Диссертация (1174337), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Обзор литературных данных по результатам изучения ролиполиморфизма цитокинов и хемокинов, к сожалению, также не дает однозначныхданных о роли определенных генетических маркеров в хронизации ГН.В зарубежной литературе мало внимания уделяется рассмотрению процессовхронизации ГН. Исследования такого рода ограничиваются констатациейфиброзирования тубулоинтерстициальной ткани, активизации экспрессии впочечных канальцах комплекса C5b-9, повышения продукции ростового фактораTGF-beta1 в гломерулах, гиперэкспрессии на клетках почечной ткани microRNAs(miRs) (Gionanlis L. et al., 2008; Moura I.C., 2008; Hsieh C..et al., 2011;Yung S., Chan T.M., 2017).Результаты определения циркулирующих в крови цитокинов при ГНсвидетельствовали о снижении уровней RAIL-1β и IL-4 у пациентов схроническим течением заболевания (Жизневская И.И., Хмелевская И.Г., 2014).В других исследованиях установлено при хроническом ГН снижение продукцииRAIL-1β на фоне повышения уровня IFN-γ (Автономова О.И., Карзакова Л.М.,2014).
Приведенные данные показывают, что в настоящее время нет единоговзгляда на понимание механизмов иммунопатогенеза острого и хронического ГН,а данные по изучению роли цитокинов в хронизации ГН единичны, несмотря на40то, что цитокины являются информативными индикаторами функциональногосостояния различных компонентов врожденного иммунного ответа.ЗаключениеИтак, развитие ГНсвязанос инфекцией и активациейразличныхкомпонентов иммунного ответа.
PAMP инфекционных патогенов выступают вроли «сигналов опасности», активирующих TLR клеток врожденного иммунногоответа – моноцитов/макрофагов, ДК; в результате запускаетсякаскадвнутриклеточных цепных реакций, вызывающих продукцию ростовых факторови цитокинов. TLR участвуют в активации адаптивного иммунного ответа черезАПК, которые совместно с цитокинами способствуют дифференциации CD4+хелперных клеток в Th1, Th2, Th17 и Treg, активацииВ-клеток и продукцииантител.
По последним данным, ключевым звеном в иммунопатогенезеявляетсядисбалансвсоотношенииактивностисубпопуляций Т-хелперных клеток, проявляющийсяклеток Treg на фоне активациикаждойГНиммунорегуляторныхугнетением активностиTh1-, Th2-, Th17-клеток. При этом активностьиз данных субпопуляций Т-хелперных клеток обеспечивается своимнабором цитокинов.Активность Th1-, Th17-клеток реализуется в клеточныхмеханизмах иммунного ответа, в то время как Th2-клетки обеспечиваютактивизацию гуморального компонента адаптивного иммунного ответа ипродукцию антител, участвующих в формировании циркулирующих ИК или жев образовании последних in situ. Депозиты ИК, в свою очередь, могут самивызвать дополнительную стимуляцию компонентов врожденного иммунногоответа – TLR, цитокинов и СК, усиливая тем самым воспалительный процесс вгломерулах. Это общая схема патогенеза ГН, которая имеет специфическиевариации в зависимости от клинико-морфологической формы гломерулярногоповреждения.Классический ПИГН в большинстве случаев реализуется как диффузныйэндокапиллярныйпролиферативныйГН,режекакэкссудативныйбыстропрогрессирующий ГН, иммунологической основой которого являются41отложениявстенкеиммуноглобулиновклубочковыхразличныхкапилляровклассов,ИК,состоящихС3-компонента.изОтложенияиммунологических депозитов проявляется микроскопически обнаруживаемыми«горбиками»всубэпителиальныхпространствахклубочковогофильтра.В сыворотке крови обнаруживается гипокомплементемия.
В современныхусловиях ПИГН зачастую имеет стертое течение, что обусловливает позднееначало патогенетического лечения и, в конечном счете, трансформацию его вхроническое течение. Однако нередко и случаи ПИГН с ярко проявляющейсясимптоматикой могут иметь исходом не выздоровление, а переход в зятяжное,хроническое течение. Всвязи с этим остро стоит проблема изученияпатогенетических механизмов хронизации острых ПИГН.Поскольку в воспалительных процессах играют большую роль факторыврожденного иммунитета и связанные с их активизацией провоспалительныецитокины, является перспективным изучение роли цитокинов в хронизации ГН.42ГЛАВА 2.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1.Дизайн исследованияИсследование включало 3 этапа.На первом этапе проанализированы амбулаторные карты, а также историиболезни всех случаев стационарного лечения у больных ГН, находившихся налечении в нефрологическом отделении БУ «Республиканская клиническаябольница» МЗ ЧР в 2007-2017 гг. Анализировали клинический, функциональныйстатус больных, данные анамнестических и лабораторно-инструментальныхисследований.На втором этапе осуществлено клиническое обследование, стандартныеобщеклиническиелабораторныеибиохимическиеисследования,морфологическое исследование нефробиоптата, тестирование микроорганизмовиз очагов инфекций (с использованием бактериологических, серологическихметодов, полимеразной цепной реакции)у больных ПИГН, поступавших настационарное лечение в нефрологическое отделение БУ «Республиканскаяклиническая больница» МЗ ЧР (зав.
отделением – Леонтьева Е.В.) в 2012-2017 гг.Перед включением в исследование у пациентов получено информированноесогласие. Протокол клинического обследования утвержден локальным этическимкомитетом медицинского факультета ФГБОУ ВО «Чувашский государственныйуниверситет имени И.Н.Ульянова». В исследование включено 93 больных,которых наблюдали в течение 12 мес.На третьем этапе исследования проводили клиническое обследование, УЗИпочек,стандартныеобщеклиническиелабораторныеибиохимическиеисследования больных, обследованных по программе 1-го года исследования. Порезультатам наблюдения за больными в течение 12 мес и лабораторноинструментальных исследованийбольных группировали в две группы –«Хронический ГН» и «Острый ГН».
Пациенты, у которых исчезли клиническиепроявлениязаболевания,наступиловосстановлениеисходноизмененных43лабораторных показателей мочи и крови, были отнесены в группу лиц с острымПИГН (61 чел), а пациентов, у которых сохранялись клинико-лабораторныеизменения, были включены в группу больных с хроническим ПИГН (32 чел.). Натретий этап было отобрано из 93 первоначально включенных в исследованиепациентов 60 человек – по 30 больных в каждую группу исследования.
Помимообщепринятых методов исследования на обоих этапах проведена оценкаиммунного статуса и цитокинового профиля больных.2.2. Материалы и методыПри отборе руководствовались следующими критериями включения висследование: 1) больные обоего пола в возрасте от 16 до 75 лет,2)установленныйдиагнозГН,развившегосячерез2-4неделиперенесенного инфекционного заболевания или на фоне инфекциипосле(ОРВИ,острые случаи или обострения инфекции рото- и носоглотки, пиодермия,урогенитальные инфекции и др.) 3) добровольное информированное согласиебольного на участие в клиническом исследовании. Клиническими критериямиисключения из исследования являлись: 1) сопутствующие заболевания (сердечнососудистые, желудочно-кишечные, эндокринные, кроме сахарного диабета,наркомания и др.); 2) вторичные ГН на фоне системных аутоиммунныхзаболеваний; 3) патология почек, отличная от ГН; 4) ГН с признаками почечнойнедостаточности (сывороточный креатинин больше 200 мкг/л, СКФ меньше60 мл/мин); 6) лица старше 75 лет; 7) женщины в период гестации.Общеклиническиелабораторные,биохимические,бактериологические,молекулярно-генетические (полимеразная цепная реакция - ПЦР) исследованиявыполнены в Республиканской централизованной клинико-диагностическойлабораторииибактериологическойлабораторииБУ«Республиканскаяклиническая больница» МЗ ЧР.Обследуемым проводили ультразвуковое исследование (УЗИ) почек вусловияхкабинетафункциональнойдиагностикиБУ«Республиканская44клиническая больница» на ультразвуковом аппарате "SSD" фирмы "Aloka"(Япония).Чрескожнаяпункционнаябиопсияпочек,стандартизованноегистологическое исследование нефробиоптата: световая, иммунофлюоресцентнаямикроскопия с использованием антисывороток к IgM, IgG, IgA и С3-компонентукомплемента,электронная«Приволжскийокружноймикроскопияпроводилисьмедицинскийвусловияхцентр» ФедеральногоФБУЗмедико-биологического агентства.ИммунологическиеисследованиявыполненывРеспубликанскойцентрализованной клинико-диагностической лаборатории БУ «Республиканскаяклиническая больница» МЗ ЧР.
В качестве объектаисследования служилапериферическая кровь. Одномоментно проводили забор образца венозной кровив объеме 6 мл в пробирки с гепарином (20 Ед/мл) и 5 мл в сухую пробирку дляпоследующего отделения сыворотки. Оценку иммунного статуса и цитокиновогопрофиля больных проводили дважды – в дебюте заболевания(1-2-йднистационарного лечения) и при повторной госпитализации через 12 мес послеманифестации заболевания (на 1-2-й дни стационарного лечения).Методы исследования:1.Определение концентрации цитокинов, С3, С4Количественное определение цитокиновIL-1β, IL-2, IL-4,IL-8, IL-10,IL-17А, TNFα, IFN-γ, рецепторного антагониста IL-1β – RAIL-β, а такжекомпонентов комплемента – С3, С4 проводилииспользованиемИФА-тест-системОООв моче и сыворотке крови с«Цитокин»(С-Петербург)наавтоматическом анализаторе для выполнения иммуноферментного анализаImmunomat «Инститьют Вирион/Серион ГмбХ", Германия) по методикампроизводителя лабораторных тест-систем.2.
Оценка иммунного статусаМононуклеарные клетки (МНК) выделяли на градиенте плотности фиколла-45верографина (ρ=1,077 г/см3). Для идентификации лимфоцитов и их субпопуляцийпроводилииммунофенотипированиеиммунофлюоресценциинаМНКпроточномметодомцитофлюориметрепрямойFc500(«BeckmanCoulter», США) с использованием моноклональных антител (МКАТ)CD3, CD3/CD4, CD3/CD8, CD20, CD3/CD25, CD4/CD25, CD95, CD16/CD56(Beckman Coulter) согласно методике производителя МКАТ.Определение концентрации IgM, IgG, IgA в сыворотке крови проводилииммунотурбометрическимметодом с использованием автоматическогобиохимического анализатора ILab 650 (Япония, Италия).Определение концентрации циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК)в сыворотке осуществляли методом осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ-6000)(Гриневич Ю.А., Алферов А.Н., 1981).Оценкафагоцитарнойактивностивключалаиспользованиевзвесилейкоцитов, которую инкубировали со стандартными частицами латексадиаметром 1,35 мкм («Иммуноскрин», Москва) в течение 30 мин, делали мазок,окрашивали азур-эозином и считали число нейтрофилов, захвативших частицылатекса.