МУ (830995), страница 19
Текст из файла (страница 19)
С использованием прямой иммунофлуоресценции определяют антиген в количестве не менее 105 микробных тел. Непрямая иммунофлюоресценция в 5— 10 раз чувствительнее, чем прямая.Радиоиммунологические (метка - 1251) исследования (РИА) иELISA-ИФА (метка-фермент: пероксидаза хрена) - каждый из методов используют для количественного определения конкретного антигена в растворе даже при наличии смеси антигенов.
Применяютдля идентификации вирусов (герпес симплекс, ЦМВ, герпес зостер),возбудителей коклюша (Bordetella pertussis), бруцеллеза (Brucella100МУ 4.2.2039—05abortus) в мазке материала - пневмонии (Legionella pneumophyliae,Mycoplasma pneumoniae), болезни Лайма (Borrelia burgdoferi), сифилиса (T. pallidum), ИППП (Chlamidia spp, Ureaplasma spp), кишечных инфекций (Salmonella spp, Shigella spp), Streptococcus rp. A,Toxoplasma gondii, Helicobacter pylori - в крови. Чувствительностьметодов - 1—2 нг/мл. Альтернативный метод - иммуноблоттинг,используемый для мониторирования инфекций, вызванных ВИЧ,вирусами гепатита, Т. pallidum, Borrelia burgdoferi (чувствительность - 1—2 нг/мл) и других.Мечеными конъюгатами определяют и мониторируют ответ(выработка антител) на антигены вирусов (ВИЧ, ЦМВ, герпес симплекс, герпес зостер), Т.
pallidum, В. burgdoferi.Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и различные модификации на ее основе (методы гибридизации ДНК и РНК) - основана назамене биологической амплификации (накопление клеток микроорганизма при культивировании in vitro) на ферментативную (энзиматическую) амплификацию специфических последовательностей нуклеиновых кислот возбудителя. Гибридизация нуклеиновых кислот возбудителя позволяет определять гены, ответственные за антибиотикорезистентность, наличие в биогробе медленно растущих и требующих особых условий культивирования микроорганизмов (например, легионеллы и микобактерии), тех, которые невозможно культивировать in vitro(возбудитель болезни Уиппла—Tropheryma whippelii и др.).8.4. Сбор и хранение образцовдля ПЦР-диагностикиМатериалом для исследования служат: соскоб из уретры, цервикального канала, заднего свода влагалища, секрет предстательнойжелезы, сперма, моча, мазки с коньюнктивы.8.4.1.Сбор материала (соскоб из урогенитального тракта) уженщин.
Соскобы производят из трех различных точек: цервикальный канал, уретра, задний свод влагалища. При необходимости материал для исследования берут из эрозивно-язвенных поражений.Сбор материала производят отдельными одноразовыми стерильными зондами.101МУ 4.2.2039—058.4.1.1.Сбор материала из цервикального канала. Удаляютслизь с поверхности шейки матки тампоном, вводят зонд в цервикальный канал на 1,0— 1,5 см и вращают его в течение 3—5 с. Извлекают зонд, избегая касания стенок влагалища, и помещают его встерильную одноразовую пробирку с транспортировочной средой(0,3 мл).
Погрузив рабочую часть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10— 15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробиркии, отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.8.4.1.2. Сбор материала из уретры. Перед забором соскоба изуретры необходимо обработать ее наружное отверстие тампоном,смоченным стерильным физиологическим раствором. Производятмассаж уретры пальцем со стороны влагалища, прижимая ее к лобковой кости.
Вводят зонд в уретру на глубину 1,0— 1,5 см и аккуратно, не поранив слизистую, несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд впробирку с транспортировочной средой (0,3 мл). Погрузив рабочуючасть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение1,0— 15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости,удаляют зонд и закрывают пробирку.8.4.1.3. Сбор материала из заднего свода влагалища. В случаеизбытка слизи и обильных выделений их удаляют стерильным ватным тампоном.
Проводят зондом по поверхности слизистой в области заднего свода влагалища и эктоцервикса и переносят зонд впробирку с транспортировочной средой (0,3 мл). Погрузив рабочуючасть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение10— 15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.8.4.2.Сбор материала (соскоб из урогенитального тракта) у мужчин.8.4.2.1.Сбор материала из уретры. Перед сбором соскоба изуретры необходимо обработать головку полового члена в областинаружного отверстия уретры тампоном, смоченным стерильнымфизиологическим раствором. Производят массаж уретры.
При102МУ 4.2.2039—05наличии свободно стекающих из уретры выделений удаляют ихсухим тампоном. Вводят зонд в уретру на глубину 3—4 см. Несколькими вращательными движениями производят соскоб эпителиальных клеток и переносят зонд в пробирку с транспортировочной средой. Погрузив рабочую часть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10— 15 с, избегая разбрызгивания раствора. Вынимают зонд из раствора, прижимая его кстенке пробирки и, отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.8.4.2.2. Сбор секрета предстательной железы может быть осуществлен двумя способами:♦ первый - после окончания массажа предстательной железыее секрет в количестве 0,5— 1,0 мл собирают в одноразовую стерильную пробирку объемом 1,5 мл;♦ второй - при невозможности получить секрет сразу послемассажа собирают первую порцию мочи (в которой содержитсясекрет предстательной железы) в количестве 10 мл (см.
правила забора мочи).8.4.2.3. Сбор спермы осуществляют в стерильные одноразовыефлаконы или пробирки.8.4.3. Сбор проб мочи. Для анализа отбирают первую порциюутренней мочи в количестве не меньше 20—40 мл в специальныйсухой стерильный флакон или сухую стерильную пробирку.8.4.4. Сбор проб с конъюнктивы.
Сбор пробы осуществляют сухими стерильными ватными тампонами под местной анастезией(2 капли раствора дикаина или инокаина). Оттянув нижнее веко,вращающими движениями провести зонд 4—5 раз по конъюнктиве,захватывая внешний и внутренний углы глаза. После забора материала тампон (рабочую часть зонда с ватным тампоном) помещаютв стерильную одноразовую пробирку с транспортировочной средой.Погрузив рабочую часть зонда в транспортировочную среду, вращают зонд в течение 10— 15 с, избегая разбрызгивания раствора.Вынимают зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки и,отжав избыток жидкости, удаляют зонд и закрывают пробирку.103МУ 4.2.2039—058.5.
Сбор проб для диагностики сифилиса8.5.1. Влажные поражения: удаляют корочку с очага, далеенеобходимо промокнуть любой экссудат вторичной инфекции стерильной марлевой салфеткой, придавливают основание очага длянакопления тканевой жидкости на его поверхности, прикладываютобезжиренное или новое предметное стекло к экссудату или собирают жидкость стерильной бактериологической (одноразовой илиметаллической, обожженной в пламени спиртовки и остуженной навоздухе) петлей и переносят жидкость на стекло, готовят мазки.8.5.2.
Сухие поражения кожи: осторожно удаляют поверхностный слой кожи с помощью стерильных скальпеля, кончика иглы илипроводят механическую экскориацию, прижимают очаг, если этонеобходимо, и собирают экссудат (см. выше). Материал можно собрать, введя в основание очага небольшое количество стерильногонебактериостатического физиологического раствора, отсасываютжидкость шприцем с тонкой иглой, готовят мазок (см. выше).8.5.3. Цервикально-вагинальные очаги: пробу собирают, используя зеркало для определения локализации очага, удаляют любоеотделяемое из вагины и цервикального канала с помощью стерильного тампона, используя стерильную бактериологическую петлю(см.
выше), собирают серозный экссудат. При необходимости прижимают очаг (поражение) специальным зажимом для получениясерозного экссудата, готовят мазки.8.5.4. Сифилитические пятна на слизистых оболочках: собирают материал со слизистых носа, глотки, полости рта или кишечникас помощью стерильной бактериологической петли (см. выше) и готовят мазки.8.5.5. Лимфоузлы: если сифилитические очаги лечили местнымприменением антибиотиков, то трепонемы могут быть разрушены.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
