Диссертация (1174378), страница 12
Текст из файла (страница 12)
В пользу ассоциации генетических вариантовTLR2 с астмой даже говорят исследования P. Koponen и соавторов [104].Анализ экспрессии гена HBD 1 у детей с бронхиальной астмойЭпителиальные клетки являются первичным защитным барьером на путипроникновениявдыхаемыхэкзогенныхэлементов.Важнымкомпонентомэпителиальной защиты во врожденном иммунитете является распознаваниепатогенов и аллергенов, секреции цитокинов и противомикробных пептидов.Учитывая это, в качестве изучаемого маркера был выбран продуцируемыйэпителием респираторного тракта β-дефенсин 1.Исследование количественного уровня экспрессии гена HBD1 в соскобе сослизистой оболочки полости носа у детей с БА в сравнении со здоровымидонорами показало снижение экспрессии гена HBD1 в 2,5-3 раза (рисунок 15).69 300 000p≤0,05 250 000200 000Здоровые детиЛегкая БА150 000Средняя БАТяжелая БА100 00050 0000Рисунок 15.
Уровень экспрессии гена HBD1 в клетках эпителия слизистойоболочки полости носа у здоровых детей и детей больных бронхиальной астмойразличной степени тяжести.Примечание: по оси абсцисс исследуемые группы; по оси ординат количествокопий мРНК, относительно уровня экспрессии гена β-актинаДанные представлены в виде медианы (25%; 75 %)Сравнивая показатели экспрессии гена β-дефенсина 1 между группамибольных БА было выявлено, что уровень экспрессии гена коррелирует с тяжестьютечения заболевания. Возможно, именно выявленное снижение уровня экспрессиигена β-дефенсина 1 влечет за собой ослабление локальных защитных механизмову больных БА.Несвоевременное распознавание и уничтожение агентов инфекции приводитк их неконтролируемому размножению и реализации воспалительного ответа вслизистой больного БА.Полученные результаты экспрессии генов TLR2, TLR4, TLR9 и HBD1 вклетках слизистой оболочки полости носа у детей с БА представлены в Таблице 6.70 Таблица 6.
Экспрессия генов TLR2, TLR4, TLR9, HBD1 в клетках слизистойоболочки полости носа у здоровых детей и детей больных бронхиальной астмойразличной степени тяжести.ИсследуемыйгенГруппынаблюденияДети с БА легкойЭкспрессия гена, относительные единицыHBD11,3 (0,4; 2,8)TLR20,4 (0,1; 1,8)TLR40,8 (0,1; 2,1)TLR90,2 (0,03;1)степени тяжестиДети с БА1,7 (0,7;2,1)* 1 (0,5; 3,6)**0,7 (0,08;1,4) 0,7(0,3;1)*0,9(0,4;1,5)*1,1(0,7;2,5)**1 (0,7;1,9) *0,7 (0,1: 1) *2,8 (2; 4,4)0,1 (0,09; 1,7)0,4 (0,2; 1)0,2 (0,06; 0,3)средней степенитяжестиДети с тяжелойформой БАЗдоровые детиДанные представлены в виде медианы (25 %; 75 %),* - статистически значимое отличие от группы здоровых доноров (р ≤0,05).** - статистически значимое отличие от группы здоровых доноров (р < 0,01).3.2. Анализ экспрессии TLR2, TLR4, TLR9 в лейкоцитах детей сбронхиальной астмой3.2.1 Особенности экспрессии генов TLR2, TLR4, TLR9 в лейкоцитах удетей с бронхиальной астмойПроанализировав экспрессию генов распознающих рецепторов в клеткахслизистой оболочки полости носа, было решено провести оценку уровняэкспрессии генов рецепторов врожденного иммунитета, распознающих PAMPs71 бактериальной (TLR2, TLR4) и вирусной природы (TLR9) в лейкоцитахпериферической крови у больных БА.У детей с легкой степенью БА экспрессия гена TLR2 имела тенденцию кповышению, тогда как уровень экспрессии генов TLR4 и TLR9 в 1,5 и 2 разасоответственно ниже уровня экспрессии у здоровых детей.
Однако эти отличиябыли не достоверны (р>0,05).В группе с астмой средней степени тяжести не было выявлено достоверногоизменения экспрессии генов TLR2, TLR4 и TLR9. Однако, имеется тенденция кповышению экспрессии генов TLR2 и TLR4 и снижению экспрессии гена TLR9 в1,4 раза (Таблица 7).Таблица 7. Экспрессия генов TLR2, TLR4, TLR9 в лейкомассе у здоровых детей идетей больных бронхиальной астмой различной степени тяжестиИсследуемыйгенГруппынаблюденияДети с БА легкойЭкспрессия гена, относительные единицыTLR2TLR4TLR92,6 (0,4; 7,4)0,5 (0,2; 2,2)0,2 (0,07; 1,07)1,8 (0,7; 5,2)1,6 (0,4; 3,6)0,2 (0,2;0,4)0,3 (0,2; 1,2) *0,4 (0,1; 0,9)0,4 (0,2; 0,8)1,1 (0,4; 4,2)0,8 (0,1; 1)0,4 (0,1; 1)степени тяжестиДети с БА среднейстепени тяжестиДети с тяжелойформой БАЗдоровые детиДанные представлены в виде медианы (25 %; 75 %),* - статистически значимое отличие от группы здоровых доноров (р <0,05)72 Экспрессия гена TLR2 в лейкоцитах в группе пациентов с тяжелой астмойоказалась достоверно сниженной в 3 раза по сравнению со здоровыми детьми (р≤0,05) (Таблица 7).В этой же группе исследуемых пациентов экспрессия гена TLR4 влейкоцитах также снижена в 2 раз по сравнению с контролем, однакодостоверных различий нет (Таблица 7).При этом, в отличие от пациентов с легкой и средней степенью астмы, вгруппе тяжелой БА экспрессия гена TLR9 сопоставима с экспрессией данногогена у здоровых.Выявленное снижение экспрессии генов TLR2, TLR4 и TLR9 в лейкоцитахпериферической крови в сравнении с показателями экспрессии в клеткахслизистой оболочки, что говорит о выраженном локальном характере воспаленияу пациентов с БА.3.2.2 Изменение экспрессии мембранных рецепторов (TLR2 и TLR4) влейкоцитах у детей с бронхиальной астмойПолучив данные о снижении уровня экспрессии генов TLR2 и TLR4 влейкоцитах больных с тяжелой БА, была проведена оценка экспрессиираспознающих рецепторов (TLR2 и TLR4) на поверхности CD14+ - моноцитов,лимфоцитов и гранулоцитов периферической крови исследуемых пациентов посравнению с группой здоровых детей.У детей с БА средней степени тяжести количество клеток периферическойкрови, экспрессирующих TLR2 по сравнению со здоровыми детьми было неизменено (рисунок 18).
А в группе детей с тяжелой формой БА выявленоувеличение количества гранулоцитов, экспрессирующих TLR2 (p=0,049), но приэтом изменений интенсивности экспрессии TLR2 на гранулоцитах обнаружено небыло (Таблица 8).73 Таблица 8. Средняя интенсивность экспрессии TLR2 и TLR4 на клеткахпериферической крови у здоровых детей и детей больных бронхиальной астмойразличной степени тяжести.Здоровые дети Дети с БА среднейДети с тяжелойБАстепени тяжестиTLR2TLR4СD14+мон-ты9,64 (8,73-10,8)15,08(13,9-9,1)*12,3(10,4-22,7)*Лимфоциты1,39 (1,19-1,54)1,08(1,03-,17)*1,17(1,12-1,23)*Гранулоциты2,27 (1,8-2,4)2,4 (2,31-3,25)2,62 (2,2-5,2)СD14+мон-ты1,52 (1,48-1,67)1,8 (1,6-2,62)*2,16 (1,74-2,3)*Лимфоциты1,08 (1,01-1,14)1,08 (1-1,12)1,04 (0,99-1,07)Гранулоциты4,41 (3,33-4,84)3,26 (2,5-3,6)*2,51 (1,67-3)*Примечание: СИФ представлены в относительных единицах.* - статистически значимое отличие от группы здоровых доноров (р < 0,05).74 Здоровые дети Дети с БА средней степени тяжести Дети с тяжелой БА Рисунок 16.
Процент клеток периферической крови, экспрессирующих на своейповерхности TLR2 (А) и TLR4 (Б), у здоровых детей и детей больныхбронхиальной астмой различной степени тяжести.Примечание. По оси ординат: процент клеток, по оси абсцисс: наименованиеклеточной субпопуляции. * - статистически значимое отличие от группыздоровых детей (р <0,05).Анализируя интенсивность экспрессии TLR2 на лейкоцитах периферическойкрови, было установлено, что у пациентов со средней и тяжелой степенью БАдостоверно увеличена интенсивность экспрессии TLR2 на CD14+ моноцитах(p=0,02 и p=0,048 соответственно).
Интенсивность экспрессии TLR2 налимфоцитах периферической крови детей с БА средней и тяжелой степенитяжести достоверно снижена по сравнению с контролем (p=0,005 и p=0,03,соответственно) (Таблица 8, рисунок 16).Оценивая экспрессию TLR4 на клетках периферической крови детей с БА,было выявлено повышение CD14+ - моноцитов, экспрессирующих TLR4 как вгруппе со средней степенью БА, так и при тяжелой форме заболевания (p=0,005 и75 p=0,002соответственно).Такжеобнаруженоувеличениеинтенсивностиэкспрессии TLR4 на CD14+ моноцитах (p=0,04 в группе с БА средней степенитяжести и p=0,009 в группе с тяжелой БА).
Однако, изменений количествалимфоцитов и гранулоцитов, экспрессирующих TLR4, не отмечалось. Во всехгруппах детей с БА показано снижение интенсивности экспрессии TLR4 награнулоцитах по сравнению с контролем (p=0,04 в группе с БА средней степенитяжести и p=0,044 в группе с тяжелой БА) (Таблица 8). А на лимфоцитахпериферической крови интенсивность экспрессии TLR4 у пациентов с БАсоответствовала показателям группы здоровых детей.Таким образом, настоящее исследование выявило увеличение экспрессииTLR2 и TLR4 на циркулирующих CD14+ моноцитах периферической крови удетей с БА относительно группы здоровых детей.Согласнолитературнымданным,циркулирующиемоноцитыпериферической крови имеют значительное влияние на развитие и поддержаниеаллергического воспаления [151]. Их существенная роль в формированиихронического воспаления обусловлена тем, что они способны мигрировать вподслизистый слой бронхов и продуцировать там провоспалительные цитокины ихемокины.3.3 Анализ содержания эпителиальных цитокинов IL-33 и TSLP вназальных смывах и сыворотке крови детей с бронхиальной астмойСреди недавно открытых цитокинов огромное внимание привлекает IL-33,относящийся к семейству провоспалительного IL-1.
IL-33 стимулирует развитиеДК, приводя к их к выраженной способности активировать CD4+ T-лимфоциты,что проявляется в значительной продукции последними IL-5 и IL-13. Кроме того,IL-33 является хемоаттрактантом для Тh2 [133]. Цитокины продуцируемые Тh2(IL-4, IL-5, IL-9, IL-13) увеличивают синтез IgE, а также повышают количествоэозинофилов и тучных клеток в очаге воспаления, которые оказывают влияние нагладкомышечныеислизистыеклетки76 респираторноготракта.Всеэто обуславливает гиперактивность дыхательных путей — одному из ведущихзвеньев в патогенезе БА. В норме IL-33 конститутивно экспрессируется навысоком уровне, при воспалении его экспрессия дополнительно увеличивается[44].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
