Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 44
Текст из файла (страница 44)
(В настоящее время чистые культуры Мещалозагс(ча полученм в работе Ва1сЬ е! а1, М)сгащо1. Веч., 43. 230, 1979). — Прим. Ред.! Вероятно, авторы считала, что загрязнение не влияло на результаты эксзсрнментов. оо На ! л основной среды добавляю~ 15 г формната натрия и (после автоклавироваиня) стерильный раствор, содержащий 0,5 г пнрувата калия. Джоунс и Стэдмэн (99) рекомендуют добавлять к среде селенит (1 мнМ) и вольфоамат (100 мкМ). шш Добавляют глюк зу до «онцеитрацни 0,5% Факультатмвный аиаэроб, Штаммы варьируют от факультативных анаэрабов до аэробов. Согласно неправильной класснбгнкацин [139), ранее известен кзк Еги салах!ос теээл!е ощез Р-бО. Ке1е, МсСоу, Вас1ег)о1.
Ргос., р. бб. 1970 ььь Для лучшего роста на 1 л среды 53А добавляют следующие иочпоиенты 300 мг аскорбиновой кислоты и 5 мл ханна 30. ссс По крайней мере для одного штамма Д бэ!Ьгяесйп (а именна для 1.. Ве!Ьгиесж! 730) нужны также пнридоксаминфосфат (0.002 мг)л) и тимипни (4 мг(л). ббб Вместо пантетеина добавляют 20 мкг пантотеиата кальция. 7. БИОХИМИг!ВСКИЕ ФАКТОРЫ Продолженне табл. 7.( еее В ог утсгвис зцетата этот микроорганизм ну,кдаетс» в факторе роста, названном мевалоновап кислотои (поставляется в форме лакгона фермой 5!Бша Сйеписа( Со.). Вго добавляют к среде в концентрации 1 мкг)л. Ремни (0,2 мг(л), а танже СО, стимулируют рост в анаэробных уела- виях. КЕК Для раста необходима СОт. ддд Бее штаммы С. Ьоэ)з нуждаются в ненасыщенных жирных кислотах с длинной цепью, пальмитоолеиновои, рицииолевой или олеиновой. Эта но.
требиость эффективно воснолняется 0,1ей-ным таяном 50. ин Для продолжительного поддержания культуры нужен кровяной агаР. В качестве жидкой среды рекомендуется питательный бульон, обогащенный О,ЗЪ.вым дрожжевым экстрактом, О.!Ъ-ным саляиокнслым цистеииом. 17з-иай глюкозой и 57г-иой асцитнческой жидностью человека. В случае другого штамма ЕиЬастенит при добавлении субстратных количеств аргииина к основной среде с пептоиом рост значительно стимулируется (207).
~7 Род включает в себя паразитов, сапрофитав н промежуточные формы. Сапрофнтные штаммы растут на простык средах, а остальные — иа более сложнык нлн требуют добавок, например мнкобактииа, Некоторые штаммы культивируются только иа жввых клетках. Все штаммы на любой среде растут медленно. ййй Все жидкие среды кипятят в течение 10 мнн и перед ииокуляцней быстро охлаждают.
Все культуры инкубируют в аиаэробных условиях в атмосфеРе, состоащей нз 80гй Нь 1ОН Нз и 107г СОз. 1Д Бактерии растут на среде Чапека без пептоиа. ттт Бактерии (кроме отдельных, которые отмечены) являютс» облигатиыми парааитами н жизнеспособны только в животных клетках. Ик можно выращивать в эмбриональных желточимх мешках цыпленка и в культурах тканей позвоночных. ппи Культивируются |п тцго на искусственных средах. Для роста необходима сыворотка и желателен гемоглобнн.
В некоторых случзнх стимулирующий эффект оказывают глутатнон я аскорбиновая кислота. Чаще всего их выращивают на полужидкнх средах с (эй-ным агаром, но они могут также расти на твердой среде типа кровяного агара. В. Ьпсл)1(огппз растет в культуре ткани первнчиьш эксплантатов легких, костного мозга илн селезенки крыс н морских свинок, а также на хорноаллантоисиай н желточной жнд. костях зародыша цыпленка, Оптимальное значение РН культуральной среды 7,5. К основному кровяному агару добавляют темни ((О мкг)л) или гемоглобин (1 мг(л) н инкубируют в атмосфере, содержащей 957э воздуха н буэ СОг.
Необходимо также присутствие детокснкаитов типа бычьего альбу- мина (2 г)л), крахмала (2 г)л) нлн актнвнрованного угля (0,2 г/л). Р~Я Более оолиая информация о питании этой группы бактерий дана в обзоре (!б9!. «Ч» Бульон нз экстракта сердечной мышцы обогащен 20%-вой стерильной (нагретой до 5б 'С в течение ЗО ми!О лошадиной сывороткой и )йэй-ным свежим раствором дрожжевого экстракта (25 г дрожжевых клеток на 100 мл раствора1. ггг Для роста всех штаммов необходимы стерояды и жирные ккслоты с длинной цепью. 225 Таблипа 7.2. Состав комплексных (А) и полусиптетических (В) сред рй! — !2 для бактерий, перечислепиых э табл.
7.1 Компоненты 4АЗ зв !зА !2А зв' !эх' 6А ЗА эи ЗА ув 9А 5,4 1,0 1,0 1,0 1,0 10 1,0 0,5 0,1 0,5 5,24 2,77 1,74 1,06 1,13 0,48 1,0 0,04 0,04 0,075 1,4 1,0 0,5 0 — 30 0,5 0,5 0,25 1,0 3,0 0,1 0,1 0,2 0,1 1,0 0,05 а О О ! 0,5 Дак Дээ 1,0 1,0 3,0 0,05 5,0 1,0 1,0 0,5 20 !О 5,0 3,0 0,05 1,0 0,5 1,0 Глюкоза! (г) Глицерии (г) (НН ) 30 (г) КИОз (г) !т)азНРОз (г) КН,РОз (г) КзНРОз (г) ю Мп50з 7н,о о НаС! (г) СаС!з.2НгО (г) Ре50з.7Нз0 (мг) Микроэлементы Витамииы Мясной экстракт (г) Дрожжевой экстракт (г) Кислотный гидролизат казенка (казамииовые кислоты;г) Фермеитативиый гидролизат казеииа (казитои; г) Пептои (г) Количество !в екнницзх, укззвиных в копанке з! нз ! и среды 0,0 7,06 7,0 7,0 7, 6,8 7,2 7,0 7,0 7,0 7,0 — 7,2 7,0 7,0 Трнптан (г) Специальная среда ря Дй/ 7,0 — 7,4 "НаНСО» (2 г/л) служит источником СОь а Н<5 9Н<О (1 г/л) используется как восстанавливающий агент н источник серы.
Для обеспечения микроэлементами вместо дистил. лврозанной воды пользуются водопроводной. 6 Вместо днстиллнрованонй водм следует пользоваться водопроводной. г Для морских штаммов используют профильтрованную морскую воду; вместо нее можно применять имеющийся в продаже заменитель морской воды илн смесь следующих солей (на 1 л): 25 г НаС), 5 г МОЗО, ?Н О, 1 г СаС\, ЗН<О и 0,1 г КС!. Добавляют также глнцерофосфат натрия (0,1 г/л) н трис.буфер (<Пни<а; 1 г/л). » Среду исиольэуют для пресяовадных штеммов. К среде добавляют глнцерофосфат натрия (0,1 г/л) и трнс-буфер (Згйша) 1 г/л).
20 мл оснавнога раствора Хэтиера, не содержащего витаминов. Этот раствор, модифицированный Коэн-Базаер н др. (Зб), содержит следующие компоненты: 10 г ннтрилатриуксусиой кислоты (растворенной и нейтрализованной с по. мощью КОН); 14,45 г МОЗО«7Н<О; З,ЗЗ г СаС1«2Н<0; 9,25 мг (ИН<)<Мо Ом 24Н»О; 99 мг Ге5О< ?Н»О; 50 мл смеси металлов № 44 (см. ниже). Объем доводят дистиллированной водой до 1 л.
ру! среды устанавливают 6,6 — 6,5. Смесь № 44 содержит е 100 мл: 250 мг этнленднамннтетрауксусной кнс. патиц 1.095 мг ЗпЗО«?н,О; 500 мг уеЗО< ?Н<О) 154 мг МПВО» Н,О; 59,2 мг СиЗО, ОН»О; 24,6 мг Са(НО»), бН<О в 17,7 мг На»В<О< 10Н»О. Чтобы не выпаДал осадок, добавляют несколько капель 6 н. Н<50<. Для большинства сред рекомендуется глюкозу стерилнаовать отдельно автоклавироваинем или фмльтроввнием через соответствующие мембраны и ветен добавлять ее с соблюдением правил асептики к другим стерильным канпонен.
там среды. На 1 л среды добавляют 1 мл раствора, содержащего следующие микроэлементы: растворимые соли В, Ре, Мп (каждага элемента па 0,5 мг/л) и растворимые солй Со. Са, Мо. Еп (кап<дога элемента по 0,01 мг/л). 'Добавляют солянокнслый тмамии (1 мг/л) и витамин Бм (! мкг/л). Добавляют витамин Бп (В)0 мкг/л). Суспеидируют 40 г кровяного агара (имеется в прада. же) в 1 л дистиллированной иоды, доводят до кипенна, автоклавируют, охлаждают и к еще не застывшей смеси добавляют с соблюдением правил асептики 56<-ную стерильную дефнбрннированиую кровь.
Состав основного кровяного эгера: 500 г экстракта сердечной мышцы крупного рогатого скоте, 1О г триптояь< (Опсо), 5 г хиористого натрия и 16 г агера (Рпсо). К 1 л среды добавляют 10 г янтарной кислоты. я В процессе инкуб<цып сер/о№нх освгасеа величину рН поддерживают около ?, добавляя к среде стерильный рас. теор 0,5 и. НаОН. Таблица 7.3. Состав комплексных (А) н полусинтетическнх (В) сред Ай 13 — 24 дли бактерий, перечисленных в таба. 7.1' Компоненты 14 А пл' ил' "' 1ВЛ,Р 2ОЛ,Л 17ЛУ 21А эзлу 24А 1влх 1ЗИ* 5,0 5,0 1,0 100 1 — 3,0 1О 25 0,1 0,25 1,0 1,0 0,1 2,5 0,21 0,09 0,6 0,45 О.! 0,2 1'О О ч 1,0 0,3 5,24 2,77 0,05 0,05 20 0,005 120 1,0 0,2 1,0 5,0 0,002 5,6 5,0 2,0 5,0 Да1 1,0 Дат Дао Дал 5,0 20 2,0 2,0 5,0 15 5,0 3,0 1,0 15 2,0 7,6 10 7,4 7,4 7,0 5,4 — 6,3 7,0 6,8 6,8 — 7,0 7,0 6,8 7,5 Глюкоза" (г) Глицерин (г) (1)На)а504 (г) НОа (г) ХагНР04 (г) КН,РО, (г) КаНР04 (г) Мп504.7НаО (г) Мп504 НаО (г) ХаС! (г) СаС1а 2НэО (г) Ре504.7НаО (мг) Микроэлементы Витамины Дрожжевой экстракт (г) Кислотный гидролизат казеииа (казаминовые кислоты," г) Ферментативиый гидролизат каэеина (каэитон; г) Непток (г) рН Калнчестао (а елнннцах, укаэанных а колонке 11 на 1 л спелы д ш О ж ж ш э» ы О 'и а Готовые среды, имеющиеся в продаже, отмечены звездочкой.
Ь Среда содержит также 0,75 г солянокислого цистеина и 0,5 г тногликолата натрия. К 9 мл стерильной основной среды добавляют 1 мл кроличьей сыворотин, простерилизо. ванной фильтрованием. г На 1 л среды добавляют 0,5 г тнаглнколата натрия. Бак. терни лучше всего растут прн эабуфериваиии среды 0,033 М М-2-гндрооксиэтилпиперазии-Н'-этаиолсульфоновой кислотой (НЕРЕЕ), Н-тряс(гидроксиметнл)метил()-амииосульфоновой кислотой (ТЕ5), пнперазни-к,ы-бис(2-этанолсульфоновой кислотой) (Р!РЕ5) нлн при периодическом добавлевян НаНСОь БУфеРы пРонзаодат фиРмы Са(Ыосйещ Н 5)йща. б Дополнительные компоненты: 0,1 г ЫаН5Оь 10 г психического гндролнзата животной ткани (О5Р'), 10 г панкреатнческого гидрслизата казениа (Обр*). Среда продается под названием «бульон для бруцелл».
зл Для выращивания Сашру1оЬпс/ег к «бульону лля бруе ц целл»' добавляют 0,)бгй агара для создания частично анаэробных условий. Добавляют янтарную кислоту (10 г/л). Добавляют СаСО, (30 г/л). л Объединяют перечисленные компоненты со следующими: солянокислым цистеином (! г); паякреатическнм гндролизатом сердечной мышцы' (3 г): папанновым гндролнэатом соевой муки* (10 г); солянокнслым тнамннам (0,05 мг). Объем доводят до 1 л. 1 На 1 л среды добавлвют 2 г сукцината натрия и 0,5 г цитрата натри». 20 мл безвнтамннной минеральной сраны Хатнера.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
