Методы общей бактериологии (том 1) (947292), страница 45
Текст из файла (страница 45)
Для модификации этой среды, согласно прописи Коэн-Вазир н др. (ЗЬЕ добавляют следующие компоненты: 1О г ннтрилотриуксусной ннслоты (растворенной н нейтрализованной КОН); 14,45 г М65О,.УН О; 3,33 г СаС)г 2НхО; 9,25 мг (НН )зМа Ом 24НзО; 99 мг Гс5Ох 7НхО; 50 мл смеси метал. лов Ж 44 (см. ниже). Дистиллированной водой объем доно. цят до 1 л и устанавливают РН 6,6 — 6,5. Смесь металлов )й 44 содержат (на 100 мл); 250 мг этиленднамннтетрауксусной кислоты; 1,095 мг Еп504 7Н,О; 500 мг Ре504.7Н,О; 154 мг Мп50х Н,О; 39,2 мг Сп50х 5НзО: 24,8 мг Со(НОз)з 6НзО; Н,7 мг НазВхОг !ОНзО Чтобы предотвратить выпадение осадка, добавляют неснолько капель 6 н. Н,5Ох.
й Для болыпияства сред рекомендуется стерилизовать тлю. козу отдельно от других компонентов среды и затем добавлять ее с соблюдением правил асептики. Глюкозу стерилнэуют автоклзвнроваиием или фильтрованием через соответстзуюи!ие мембраны. 1 На 1 л сРеДы добавлЯют: 0,05 мг Со50х УНзО; 0,2 мг НагМоОм2НзО; 0,2 мг 2п5Ом 0,01 мг Сп50, ЬНзО. На 1 л среды добавляют: 50 мкг Сп (в анде Сп50х.бНзО): 10 мкг В (а виде НзВОз); 10 мкг Мп (в виде Мп50х 4НзО); 70 мкг Хп (в виде Еп50х 7НзО); Ю мкг Мо (в виде МоОз). и Добавляют 5 мг соляноквслого тнамнна. К 9 частям сте. рильиой основной среды добавляют одну часть стерилнзо.
ванной ультрафильтрозаиием смеси альбумина с жирными кислотами следуюи!его состава: 20 г фракции у бычьего альбУмина, 0,01 г СаС(г2НтО, 0,01 г М6С1гбНзО, 8 мг Епбот)Н,О 0,6 СпбОгбН,О, 0,1 г Ребо,уН:О, 0,4 витамина Вм, 2,5 мл таина 60. Дистиллированной водой объем доводят до 200 мл. о Добавляют кальциевую соль паитотеновой кислоты (0.2 г/л). Для роста необходимо также исидеитнфнцнровапное вещество, экстрагированное на агара (3 мл/л, 90 мг твер. кого субстрата>.
Витамин не нужен. На комплексных средах бактерии не растут. Добавляют картофельный экстракт, приготовленный еле. кующим образом. Картофель очищают ат кожуры н нарезают ломтями. Добавляют к нему глицерин с водой н варят да состояния мягкости; затем фильтруют, оставляют стоять Иа некоторое время к надосадочиую жидность декантнруют.
Таблица 7.4. Состав номплексных сред (А) лй 25 — 37 длн бактернй, перечисленных в табл, 7.1" Компоненты 23А 28А 29А ' 39А 83А~ 34 А 27 А 33Ае 28А 2,0 1,0 2,0 3,0 4,0 1,0 3,0 0,45 2,7 0,2 0,9 0,02 0,01 0,9 0,02 5,0 5,0 30 5,0 !О 5,0 5,0 5,0 1,0 3,0 5,0 3,0 2,0 5,0 !7 !О 10 5,0 8,0 1О 20 8,0 16 Дау Даз 7,4 7,1 7,0 6 — 9 7,0 7,0 7,0 — 8,0 7,3 6,8 7,0 6,6 — 6,9 6,7 Глюкоза' (г) (ХН4)з$04 (г) ХазНР04 (г) КНзР04 (г) М8304 7НзО (г) с1 Мп50,.НзО (г) ХаС! (г) СаС! з. 2НзО (г) Дрожжевой зкстракт (г) Пелтон (г) Трнптон (г) Питательный бульон* (г) Специальные среды рн Количество !в едииидзх, укзззниых в колонке !) не 1 л среды и Готовые среды, имеющиеся в продаже, отмечены звездочкой.
з На 1 л среды добавляют 10 г лактозы, 3 г протеозопептоиа, 1,5 г желчных солей. с Для морских штаммов пользуются профильтрованной морской водой или ее заменителем (имеется в продаже) или же смесью следующик солей (г)л): НаС! (25); М55Оэ 7НэО (5); СаС!э 2НэО (1) и КС! (!).
Добавлают также глиЦеРофосфат натрия (О,! г)л) и тряс-буфер (5(йпга, 1 г)л). Протеоэопептои (5 г)л). растворяют 6,05 г гриса и 5,8 г яблочной кислоты в воде н поводят РН до 6,8 с помощью НаОН. ~Непосредственно перед экспериментом к другим компонентам среды дабавлиют отдельно стерилизоваинме растворы 1.-аскорбиновой кислоты (0,1 г) н 1.-нистииа (0,1 г). )..аскорбиновую кислоту стерилизуют фильтрованием, а В-цистии— фильтрованием или автоклавираввинем. Ц Д К другим «оипоиеитам среды добавляют 200 мл осветленной рубцовой жидкости (см. ниже), 2 г триптикаэы (ВВЬ) и 1 мг темнив. Устанавливают РН 6,7, объем доводят водой до ! л и автоклавируют.
Непосредственно перед экспериментом к автоклавированиой среде добавляют стерильные растворы ).-цистеина НС( НэО (0,5 г) н НаэСОэ (4 г). Культуры иикубируют в атмосфере, содержащей СОэ. Осветленную рубцовую жидкость готовят из свежесабранйой рубцовой жидкости коровм, содержащейся на рационе иэ сена. Жидкость филътруют через марлю и дают ей отстояться. после чего прозрачную надссадочиую жидкость центрифугируют 20 мни при 14000 аб)мин (2Ц. Л К среде добавляют 17,8 г Нв,5Оь Для большииств» сред рекомендуется стерилизовать глю- КОЗУ отдельно (автоклавироваиием или фильтрованием через соответствующие мембранные фильтры), а затем с соблюдением правил асептики добавлять ее к другим компонентам среды. Для приготовления шоколадного агара к триптиказовому соевому бульону" добавляют 3% (вес)объем) дрожжевого экстракта и !эй агара. После стерилизации в бульон вносят дефибрииираванную овечью кровь (конечная концентрация 4% ). иикубируют среду около 15 мии при 70 'С, охлаждают ее до 50 С и добавляют 1эоЧ!(а(еХ" (5 мл)среды) и СаС1, (конечная концентрация 0,5 мМ).
Л Лгар готовят иа экстракте из сердца крупного рогатого скота: 450 г сердечной мышцы, лишенной жира, измельчают и выдерживают в воде в течение почи при 4 — 6'С, добавляют пелтон и НаС1, как указана выше, кипятят 80 мии, фильтруют, объединяют с растворенным агаром (2тй в готовой среде), доводят РН до 7,4 и автоклавируют. Таблица 7.5. Состав комплексных (А) и полусинтетических (В) сред лй 38 — 50 для бантерий, перечисленных в табл. 7.! Компоненты 89А заву 46 А 4ОА 4!А 44АЛ 48А 48 А 49 А 47А! ЗОА 10 5,0 10 20 10 10 0,5 2,89 1,0 5,0 2,25 0,75 0,5 1,0 1,0 0,1 з о 2,5 0,2 0,05 0,096 О, 001 0,3 ь о ю 1 5,0 15 2,0 0,1 0,074 0,002 2.0 Ддзл Дал Да 1,0 5,0 3,0 1,0 10 5,0 4,0 5,0 5,0 3,0 2,0 2,0 !О 20 10 10 Глюкоза' (г) (ХН4) з304 (г) КХОз (г) ХазНРОз (г) КнзР04 (г) КзНРОз (г) М0504 7НзО (г) Д Мп504 НгО (г) ХаС! (г) СаС!г 2НзО (г) ЕеБОа 7НзО (мг) Микроэлементы Аминокислоты Витамины Мясной экстракт (г) Дрожжевой экстракт (г) Кислотный гидролизат казеина (казаминовые кислоты;г) Ферментативный гидролизат казеина (казитон; г) Пептои (г) Количество (в едиииизх, увезенных в колоние 11 нз 1 л средм 5,0 6,6 7,0 7,4 7,2 — 7,4 Триптон (г! Специальные среды рН 6,5 — 7,0 7,0 Дая 7,4 6,7 5,5 Даа 7,0 о Добавляют следующие компоненты.
0,5 г цнстеяна.НС(.НэО, 2г РаствоРимого кРахмала, 1О г пРотеозопептона, 50 мл стерильной сыворотки. Инкубируют в атмосфере. содержащей 90% Хг — 10% СОз Ь К перечисленнмм компонентам добавляют следующие: 0,05 г цветение НС! НтО, 2 г тиогликолата натрии, 1 г иатясного формальдегидсульфоксилата, !О г протеозопептоиа н .02 г темина. Длв первичного выделения этих бактерий необходима 5%-ная концентрацнв СО».
На 1 л сРеды добавлают 0,5 г Цистеииа НС( Нзо и 1О г триптиказы (ВВЬ). Смесь инкубируют в атмосфере 95% Нз — 5'й СОэ. Требуются комплексные среды. Кроме вышеупомянутых компонентов среда содержит 1 — 3 г бутирата, 30 мг олеино. оэ вой кислоты, экстракт иэ сердечной мышцы «рупного рогатого скота (25 г1 и овечьей сыворотки (100 мл). Глутамат натрия (1О мг)л) и рибонуклеиновая кислота (250 мг)л).
На 1 л среды добавляют пурииы и пиримидины: по 10 мг гуанина, урацила и гипоксаитнна. Культуры на твердых средах нвкубируют а анаэробиых сосудак, через которые продувается смесь 95% Хз — 5% СОг. а На 1 л среды добавляют 0,5 г тиогликолевой кислоты, 20 г растворимого крахмала, !3 г ОЬ.лактата натрии. ИикубиРУют в атмосфеРе с 5% (илн больше) Сот, остальной газ может быть Нэ. я На 1 л среды добавляют 10 г 85%.ной молочной кислоты, 0,75 г тиогликолата натрия, 0,1 г таина 80 и 1О г трнптнказы.
РН среды доводят с помощью твердого Касоа. Добавляют 8 г ЯаНСОэ н рубцовую жядкость до ковцентрации 30%. Иигубнруют в атмосфере, содержащей 80% Нз и 20% СОз. В качестве источника углерода можно нс- лизоаать тлю- Ш через соответдругих компправнл асеп- щЫ В г С С),8Н,О о50, 5НО и' гз й Ь-цветени Пэ лого пнрндокф м по 50 мкг вине, 10 мкг щ 1 мкт фОЛИС- 'и пользовать ацетат. Для некоторых штаммов необходимы 2-метил.н-бутират, иесколько аминокислот и иеидентифицироваинмй витаминоподобиый фактор роста, содержащийся в рубцовой жидкости. На 1 л среды добавляют 5 г цитрата аммоаия, 2 г аце.
тата натрия и 1 г таина 80. й Добавляют ацетат калия до концентрации 0,25%. 1 Длн большинства сред рекомендуется стерн козу (ввтоклааированнем илн фильтрованием ствующне мембранные фильтры) отдельно от пенсов, в затем объединять вх с соблюдением тики. На 1 л среды добавляют по ! м 18Оо7НтО, ЕпЗОз в Наыоог'2НгО, 0.5 мг С 20 мг иитрилотриуксусной кислоты. ОЬ тряптофен (100 мг(л), солвнокнслы (350 мг(л). о На 1 л среды добавляют по 1 г солянокис саля и кальциевой сали пантотеновой кислот солянокнслого тиамниа, ннацнна и рибофла я-аминобензойной кислоты, 2 мкг бнотина и по вой кислоты и витамива В„. Экстракт вэ сердца и мозга (37 г)л; имеется в продаже). а Очень хорошо растут на бульоне или агаре, прнготов.
ленном на осветленной рубцовой жидкости с целлюлозой. Осветленную рубцовую жидкость готовят иэ свежесобраниой рубцовой жидкости коровы, рацион которой состоит из сена люцерны. Раствор фильтруют через марлю и оставляют стоять на некоторое время, после чего прозрачную иадосадочную жидкость цевтрифугируют 20 мин при 1(000 об)мнн (2Ц. таблица 7.6. состав комплексиык (А) я полуснитетнческнк (В) сред 261 5! — 63 для бактерий, перечисленных в табл. 7.1 Комковелтм 60А 61А' 62А) 5565 56А~ 5!В 57 А 56А 59А!' 56А 1,0 18 5,0 1,0 12 10 10 10 12,7 З,О 7,0 0,5 5,5 0,1 4,5 0,4 1,0 3,3 3,3 0,4 0,02 0,2 8,7 8,7 15 0,04 0,04 2,0 0,2 1,0 0,2 0,5 0,0015 0,2 0,002 1,5 0,008 0,08 0,008 2,0 0,5 0,02 40 10 20 10 Даз Дам Дал Да" Дао Да' Даз Дае 5,0 10 1,0 З.О !О 10 1,0 — 2,0 1,0 10 3,0 2,0 7,5 4,0 4,0 20 5,0 10 5,0 20 Глюкозаа (г) (ХНл)лЯОа (г) КХОа (г) ХавНРОа (г) КНвР01 (г) КвНРОа (г) Мя501 7НвО (г) кт Мпла НлО (г) ХаС! (г) СаС!г 2НаО (г) Ре30а 7НлО (мг) Микроэлементы Аминокислоты Витамины Мясной экстракт (г) Дрожжевой экстракт (г) Кислотный гидролизат казеина (казамниовые кислоты;г) Ферментативный гид.
ролизат казеина (казитон; г) Пептон (г) Количество (в едкквцах, укаааккмх в коловке 1) ла 1 л среда Дн" 7,8 — 8,1 8,8 7,2 7,0 8,4 7,2 Специальные среды Дп' рН 7,4 7,4 ч и О И щ Ж и О 74 и ф ш 1 О Е а Другие компоненты, которые являются иеобхадимымн или оказывают стимулирующее действие (мг)л): ацетат натрия (820); хранил (112); ксаитян (152) н аленин (136). Ь На 1 л среди добавляют 400 мг НвНСОэ.
с На 1 л сРеды добавлЯют 1,5 г НазБОь ВодУ беРУт ие дистиллированную, а водопроводную. Глюкозу можно заменить лактатом натрия (3,5 г). Если в среде присутствует пируват (в качестве субстрата), та сульфат добавлять не нужно. б На 1 л среды добавлвют 1О г ацетата ыатриа. е На 1 л среды добавляют 1 г цитрата натрия, 0,3 г тиагликолата натрия, 0,06 г олеата ыатрии и 3 г сапойииа, Большинство молочнокислых бактерий можно полдержиьэ вать путем ежемесячных пересевав в столбиках с 2В-ним оз агаром, приготовленным иа данной среде. Все компоненты автоклавируются вместе. К жидкой культуре следует добавить неорганические сали, перечисленные в табл. 7.!4. Обратите внимание, что количество солей приводится на 1 л среды с двойной концентрацией.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
