Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 41
Текст из файла (страница 41)
Потребность в жирных кислотах характеризуется не абсолютной, а скорее групповой специфичностью, т. е. любая из нескольких активных жирных кислот часто включается в неизменном виде в липидные вещества клеток. Мевалоновая кислота, необходимая для роста некоторых видов Еас(о(7асИиз, выступает в роли предшественника изопреноидных соединений — каротиноидов, стероидов, убихинона и др. В отличие от большинства бактерий, которые содержат мало стероидов или вообще их не содержат, микоплазмы нуждаются в них для своего роста (например, в холестерине).
Жирные кислоты и другие лнпиды в принципе устойчивы к автоклавированию, однако при их добавлении к водным средам возникают некоторые сложности. Эти вещества необходимо растворять в минимальных количествах этанола или эмульгировать в растворе твина. 7.1.7. Другие вещества Существуют еще некоторые вещества, необходимые для роста ряда бактерий, которые могут быть или необходимыми, или стимулирующими факторами. К ним относятся полиамипы (путресцин, спермин, спермидин), каринтии, а также вещества, образуемые при автоклавировании глюкозы с фосфатом или в присутствии аминокислот. Несколько факторов еще не идентифицировано в дрожжевом экстракте и сыворотке. 7.1.8.
Определение потребностей питания При использовании бактерий в качестве тест-организмов в микробиологических и других биологических исследованиях необходимо знать их потребности в питательных веществах, а также влияние на эти потоебности других компонентов среды ЧАСТЬ и. РОСТ Прп подборе условий выращивания новой выделенной бактерии вначале используют так называемую комплексную среду, состав которой точно определить невозможно, так как она содержит неочищенные компоненты. Обычно в нее входит ферментативный гидролизат белка, обеспечивающий потребность в таких источниках азота, как аминокислоты, сахар (обычно глюкоза) как источник энергии и углерода, различные соли для удовлетворения потребности бактерии в неорганических ионах и дрожжевой экстракт для обеспечения всех потребностей в вигаминах. Когда потребности в питательных веществах бактерий приблизительно выявлены, можно использовать полусинтетическую среду.
В такую среду вносят известные соединения как явно необходимые; в нее добавляют также небольшое количество дрожжевого экстракта для обеспечения пока еще неизвестных потребностей, В конце концов находят состав синтетической средьи т. е. среды определенного состава, которая полностью удовлетворяет всем потребностям в питательных веществах. Выбор нужной среды зависит от целей эксперимента. Сложные синтетические среды довольно дороги, поэтому чаще используются комплексные среды неопределенного состава. Основные этапы определения потребностей гетеротрофных бактерий в питательных веществах заключа.
ются в следующем. 1. Бактерии следует выращивать на такой среде (комплексной или синтетической), о которой известно, что она поддерживает их рост. 2. Если начинают выращивать бактерии на комплексной среде, то варьируют концентрации всех компонентов (от нуля до самой большой, при которой они находились в исходной среде), чтобы определить их оптимальные концентрации и необходимость для роста или его стимуляции. 3. Определив оптимальные концентрации, сначала заменяют основной сложный компонент среды, поставляющий азот (например, казеин), на полную смесь аминокислот в тех же концентрациях, которые использовали в средах для аналитического (аззау гпеб(шп) определения веществ (см. табл.
7.14). к виохимические ФАктогы 4. Если эта смесь обеспечивает рост бактерий, поочередно варьируют концентрацию каждой аминокислоты от нуля до концентрации, превышающей ту, которая установлена в среде для аналитического определения. Таким образом определяют оптимальную концентрацию каждой аминокислоты в присутствии других. Если же наблюдается ингибирующий эффект, то соответствующую аминокислоту исключают из среды. 5, Заменяют сложный фактор роста, например дрожжевой экстракт, полным набором известных витаминов н затем варьируют отдельно уровень каждого компонента смеси, как и в случае аминокислот. Если в исходной среде в качестве источника аминокислот и витаминов используют дрожжевой экстракт, то стараются заменить его полной смесью аминокислот с полным набором известных витаминов и затем варьируют в среде уровень каждого компонента отдельно.
б. Если бактерии не растут на полученной таким путем среде, то это можно объяснить тем, что они нуждаются в неидентифицированном факторе, или тем, что нарушено соотношение известных факторов роста. Можно также предполагать потребность бактерий в известных факторах роста (пептидах, производных витаминов, жирных кислотах, нуклеотидах, неорганических ионах и др.), которые содержатся в неочищенных компонентах комплексной среды, но отсутствуют в смесях испытываемых синтетических веществ, В этом случае необходимо детально выяснить потребности бактерий в питательных веществах 170). 7.
Если работу начинают с использования синтетической среды и не наблюдают хорошего роста бактерий на втором этапе (см, выше), то заменяют источник азота на 10'/э-ный гндролизат казеина, Если это способствует росту, поступают, как указано на этапе 4; если же интенсивность роста все еще недостаточна, добавляют к среде 17',-ный дрожжевой экстракт. В случае стимуляции роста поступают, как указано на этапе 5. 211 чАсть и. Рост 7.2. СОСТАВЛЕНИЕ СРЕД Все среды, используемые для культивирования бактерий, перечислить невозможно, поэтому в приведенных ниже таблицах даны ссылки иа среды, в которых выращивают чистые культуры большинстна известных родов, 7.2.1. Ключ к средам, используемым для выращивания бактерий различных групп В табл.
7.! перечислены !92 вида бактерий, представляющих каждую из 19 групп, приведенных в 8-м издании «Определителя бактерий Берги» (Вегдеу'з Манна! о! Ое!егш!па!!уе Вас!ег!о!оду)'. В ней даны также оптимальная температура роста каждого микроорганизма и буквенно-цифровой ключ, помогающий найти состав одной илн нескольких известных в литературе сред, поддерживающих рост каждого вида. Строчные латинские буквы в верхних индексах названий бактерий указывают на сноски, в которых приведены подробности культивирования этих бактерий.
В колонке буквенно-цифровых ключей приведены номера таблиц (с. 7.2 по 7.13), где даны составы сред, Ключевая буква А обозначает в табл. 7.2 — 7.7 богатую комплексную среду, буква В в табл. 7.2 — 7.7 — полусинтетическую среду (несколько сред с кодом В приведено в табл. 7.12 и 7.13), а буква С вЂ” синтетическую среду в табл. 7.8— 7.13.
В табл. 7.1 перечислены только те бактерии, которые были выращены !и чйго в чистой культуре, Большинство приведенных сред не являются мннимальнымн, т, е. они часто содержат вещестна, в которых нет специфической потребности, или вещества, содержание которых значительно выше минимальных потребностей бактерий. То, что данную бактерию культивируют именно на указанной среде, еще не означает, что эта среда оптимальна для нее, поскольку детальное изучение потребностей в питательных веществах было проведено далеко не у всех штаммов. ' Имеется перевод: Краткий определитель оактерий БергиуПод ред. Йж. Хоулта.
— Мл Мир. !981, 2!2 т. БиОхимические ФАктОРы Таблица 7.1. Ключ к средам н условия культивирования различных бактерий Оптималь. наа температура рости, 'С Буквенно-цнеровод ь ключ к среде Источник дан- ных Груниэ, род и види а 1. Фототрофиые бактерии: Атоейойас!ет гояеия' Сй!огоЬсит !!т!со!а'и 25 — 30 25 — 30 25 — ЗО 25 — 30 30 25 — 30 П. Скользяшне бактерии; Агсйапугит уерйуга' Веуу!а!оа а!Ьа! [80, 141] [!15, !89] 18 — 32 20 28 — 30 ЗА (табл. 7.2) 4А, 5С (табл. 7.2, 7.8) ЗА (табл. 7.2) [140) Сйопс(готусея стаса. !и5ь ! Суя!ойас!ег [иясии' !с!Сх!Ьас!Сг )!Сх!!!и' р!ех!!йг!х с(ого!йеае' [142] [130] ] 129) 30 20 — 35 35 Мухососси5 хапййият [53, 80] ЗО 30 — 37 ЗО [174] [!28, 130] [194, 212! й!аппосуя!!5 ехес(епФ Баргоириа утапй!я' Брогосу!орйауа тухо- СОССО!с(Еяс Б!Сути!е!!а аигапНаса ЗО 7В (табл. 7.2) [175] П!.
Хламидобактерии: сер!о!йг!х осйтасеа' 20 — 25 [150, 229] [50, 219, 229] 8А, 9С (табл. 7.2, 7.8) 9Л, 1ОС (табл. 7.2, 7.8) 8А (табл. 7.2) Брйаегойуия па!апя' Б!тер!о!йг!х йуаупа' и 25 — 27 [151] 213 Сй!отой!ия !й!ояи![а!орйуитп' " СйтояаВия ойепить и Кйот)от!стой!ит оопп!е!!!' Кйоуоряеис]стоная ирйаего!с(ея' " Рйоаояр!ВВит гийгит' т е !С (табл. 7.8) !В, 2С (табл. 7.2, 7.8) 1В, 2С (табл. 7.2, 7.8) ЗС (табл. 7.8) 2Л, 4С (табл.
7.2, 7.8) 2А, 4С (табл. 7.2, 7,8) 2А, 4С (табл. 7.2, 7.8) ЗА (табл. 7.2) 5А, 5В (табл. 7.2) 5А, 6С (табл. 7.2, 7.8) 6В, 7С (табл. 7.2, 7.8) 6В (табл. 7.2) 5А, 5В (табл. 7.2) 8С (табл. 7.8) [158, 224) [!23, 124) [123, 124) [59) [!7, 52, !54] [17, 35, !54] [17, 154] Продолжение табл. 7.1 Оптвмапа. аав теп- пература реетв, 'С [2!!] [162] ЗО !ОА, 11С (табл. 7.2, 7.8) 11А, 12С (табл.
7.2, 7.8) 1!А, 12С (табл. 7.2, 7.8) 11А, 12С (табл. 7.2, 7.8) 1!А, 12С (табл. 7.2, 7. 8) 13С (табл. 7.8) [162] [162] [162] 30 [74. 150] ]86] [86, 183] 25 — 30 1ЗС (табл. 7.8) 12С (табл. 7.2) 12С (табл. 7.8) 10А, 11С (табл.7.2, 7.8) 1211] 29 1ЗВ, 14С (табл.7.3, 7.8) 1ЗВ, 14С (табл. 7.3, 7.8) 13В, 14С (табл.7.3, 7.8) 14А, 15С (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
