Диссертация (1174378), страница 15
Текст из файла (страница 15)
И несмотря на то, что ведущую роль в патогенезе БА отводят IgEопосредованному механизму, в последние время особое внимание уделяетсяисследованию механизмов врожденного иммунитета в патогенезе БА.Пристальное внимание исследователей обращено на изучение механизмовпатогенеза БА. В последние годы особое внимание уделяется исследованию ролимеханизмов врожденного иммунитета в патогенезе БА. [63, 73, 124] Этообусловлено важной ролью механизмов врождённого иммунитета в развитиихроническоговоспаления,являющегосянеотъемлемымкомпонентовформирования БА, а также тем фактом, что частые обострения астмы вызываютсяОРИ [50, 87].Активно исследуется роль эпителия слизистой оболочки дыхательных путейв патогенезе БА [54,71].
Известно, что эпителий верхних и нижних дыхательныхпутей имеют общие маркеры активации. Показано патогенетическое единствоверхнегоинижнегоотделовреспираторноготракта,особенноприаллергопатологии, что отражается в концепции ВОЗ «одни дыхательные пути –одно заболевание». Также в многочисленных работах последних лет показано, чтоэпителий является не только физиологическим барьером, но и выполняет важные90 иммунологические функции, включая распознавание патогенов, секрециюбиологически активных молекул с прямым противомикробным действием,цитокинов,интерферонов,кислородныхрадикаловидр.Эпителийисинтезируемые им цитокины определяют направление развития адаптивногоиммунитета [71, 73, 83]. Таким образом, эпителий респираторного тракта являетсяинформативным объектом для исследования врожденного иммунитета при БА.Однако, прогностическая ценность бронхоальвеолярного лаважа во многомограничена вследствие инвазивности методы для получения исследуемогоматериала.В связи с этим в качестве материала для не инвазивной диагностики намибыл использован соскоб со слизистой оболочки полости носа.
Взятие материала свнутренней поверхности носовой полости – не инвазивная процедура и с успехомприменялась ранее для оценки мукозального иммунитета у больных саллергическим ринитом, воспалительными заболеваниями ЛОР-органов у детей[6, 152].Перед нами стояла задача разработать подход к комплексной оценкеврожденного иммунитета на уровне слизистой оболочки полости носа.Учитывая тот факт, что вирусная и бактериальная инфекции являютсятриггерами приступа и обострения астмы, обосновано исследование экспрессиигенов распознающих рецепторов. Наиболее важным представляется изучениеTLR2, TLR4 и TLR9 т.к.
данные рецепторы распознают широкий спектрпатогенов вирусной и бактериальной природы [119, 128]. Известно, что βдефензин 1, секретируется эпителиальными клетками слизистой оболочкиреспираторного тракта, предотвращают вторжение патогенов в слизистую.оказывает прямое противомикробное действие, также активирует и регулируетврождённый и адаптивный иммунитета [63].В связи этим нами был предложен подход к оценке врожденного иммунитетау детей с БА на уровне слизистой респираторного тракта, включающий оценкуэкспрессии генов паттернраспознающих рецепторов (TLR2, TLR4, TLR9),91 эффекторноймолекулыдефенсина-1(НBD1),атакжеуровняпро-ипротивовоспалительных цитокинов в назальных смывах.В исследование было включено 111 детей с БА легкой (n=54), средней (n=15)и тяжелой степенью тяжести (n=42) согласно критериям GINA.Необходимо отметить, что механизм формирования неконтролируемоготечения БА не до конца изучен.
Сохраняется необходимость дальнейшегоисследования иммунопатогенеза БА для выявления маркеров тяжелого течениязаболевания у детей.Сиспользованиемразработанногоподходавыявлендисбаланс,проявляющийся в снижении уровня экспрессии гена противомикробного пептидаHBD1, и увеличении экспрессии генов TLR 2, TLR 4 и TLR9 у детей с тяжелойформой БА.На основании полученных данных можно предположить, что снижениеэкспрессии противомикробного пептида HBD1 может приводить к увеличениюбактериальной нагрузки на слизистой, к активации TLRs эпителиальных клеток иповышенной выработке провоспалительных цитокинов и хемокинов.При оценке экспрессии генов TLRs в лейкоцитах периферической кровивыявлено их снижение при сравнении с показателями экспрессии в клеткахслизистой оболочки, что говорит о выраженном локальном характере воспаленияпри БА.Получив данные о снижении экспрессии генов TLR2 и TLR4 в лейкоцитахбольных БА, была проведена оценка распознающих рецепторов (TLR2 и TLR4) наповерхности CD14+- моноцитов, лимфоцитов и гранулоцитов периферическойкрови исследуемых пациентов по сравнению с группой здоровых детей.
Данноеисследование показало увеличение экспрессии TLR2 и TLR4 на циркулирующихCD14+ моноцитах периферической крови у детей с БА по сравнению с группойздоровых детей.Согласно данным литературы, циркулирующие моноциты периферическойкрови играют существенную роль в развитии и поддержании аллергическоговоспаления [125]. Моноциты способны мигрировать в подслизистую оболочку92 бронхов, где продуцируют провоспалительные цитокины и хемокины, такимобразом принимая участие в развитии и поддержании хронического воспаления.На основании выявленных изменений в экспрессии TLR2 и TLR4 на лейкоцитахпериферической крови детей с БА можно предположить, что циркулирующиемоноцитыпериферическойкровиудетейвисследуемыхгруппахпредактивированы.Ранее в работе Свитич О.А.
было показано, что спонтанная и ЛПСиндуцированнаяпродукцияпро-ипротивоспалительныхцитокиновмононуклеарными клетками (МНК) периферической крови в культуре in vitro убольных БА выше, чем у здоровых доноров, что свидетельствует о предактивацииМНК больных БА [21].Таким образом, выявленные изменения в экспрессии генов TLR2 и TLR4 всоскобах со слизистых полости носа, лейкоцитах периферической крови и TLR2 иTLR4 на поверхности CD14+ моноцитов, гранулоцитов и лимфоцитов больных БАсвидетельствуют о вовлечении этих рецепторов в иммунопатогенез БА. TLRsмогут рассматриваться перспективными маркерами прогноза течения БА и, вдальнейшем – возможными терапевтическими мишенями.Важно отметить, что через активацию эпителиальных TLRs индуцируетсявыработка TSLP и IL-33, которые взаимодействуют с ДК, увеличиваютэкспрессию костимулирующих молекул CD40L, CD80 на ДК и направляютдифференцировку Th0 в Th2. Также напрямую взаимодействуют с тучнымиклетками, вызывая их дегрануляцию [86, 96].
Более того, через активацию ILC2они способствуют выработке цитокинов (IL-4, IL-9, IL-13) и развитиюаллергического типа воспаления [148].Показано, что выработка TSLP индуцируется при активации TLRsэпителиальных клеток и является важным связующим звеном между врожденнымиммунитетом и аллергопатологией [46].Учитывая эти данные, мы оценили содержание IL-33 и TSLP в смывах изполости носа у детей с БА. У больных c легкой и средней степенью тяжести БАвыявлена тенденция к увеличению содержания TSLP в назальных смывах. При93 этом у пациентов с тяжелой БА содержание TSLP в 2,4 раза превышаетпоказатель группы контроля. У больных c тяжелой степенью БА выявлено такжедостоверное увеличение IL-33.При сравнении концентраций IL-33 и TSLP в сыворотке крови и назальныхсмывах больных с БА выявлены более выраженные изменения на локальномуровне.
Так, содержание IL-33 в смывах из полости носа в 15,7 раз превышает егоуровень в сыворотке крови пациентов с тяжелой БА.Анализ результатов оценки спектра цитокинов выявил закономерноеувеличение содержания провоспалительных цитокинов в смывах из полости носабольных с БА в зависимости от степени тяжести. При этом у пациентов с тяжелойформойтакжеотмечаетсясущественноеповышениесодержанияипротивовоспалительных цитокинов (IL-1ra, IL-10, IL-4).При оценке TGF-β1 в назальных смывах, выполняющего регуляторнуюфункцию, выявлено значительное изменение его концентрации у пациентов с БАразличнойстепенитяжести.Вовсехисследуемыхгруппахотмечаетсявыраженное, достоверное снижение уровня данного регуляторного цитокина.Можно предположить, что снижение TGF-β1 обусловлено функциональнымснижением активности Treg, играющих важную регуляторную роль благодарясупрессии Th2-ответа [92].Таким образом, дисбаланс в системе цитокинов подтвержден высокимуровнем как провоспалительных, так и противовоспалительных цитокинов вназальных смывах, за исключением TGF-β1.
Выявлена прямая зависимость отстадии БА, характеризующаяся возрастающим содержанием цитокинов взависимости от тяжести заболевания.При тяжелой форме БА выявлено снижением противовирусного цитокина IL28В, что может являться важнейшим этиопатогенетическим звеном какформирования самой БА, так и ее вирус-индуцированных осложнений. Можнопредположить, что при БА тяжелой степени наблюдается переключениесигнальных каскадов, направленных на выработку цитокинов, участвующих вразвитии хронического воспаления в дыхательных путях. При этом выявляется94 дефект в выработке ключевого фактора местного противовирусного ответа - IL28В.На основании полученных нами результатов и литературных данныхпредставлена обобщенная схема участия механизмов врожденного иммунитета впатогенезе БА (рисунок 23).Рисунок 23.
Обобщенная схема участия механизмов врожденного иммунитета впатогенезе бронхиальной астмы.Условные обозначения: ↑ - повышение показателя, ↓ - снижение показателей,выявленное в наших исследованиях.Согласно предложенной схеме, аллергены и патогены, воздействуя наэпителийдыхательныхпутей,активируютTLRs,индуцируясекрециюпровоспалительных цитокинов и интерферонов. Эпителиальные клетки такжесинтезируют ТSLP, IL-33 и IL-25, которые через активацию ILC2 способствуют95 выработке цитокинов (IL-4, IL-9, IL-13), активирующих тучные клетки,эозинофилы и вызывают развитие аллергического типа воспаления. Наряду с этимэпителиальные цитокины, активируя способность миелоидных дендритныхклеток индуцировать Тh2-воспалительный ответ.Суммируя все полученные данные, можно заключить, что у больных тяжелойформой БА имеются нарушения в системе врожденного иммунитета на локальномуровне, проявляющийся в гиперэкспрессии генов TLRs, увеличении выработкипровоспалительныхиэпителиальныхцитокинов,снижениипродукциипротивовирусного цитокина IL-28В и TGF-β1.Таким образом, на основании данного подхода определены маркерыврожденного иммунитета, ассоциированные с БА тяжелой степени у детей(рисунок 24).Рисунок 24.
Маркеры, ассоциированные с развитием бронхиальной астмы удетей96 Новый взгляд на механизмы врожденного иммунитета, и в первую очередьна систему распознающих рецепторов TLR2, TLR4, TLR9, эпителиальныхцитокинов TSLP и IL-33, а также противовирусного цитокина - IL-28В открываетновые подходы к диагностике и лечению БА у детей.97 ВЫВОДЫ1. У больных со средней и тяжелой степенью бронхиальной астмы выявлендисбаланс факторов врожденного иммунитета на уровне слизистой оболочкиполости носа, проявляющийся в увеличении экспрессии генов распознающихрецепторов TLR2 в 5,6-6,5 раз, TLR4 в 2,5 раза, TLR9в 2,5-2,6 раз иснижением экспрессии гена противомикробного пептида HBD1 в 3-4 разасоответственно.2.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
