 5 мг солянокислаго тиамина, 5 мг никотинамида, 5 мг паитотензта кальция, 0,1 мг витамина Ве и 0,1 мг я-амииабензайиой кислоты.
1О мл этого раствора, простери.тизоваииого авто. клавироваинем или ультрафильтрованием, добавляют на 1 л среды. аа Добавляют биотин (0,2 мкг/л). На 1 л стерильной среды добавляют 1 мг солянокислого тнаминз и 0,005 мг витамина Вп, причем каждый пз них стернлнзуют отдельно ультрафнльтроваиием. Таблица 7.9. Состав снитетических сред (С) 2!й 15 — 27 дли бактерий, перечисленных в табл. 7.1 Коыпоненты гаС 2аС 27Сс гаса !ас !7С 2ЕС ЫС 2оС гЗС 24С !ас 12С 20 1 — 3 !0 10 5 10 5,0 З,Ое 4,0 11,7 1,0 1,0 1,0 1,0 З,О 1,0 500 10 0,6 3,49 0,45 1,0 7,0 2,0 3,0 5 1,74 1,0 3,0 0,8 0,2 1,0 0,25 2,0 2,77 !О 0,01 16,9 О, 62 О, 005 0,5 0,2 0,09 0,5 0,2 5,0 0,01 0,1 0,2 10 10 5,0 Да' Да! 50 Дак 13,9 50 Да" Да! Да" 0,45 Дао Да! Дам Даа Дал Глюкоза" (г) Глицерин (г) ХНаС! (г) ХаХОз или КХОз (г) ХазНРОю2НзО (г) КзНРОа (г) КНзРОа (г) ХаС! (г) МпС!з.4НзО (мг) М83О 7Н О (г) СаС1з 2НзО (г) РеБОа 7НзО (мг) Микроэлементы Аминокислоты Кислотный гндролизат казенна (г) Количество !в еккняцех, укеззнных в колонке !! нв 1 л срелы Продолжение табл.
7.9 Количество (з единицах, указанных в колонке 1) на 1 л среды Компоненты 15С 26С 27С" ПС 19С 16С НС 22С 23С Дач Пурины н пиримидины Витамины Дат Даю Да" Дан Дат Твин 80 (мг) рН 6,00 7,2 7,0 7,2 6,8 7,0— — 7,2 5,5— — 9,0 6,9 6,6— — 7,4 6,8 7,2 — 6,8 — 7,5 7,0 н В качестве детокскнанта добавляют крнсталляческнй сывороточный альбумии (1%). ь На 1 л среды добавляют 45 мг К,90ь с В 670 мл теплой (45'С) дистиллированной воды растворяют указанные в таблице компоненты, а затем добавляют к иям !00 г лимонной кислоты Нто в 175 г ЫаНЫНзРОч 4Нзо.
Отдельно простерилизоваиную глюкозу добавляют с соблюдением правил асевтикн к стерильной среде непосредствен. ва перел посевом и затем разбавляют среду в 50 раз. Вели добавить к среде 6 мл хлороформа, то ее можно хранить в закрытых сосудах пря камнатяой температуре. и Для болыпннства сред отдельно простерилизоваивую автоклавированнем глюкозу добавляют с соблюдением правил асептики к стерильному раствору, содержащему другие компоненты. е Хорошо усванзаютса также другие углеводы, глицерин н лимонная кислота. лязуют фильтрованием и добавляют к стерильной среде ве.
ред ее искользованнем. На 1 л среды добавляют амннокяслоты, необходимые для оптимального роста: 1,2 мг О-впаянна, 0,77 мг Оаргнняиа НС), 0,1 мг В.-етениаиа, 3,9 мг (.-глутамйвовой кислоты, 0,77 мг ь-лизина НС! и 0,94 мг Оыметиоиниа. п Добавляют следующие аминокислоты (мг/л): треоннн (276); пролив (100); лейцнн (426); гистидин (126); глицин (176); аргяиин (160); глутамииавая кислота (200); валин (135) н тирознв (35). Первые шесть амииокнслот являются необ. ходнмымв, остальные стимулируют рост. о На 1 л среды добавляют: 1,4 г Оыалаиииа, 216 мг ОЬ.триптофаиа и по 60 мг О(..треоняиа, Олизнна. О(.-метяонииа, Оыгистндяна, Оь-фенилаланниа, Олейцвна, Оынзо.
лейцинз, О(.-валина н |-аргннниа. Рост стямулируется гидролнзатом казеина (0,5%] игн глутаминовай кислотой (0,1%). Микроэлементы (мкг)л): В (Н<ВО<) (5); Са (СаСО<) (100); Си (Си50< ОН О) (10); Ре (Ре50<(НН<)<50оОН<О! (1ОΠ— 500); ! (К1) (!); Мп (Мп50< Н<О) (1Π— 20); Мо (МоО<) (10)1 2п (2п50< 7Н<О) (50). Для фиксации иалекулярного азота необходимы следы молибдата (0,005 г На<МаО< 2Н<О иа 1 л).
л ВеЦег(псща !лиса малнбдат необходим для фиксации молекулярного азота (см. выше сноску 5), и его нельзя заменить ванадатам. Для некоторых штаммав, нуждающихся з Си и 2п, к среде добавляют 2п50< 7Н<0 (0,005 г)л) и Си50<.ОН<О (0,004 г)л). Са'+ добавляют в виде Са50, (0,2 г/л). На 1 л среды добавляют также 0,5 мг На,Ма0,.2Н,О.
Безвитамииный минеральный основной раствор Хатнера, 20 мл)л (см. сноску й в табл. 7.5). я Все виды Аеготалаз растут на минимальной среде, со. держащей смесь 1-аргинина, аспарагина, лейцина и метионпна. Для рос~а нужны аргииин, аспарагинавая кислота, цистеин, глутамииавая кислота, гнстиднн, лейцни, лизин, метионин, феиилалании, треонйн, трнптофан н валяя.
Серии и тнрозни оказывают стимулирующее действие, а алании, окснпролпн и глицин не влияют на рост. Все амияоквслоты ДОбаВЛЯЮт К СРЕДЕ В КОНЦЕНтРаЦИИ Олш! М. ПРОЛИН МОжЕт заменить глугамииозую кислоту. Глутамин (1,02 г)л) стерн- Для роста необходимы цитозвн нлн урацил в концентрации 10 мг)л. Аденнн (1О мг)л) оказывает стимулирующее действие.
Потребность в вятамявах не определеяа. Витамнкы добавляют в следующих концентрациях (на 1 л среяы)< 1 мг пантотената кальция, !О мг и-амниабеввойной кислоты, 10 мкг биотяиа, 50 мг холвна, 100 мкг фолиевай кислоты, 5 мг янознта, 1 мг яикотиновой кислоты, 5 мг ппрндоксаля, 5 мг пирядоксамина, 5 мг пяридокснна, 1 мг рнбофлавнна, 1 мг тнамина и 1.Ж г аскорбиновой квслоты. Добавляют апатии (1 мкг)л). 1 Добавляют някотиновую кислоту (О мг)л) и таамия.НС! (0,15 мг)л). Бнотин необходим для Вгисеца аеощиг, 55< СОз в воздухе достаточно для роста большинства штаммав В. ива<!из, и На ! л среды добавляют следующяе внтамвны< 0,01 мг бнотина, 1 мг никотиновой кислоты н 0,5 мг солянокйслого тнамина.
Добавляют биатин (0,5 мкг)л) и солянакислый тяамии (1ОО мкг)л1. ю На 1 л среды добавляют: !О мкг паптотената кальция, 1 мкг бнотина. 10 мкг никотинвмида, 1О мкг солянокнслого <намина н 20 мхг салянакислого ииридоксяна. Пантотеват. никатииамид и тизмин необходимы для роста, а бнатив в пяридаксин оказывают стимулирующее действие. Таблица 7.10. Состав синтетических сред (С) ей 28 — 40 дли бактерий, иеречислсниых в табл. 73 Канпаненты а!си З4СК ззс аасг васе 5,0 М 0,25 3,4 2,2 12,5 2,0 5,0 1,0 2,5 З,О 5,0 6.3 5,0" 6,0 1,0 0,9 4,0 З,О 0,5 0,4 1,3 2,25 0,6 0,2 о,! 0,65 2,7 0,35 8,7 1,56 О,!4 3,48 2,72 0,9 5,0 0,17 6,8 0,75 0,9 5,3 0,02 5,8 0,19 1,5 0,62 0,074 2,8 2,5 5,8 0,36 0,01 О, 006 0,1 Дад Даы 20 0,04 1,0 25 0,2 0,02 0,01 0,01 1,0 20 1,0 0,096 О, 002 2,0 Дае Да ее 7,6 0,1 0,02 0,02 10 Дал 1,6 0,04 0,41 0,37 4,0 20 !2,5 Дас Да» Да' Дат Дае Да» Дан д Да.ее 5,0кк Дааа даее Глюкозаы (г) Глицерин (г) Ацетат натрии (г) НН4С1 (г) На»НРОа 2НзО (г) К,НРО, (г) л КНзРОа (г) Трио-буфер (г) ХаС! (г) КС! (г) МнС1» ° 4НаО (мг) Мд504 7НаО (г) СаС1з 2НгО (г) РеЗО» 7Н»О (мг) Микроэлементы Аминокислоты Кислотный гидролизат казеина (г) Колнчество !в еднннцах, указанных в колонке !) на ! л среды 0,0! 6,05 0,05 0,05 4,2 0,238 0,001 5,0 Да' Ддьь Дай" Дад Дв 1! Да)»)» ди Дялп Дн'"ю даг! дааа Даля Дваэ Дазз 7,8- 6,7 7,0 7,5 6,8— — 6,9 7,4~ 7,0 ~0,! 6 8ли Пурнны и пиримндины Витамины Твин 80 (мл) рН 7.6 7,5 6,6 в 6,8 Да" 5 7,45 а После стернлиэацнн к среде добавляют, соблюдая пра.
вяла аселтякв, 500 мкг путресцява н 100 мкг стернлмзаваннога фнльтроааявем НАО. з 50 мвг гематяна н 1О мкг оленновой кислоты растворяют в 0.001 н. МаОН н автоклавнруют. Гематин можно заменять любым веществом, раэлагающнм Н»Оз. Гематнн не нужен лля роста бактерий в аваэробнмх услоаяях. В раствор добавляют 10 г молочной кнслоты (856»). Одна глюкоза по. ьо давляет рост бактерий в азробяых условнях.
во в сочетаннв ф с другим всточннком углерода, напрнмер с молочной квслатой влн сахарозой, она обесйечввает удовлетварнтельный рост. с На 1 л среды добавляют 4,4 г лактата натрня (707»). и Среду стерялнзуют фнльтрованнем. Добавленне гематвна н «ровн н ннкубацяя при поннженвом атмосферном дэвленнн необходимы в том случае, когда пользуются твердой средой. Добавляют 6,8 г яблочной кнслоты н с помощью ХаОН доводят рН среды до 5,6. Н На 1 л среды добавляют 1 мг гемвяа в летучне жнрные кнслоты до конечной канцеятрацив» 2,6 10-з М уксусной квслоты, 9.10-' М пропванавой каслоты, 4,5 1О-' М и-масляной кнслоты, 9 10-' М вэомасляяай кислоты, 9.!О-' М и-залернановон кислоты, 9 10-' М нзовалернановой кислоты в 9.10-' М ПП-метнлмапчяной кнслаты.
Перед использованием добавляют 4 г на»СО» н 0,25 г цястевяа.НС( (оба компо- пента раздельна стериллзуют фильтрованием). Культуры Вас!агап(ез гя»пабса1а янкубвруют в бескислорадной атмосфере, содержащей СО». 8 В качестве источника углерода в этой среде используется солянокяслый халяв (5 г)л). Другие источники углерода: лактат, малат н пнрузат. На 1 л среды добавляют 2,6 г На»50» и 1 мг Ыа»МоО» Для удаления кислорода нз «ультУРальной сРеды использУетсЯ Ыа»5 9Н»О (0,0056») нлв бнсульфвт натрия (0,0085»А). СО» (включен в среду в виде 0,5-0,56» ХайСО») н дРожжевой экстРакт (0,14),27э) Явлаются стнмуляторамн роста. Источником углерода служит анруват натрия (3 г)л).
Источвякамн углерода могут быть только компоненты цикла Кребса, а также ях блнзкяе пронзводные. )На 1 л среды добавляют 250 мг лактата ватрня, Н)0 мг щавелевоуксусной кислоты, 5 мг полнвяннлавого спирта, 87 мг тетрагндрохлорядспермвна, 1 мг гемнна, 46 (объем/объем) 2,2',2'-ннтрнлотрвзтанола, 2 мг ХАО, 0,46 мг тнамнапнрофосфатхлоряда, 42 мг ЫэНСО» в 1 г К»5Оь Перед добавленвем к среде щавелевоуксусной кислоты, НАО н тнамннпнрофасфатхлорнда нх следует па отдельностн просте. рнлнзовать фвльтрованнем. й Нв 1 л среды добавляют 5 г молочной кнслотм, 0,42 г лямонной кислоты Н»О н 0,004 г ЭДТА.
На 1 л среды добавляют 1О мл 86»8-ной молочной кислоты, 0,75 г глнкалата натряя н 4,5 мг путресцнва. Используется только свежепрвготовленная среда. Посевы делают немедленно после охлаждеяня среды. от щ О Х Е Е ц О ж Ж е з ж 4 О 'и К и! Для большинства этих сред глюкозу стерилязуют отдельна (обычно автаклавнроваинем] в добавляют с соблюдением правил асептики н стерильному раствоРу, содержащему другие вещества и В этом случае глюкозу автоилавируюг вместе С другами компонентами среды; производные гл~окозы, автоклавируемай вместе со средой (но ие сама глюкоза), являются стимуляторами или необходимы для роста. о Длн чарских штаммов в сРедУ дабавлают 2,55з НаС!.
На 1 л сРеды добевлают 0,44 мг Епног 7НгО. 0,4 мг СоС!г ВНгО к 0,27 мг СКС!г 2НСО. о Растворяют МОООм7НСО (количество указано в табли. це) и 30 мг Реноз(ННч)*ВОмВНгО в В,7 10-' М лимонной «нслоте и автоклавируют. растворяют 29 Ре(НН,) (ВО,) ОНО в 0.02 М НС! в Оз стерилизуют фильтрованием. На ! л среды добавляют 1 мл раствора, содержащего Вей МОВОь 0.5~3 Мпо)з 4НзО, 0,55, РеСН и 0,43 интрилотрнуксуской икслаты На 1 л сРеды добавлЯют 7,2 мг Епбо, 7НгО, 1,4 мг СпВОг НСО и 1,4 мг Санол5НгО На 1 л среды лобавляют 1 чг СаС1з ВНСО. о На 1 л среды добавляют по 1 мг СоС! ОН О.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
