Диссертация (1174334), страница 20
Текст из файла (страница 20)
В литературныхисточниках представлены данные о клинико-морфологических особенностяхэндометриозаяичников,эндометриоидныходнакомеханизмыобразованийяичниковэтапенашегорецидивированияостаютсядоконцанеисследованными.Наданномиммуногистохимическогоцельюфенотипаисследованиярецидивирующихбылоизучениеэндометриоидныхобразований яичников и обоснование роли нарушений механизмов рецепцииэстрогена и прогестерона, процессов пролиферации, апоптоза и клеточнойадгезии в патогенезе заболевания.ОпределениепомощьюиммуногистохимическогоиммуногистостейнераBond-maxфенотипафирмыLeicaпроводилосьс(Германия)сприменением моноклональных антител (DAKO, UK, LabVision, USA): крецепторам эстрогена и прогестерона, маркеру пролиферативной активностиклетокнегистоновомубелкуKi-67,ингибиторуапоптозаВс1-2,проапоптотическому белку p53, белку межклеточной адгезии b-катенину.
Воснове выбора антигенов лежала оценка их функциональной активности как врамках контроля фундаментальных процессов пролиферативной активности,апоптоза, межклеточной адгезии, так и в отношении более специфическихмеханизмов, в частности, участие в эстроген- и прогестеронопосредованныхсигнальных каскадах. Экспрессию антител оценивали в эпителиальном и встромальном компонентах эндометриоидных образований яичников.117Намиизученрецидивирующимииммуногистохимическийивпервыефенотипвыявленнымипациентоксэндометриоиднымиобразованиями яичников (таблица 20).Таблица 20Экспрессия иммуногистохимических показателей в образцах срецидивирующими и впервые выявленными эндометриоиднымиобразованиями яичниковI группаII группаИзучаемыеДоверительнаяпараметры, %вероятность (p)РЭОЯЭОЯbcl-2p53ki67ERPRb-катенин59,09±5,0942,86±6,44[30;65][25;50]4,17±1,4019,29±1,84[5;10][15;25]25,83±3,9512,14±4,06[10;65][5;30]33,33±4,3220,71±4,92[10;70][10;35]30,56±3,9255,71±9,68[25;40][30;75]51,67±4,1438,57±4,82[30;60][30;45]p=0,039p=0,048p=0,042p=0,035p=0,055p=0,039Особую роль в прогрессировании заболевания играют нарушения врегуляции процессов апоптоза, антиапоптотических и пролиферативныхкаскадов.
Пролиферативная активность напрямую связана с ее агрессивностью,поэтому мы изучили экспрессию Ki-67, как важнейшего маркера для оценкиуровня пролиферации опухоли. Антитело Ki-67 позволяет идентифицироватьядерный антиген, который экспрессируется во всех клетках, вышедшихиз G0 фазы митоза, то есть дает возможность оценить пролиферативный118потенциал клеток образца ткани. Оценивая пролиферативную активность,уровень экспрессии белка Ki-67 в операционном материале рецидиваэндометриоза яичников варьировал от 10% до 65% (25,83±3,95%). При впервыевыявленном эндометриозе показатели изменялись в пределах от 5% до 30%(12,14±4,06%). В связи с ненормальным распределением величин по группам,для сравнения нами использовались непараметрические критерии.
Обнаруженызначимые различия в реакции Ki-67 между РЭОЯ и ЭОЯ (p=0,042 по критериюМанна-Уитни). Таким образом, для образцов тканей повторно оперированныхЭОЯ характерен более высокий (в 2,1 раза) пролиферативный потенциалв сравнениис образцами,персонализированномвпервыеанализевыявленнымиобращаетнасебя(рисуноквнимание8).Приналичиеположительной тесной связи между выраженностью экспрессии Ki-67 иуровнем опухолеассоциированного антигена СА-125.119абРисунок 8. Эндометриоз яичников. Экспрессия иммуногистохимическогомаркера Кi-67 при РЭОЯ (а) и ЭОЯ (б), х200.120Важноеместовпатогенезезаболеванияотводитсяизменениямрецепторов стероидных гормонов эндометриодных образований яичников.Согласно отдельным сообщениям, нарушенная экспрессия рецепторов половыхстероидных гормонов может приводит к недостаточной функции яичников, и,таким образом, повлиять на фертильность [79].
Экспрессия ядерных рецепторовк эстрогенамв ИГХ-позитивных клетках эпителиальногои стромальногокомпонента РЭОЯ в I группе изменялась от 10 до 70% (33,33±4,32%). Во IIгруппе выраженность экспрессии находилась в пределах от 10 до 35%(20,71±4,92%). При статистическом анализе выявлено, что в группе РЭОЯ иЭОЯ распределение маркера было отличным от нормального (p<0,05). Такимобразом,длядальнейшегонепараметрическиеанализакритерии.исследуемыхОпираясьнагруппполученныеприменялисьрезультаты,врецидивирующих ЭОЯ экспрессия ER достоверно выше, чем в образцах,полученных при впервые выявленном эндометриозе (критерий Манна-Уитни,p=0,035).Изучена экспрессия прогестероновых рецепторов в полученных образцахЭОЯ. Уровень экспрессии PR при рецидивировании эндометриоза яичникасоставил 30,56±3,92%.
Во II группе данный показатель изменялся от 30 до 75%(55,71±9,68%). Сравнительный анализ полученных данных показал, чтоэкспрессия прогестероновых рецепторов (PR) оказалась ниже в 1,8 раза приРЭОЯ при сравнении с аналогичными показателями впервые выявленногоэндометриоза (p=0,055) (таблица 21).Исходя из полученных данных, причиной повышенной пролиферацииэндометриоидных клеток могут быть выявленные нами нарушения в регуляцииих апоптоза и избыточная экспрессия ядерных рецепторов к эстрогенам,являющихсяважнымзвеномгормонозависимыхсигнальныхпутейпролиферативных каскадов.Наряду с показателями пролиферации нами оценены значения про- иантиапоптотических факторов.
Среди индукторов апоптоза наиболее изучен внастоящее время белок p53, тесно связанный с регуляцией транскрипции и121ростаклетки.Снижениеопосредованноактивностиспособствуетпроапоптотическогоиндукциимаркерапролиферативногоp53пулаэндометриоидных гетеротопий [226]. Уровень экспрессии проапоптотическогобелка p53 имел наиболее высокое значение в группе нерецидивирующегоэндометриоза яичников – 25%, наименьшее значение – 5% - отмечено прирецидивировании ЭОЯ. Средние показатели маркера в I группе составили –4,17±1,40%,воII–19,29±1,84%.Такимобразом,экспрессияпроапоптотического белка p53 при рецидивировании эндометриоза яичниковпочти в 4 раза ниже таковой при впервые оперированном эндометриозе, чтосвидетельствует о низком уровне апоптоза клеток очагов эндометриозаяичников (p<0,05).
Следовательно, наряду с повышением пролиферативнойактивностивэндометриоидныхобразованияхяичниковзначительноподавляются процессы апоптоза.Ключевой механизм апоптоза — регулирование распада ДНК с участиембелков семейства Bcl-2. Гиперэкспрессия Bcl-2 несет антиапоптотическийпотенциал в клетке и защищает ее от гибели (апоптическая устойчивость).Накопление онкопротеина Bcl-2 отмечено нами как в эпителиальном, таки в стромальном компоненте. Сравнительный анализ экспрессии ингибитораапоптоза Bcl-2 показал, что уровень его выше в образцах, исследуемых срецидивирующими ЭОЯ – 59,09±5,09% в отличие от пациенток с впервыевыявленным эндометриозом яичников - 42,86±6,44% (p=0,039).
Обращает насебявниманиевысокийуровеньмаркераВсl-2,чтопрепятствуетвосстановлению баланса в про- и антиапоптических сигнальных путях. Приэтом в группе с рецидивирующими эндометриоидными образованиямиэкспрессия ингибитора апоптоза bcl-2 (59,09±5,09%) превышает в 15 разэкспрессию индуктора апоптоза p53 (4,17±1,40%), p<0,05. Аналогичные данныепродемонстрированы во II группе, однако показатель p53 оказался выше в 2раза в сравнении с bcl-2 (42,86±6,44% vs 19,29±1,84%, p=0,068). Таким образом,экспрессия ингибитора апоптоза Bcl-2 выражена статистически значимо122больше, чем его индуктора p53, что свидетельствует о подавлении активностипроцессов апоптоза.Одним из перспективных направлений оценки инвазивного потенциалаявляется изучение взаимодействия клеток между собой и с внеклеточнымматриксом, которое регулируется молекулами межклеточной адгезии.
Особыйинтерес сегодня представляет b-катенин, поскольку помимо влияния наадгезивные свойства клетки он активно участвует и в других процессах,включая клеточный цикл и пролиферацию.Исследованиетканейэндометриозаяичниковпроводилосьс использованием антител к онкобелку b-катенину — маркеру межклеточнойадгезии. При иммуногистохимическом исследовании материала с антителами кb-катенинуобнаруженомембранноеидиффузноецитоплазматическоеокрашивание эпителиального компонента. Известно, что b-катенин играетзначимуюрольвэстроген-опосредованныхпроцессахврезультатевзаимодействия белка с рецепторами эстрогенов.Нами изучена экспрессия белка b-катенина в рецидивирующих и впервыедиагностированных эндометриоидных образованиях яичников (рисунок 9).Выявлена высокая экспрессия маркера межклеточной адгезии в I группепациенток – 51,67±4,14%, что превышает таковую во II группе - 38,57±4,82% (p= 0,039).
Данный факт свидетельствует об усилении процесса межклеточнойадгезии в рецидивирующих эндометриоидных образований яичника посравнению с нерецидивирующим вариантом. Нарушенная активация Wnt/bкатенина сигнального пути в регуляции процессов пролиферации и апоптозаспособствует развитию эндометриоидных гетеротопий посредством повышенияклеточной инвазии и резистентности к апоптозу, что приводит к развитиюфиброза при эндометриозе.123абРисунок 9.
Эндометриоз яичников. Экспрессия иммуногистохимическогомаркера b-катенина при РЭОЯ (а) и ЭОЯ (б), х100124Валидацияпрогностическихиммуногистохимическихмаркеровпроводилась на основании построения прогностических моделей бинарногоклассификатора с использованием ROC-кривых (рисунок 10).С цельювыявления диагностической значимости ИГХ параметров подсчитана площадьподкривой(AUC).Опираясьнаполученныерезультаты,наиболеечувствительными диагностическими тестами оказались ИГХ – маркеры p53 и bкатенин (площадь под кривой составила 0,75 и 0,78, соответственно).125Рисунок 10.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
