Диссертация (1174231), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Выбраны концентрации солей лития и натрия: 0,1; 0,2; 0,5и 1,0 мМ (рис. 12).Рисунок 12 — Воздействие различных концентраций солей лития и натрияна выживаемость культивированных зернистых нейронов мозжечкабез добавления глутамата66В перерасчете на элементарный литий раствор 0,1 мМ хлорида лития содержит 0,694 мг лития; 0,2 мМ хлорида лития содержит 1,388 мг лития; 0,5 мМ хлорида лития содержит 3,47 мг лития; 1 мМ хлорида лития содержит 6,94 мг лития.
Раствор 0,1 мМ карбоната лития содержит 1,388 мг элементарного лития; 0,2 мМ карбоната лития содержит 2,776 мг лития; 0,5 мМ карбоната лития содержит 6,94 мглития; 1 мМ карбоната лития содержит 13,88 мг лития. Раствор 0,1 мМ цитраталития содержит 2,082 мг элементарного лития; 0,2 мМ цитрата лития содержит4,164 мг лития; 0,5 мМ цитрата лития содержит 10,41 мг лития; 1 мМ цитрата литиясодержит 20,82 мг лития.
Раствор 0,1 мМ аскорбата лития содержит 0,694 мг элементарного лития; 0,2 мМ аскорбата лития содержит 1,388 мг лития; 0,5 мМ аскорбата лития содержит 3,47 мг лития; 1 мМ аскорбата лития содержит 6,940 мг лития.Во втором эксперименте соли лития и натрия добавляли в среду культивирования на 2-е сутки in vitro на весь срок культивирования (до 7 суток). На 6-есутки осуществлялось добавление в культуру глутамата в концентрации100 мкМ. На 7-е сутки производился подсчет клеток (рис.
13).Моделирование повреждения культур нейронов было вызвано глутаматом(Sigma, США, N.G-1626), который оказывал дозозависимый токсический эффект.Поскольку КЗН имеют рецепторы глутамата, а к 7-му дню in vitro происходит ихсозревание, их гиперстимуляция с помощью экзогенного глутамата вызывает гибель КЗН, что является удобной моделью нейродегенации (Стельмашук Е. В., 2010).В исследовании использовали подсчет клеток при действии предполагаемых нейропротекторов, добавляя в среду токсические концентрации глутамата (100 мкМ).Состояние культур контролировали ежедневно и на каждом этапе эксперимента путем визуального просмотра в инвертированном микроскопе при фазовом контрасте.
Количественную оценку выживаемости клеток производилис помощью прямого подсчета нейронов с неизмененной морфологией в пяти полях зрения. Такой подсчет дает адекватную оценку выживаемости нейронов повсему диаметру 96-луночного планшета. Клетки-зерна легко идентифицироватьприжизненно как небольшие, 7–10 мкм в диаметре, округлые или овальные нейроны. При окраске фиксированных культур трипановым синим хорошо видны67ядра культивированных зернистых нейронов мозжечка, занимающие большуючасть тел нейронов и окруженные тонким ободком цитоплазмы (рис. 14).Рисунок 13 — Воздействие различных концентраций солей лития и натрияна выживаемость культивированных зернистых нейронов мозжечкав условиях глутаматного стрессаабРисунок 14 — Первичная диссоциированная фиксированная культураклеток мозжечка: а — контроль, б — обработка в течение 24 ч глутаматом.Зеленые стрелки указывают на зернистые нейроны с нормальной морфологией,желтые — на ядра глиальных клеток, красные — на пикнотические ядрапогибших нейронов.
Масштабный отрезок 15 мкм68Для каждого вещества было выполнено 5 экспериментов, при этом на каждую точку брали не менее 3 культур, в каждой из которых фотографировали ипросчитывали по 5 последовательных полей. Количество нейронов с неизмененной морфологией в контрольных культурах принимали за 100% выживаемости.Все среды и добавки к ним, использованные для клеточных культур, былиполучены от Biochrom KG (Германия). Эфир тетраметилродамина — от Molecular Probes (США). Другие реагенты — от Sigma Chemicals (Германия).2.2.5.
Статистический анализДля настоящего анализа были использованы электронные таблицы Excel,программа Statistica 10. Статистический анализа полученных результатов проведен с использованием теста ANOVA с поправкой Бонферрони и теста Данна.Отличия между группами считали статистически значимыми при p < 0,05. Результаты выражали как среднее ± стандартное отклонение. Результаты исследований для каждой соли представлены в виде соответствующих эмпирическихфункций распределения (э. ф. р.) значений выживаемости нейронов при различных условиях, затем более подробно рассматривались отдельные серии экспериментов. Вычисление эмпирических функций распределения позволяет обобщатьрезультаты независимых серий экспериментов и применять один из наиболеечувствительных критериев статистической значимости — критерий Колмогорова — Смирнова.69Глава 3.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ3.1. Оценка фармакокинетических параметров биораспределения литияпри приёме органических солей3.1.1. Биораспределение лития при приёме аскорбата литияНами была проведена оценка фармакокинетических параметров аскорбаталития в биосубстратах крыс после его введения per os экспериментальным животным в дозе 1 мг/кг (табл. 3). В результате фармакокинетического эксперимента были получены фармакокинетические кривые, т. е. зависимости концентрацийот времени для гомогенатов тканей различных органов.Бескамерный анализ позволяет охарактеризовать повсеместно используемые фармакокинетические параметры соединения: максимальная концентрациялития в биосубстрате (Cmax), время достижения максимальной концентрации(tmax), последняя измеренная концентрация лития (Clast), площадь под кривой(AUCt), среднее время удержания (MRTt), наклон участка финального выведения(Lz), период полувыведения (T1/2), клиренс (CL).
Параметры бескамерной модели были рассчитаны для всех исследованных биосубстратов на основании соответствующих фармакокинетических кривых (табл. 4).Визуальный анализ фармакокинетической кривой (рис. 15) показал, чтоCmax лития в цельной крови после его приема per os в дозе 1 мг/кг произошла через 1,5 ч и составила 50,59 мкг/л. Lz, включающий в себя последние 3–4 точкифармакокинетической кривой для цельной крови, составил 0,005 1/ч. T1/2 аскорбата лития после приема per os — 140,65 ч.Для цельной крови характерно низкое значение наклона участка финального выведения и высокое — периода полувыведения.
Продолжительный периодполувыведения создает условия для длительного насыщения тканей литием, чтопозволяет создавать высокие концентрации в органах и тканях.Таблица 3 — Фармакокинетические параметры для бескамерной модели при введении аскорбата лития в дозе 1 мг/лВремяКонцентрации лития в биосубстратах животных, определенные в эксперименте, мкг/лпослевведенияЦельнаяГоловнойЛобнаяаскорбатакровьмозгдоляПеченьСердцеАортаЛегкиеПочкиСелезенкаНадпочеч- Бедреннаяникикостьлития45 мин35,59 ± 4,42 25,81 ± 4,28 38,97 ± 4,12 42,69 ± 4,78 21,18 ± 4,04 22,31 ± 5,48 20,06 ± 4,13 30,62 ± 3,59 28,28 ± 4,05 35,86 ± 4,77 18,75 ± 3,881ч50,39 ± 5,32 39,31 ± 4,53 51,94 ± 4,37 68,18 ± 5,98 32,26 ± 8,71 31,60 ± 5,65 29,84 ± 3,71 48,85 ± 4,76 34,81 ± 3,86 39,51 ± 3,42 25,99 ± 3,263ч42,99 ± 5,56 32,81 ± 6,96 47,83 ± 3,95 87,19 ± 4,99 61,79 ± 5,35 32,89 ± 4,50 25,47 ± 4,37 38,26 ± 5,49 38,48 ± 4,44 46,18 ± 4,14 38,73 ± 4,646ч40,62 ± 4,37 33,67 ± 4,85 45,46 ± 5,12 50,28 ± 4,55 60,29 ± 4,89 31,77 ± 4,43 27,68 ± 4,85 37,26 ± 4,10 37,69 ± 2,49 46,45 ± 3,62 31,53 ± 2,0212 ч37,32 ± 3,11 30,54 ± 4,16 45,55 ± 3,84 43,81 ± 5,01 52,65 ± 3,83 32,84 ± 4,75 30,89 ± 5,42 34,82 ± 3,42 44,72 ± 5,36 52,47 ± 4,17 31,74 ± 5,8124 ч35,08 ± 3,86 29,69 ± 4,53 43,61 ± 3,88 38,81 ± 3,92 44,17 ± 6,04 23,57 ± 4,56 23,11 ± 5,39 32,42 ± 4,43 39,59 ± 4,07 38,18 ± 4,29 42,42 ± 6,2448 ч33,71 ± 3,13 23,99 ± 6,50 40,50 ± 4,81 30,41 ± 5,62 28,97 ± 4,77 24,21 ± 4,49 17,46 ± 3,68 32,02 ± 4,64 25,56 ± 5,62 33,95 ± 5,89 31,10 ± 2,04Контроль 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 0,79 35,59 ± 4,77 35,59 ± 0,79701 ч 30 мин 50,59 ± 5,74 46,51 ± 5,12 50,65 ± 3,65 93,39 ± 6,03 65,40 ± 4,54 39,19 ± 4,43 31,82 ± 3,71 45,18 ± 5,21 36,03 ± 4,44 45,58 ± 4,13 30,78 ± 3,6971Таблица 4 — Фармакокинетические параметры бескамерной модели аскорбаталития при введении в дозе 1 мг/лБиосубстратCmax,мкг/лtmax, чClast,AUCt, MRTt,мкг/л мкг/л×ччLz, 1/ч T1/2, ч CL, л/ч Vd, лЦельная кровь50,591,5033,71175022,90,005140,650,0295,91Головной мозг46,511,5023,99140622,20,00796,710,0537,34Лобная доля51,941,0040,51209423,30,003209,710,0175,27Сердце65,401,5028,98212320,60,01740,870,0653,85Аорта39,201,5024,22130022,20,00889,620,0567,30Лёгкие31,821,5017,47114421,30,01066,590,0898,51Печень93,391,5030,41203120,30,01838,910,0673,75Почки48,851,0032,02162523,10,004179,310,0256,53Селезёнка44,7312,0025,56174921,70,00973,650,0565,95Надпочечники52,4712,0033,95196922,00,00884,480,0414,99Бедренная кость42,4324,0031,10171023,90,002451,440,0117,41Моча19,126,2010,5663821,70,01256,330,17214,00Рисунок 15 — Фармакокинетическая кривая содержания лития в цельной кровипри введении аскорбата лития72При анализе фармакокинетической кривой (рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
