Диссертация (1174186), страница 25
Текст из файла (страница 25)
1 – фибриллы коллагена. Электронная микроскопия. IMG_[MAG]_16400 [1].jpgВ группах, облученных с препаратами Декстралинк, Риболинк иХитолинкстроениероговичныхпластинвнешнебылоблизкимкультраструктуре, описанной в группе 3 (УФО + рибофлавин изоосмотический).3-и сут после УФ сшивания в группах 4, 5 и 6 также характеризовались«разреженностью»ламеллярнойструктуры,гденарядусозначимымснижением плотности волокон на 28% (р<0,05), 26% (р<0,05) и 20%,соответственно, наблюдалось увеличение диаметра фибрилл коллагена на 9,6%,9,3% и 6% (Рисунок 22 – 24). 90 сут спустя прослеживалось ясноеразграничение межламеллярныхслоев,вменьшейстепенинаблюдали«уреженность» расположения коллагеновых фибрилл, которые сохранялипараллельность и правильную форму, относительно исходных результатов,полученных на 3-и сут после рибофлавин-ультрафиолетового сшиванияроговицы.141Рисунок 22 - Коллагеновые фибриллы средних слоев стромы крыс после УФоблучения роговицы с раствором Декстралинк (группа 4, 90 сут).1 – фибриллы коллагена.
Электронная микроскопия. 990. IMG_[MAG]_16395 [1].jpgРисунок 23 - Коллагеновые фибриллы средних слоев стромы крыс после УФоблучения роговицы с раствором Риболинк (группа 5, 90 сут).1 – фибриллы коллагена, 2 – ламелла. Электронная микроскопия.[1] .jpg994. IMG_[MAG]_17287142Рисунок 24 - Коллагеновые фибриллы средних слоев стромы крыс после УФоблучения роговицы с раствором Хитолинк (группа 6, 90 сут).1 – фибриллы коллагена. Электронная микроскопия. 991. IMG_[MAG]_17325 [1].jpgТак, количество фибрилл роговицы крыс на площади 500×500 нм в 4-ойгруппе было ниже нормы на 6%, в 5-ой – на 10,7% и в 6-ой – на 13%.
У этихже животных (4, 5 и 6 группы) через 90 сут также определяли установленное вранний срок увеличение диаметра фибрилл роговичного коллагена на 10%,8,5% и 4,5%, соответственно (Рисунок 25). Однако результаты не имелистатистически значимых отличий от контроля.На рисунке 26 представлено нормальное распределение диаметраколлагеновых фибрилл роговицы крыс с огибающей линией. Настоящееисследование показало, что наибольшее количество фибрилл через 90 сутпосле УФ облучения без рибофлавина (группа 2) имело диаметр в интервале34-36 нм, в группах 3 и 4 (после рибофлавин-УФ-воздействия) – 36-40 нм, вгруппах 5 и 6 – 36-38 нм.143АБВГДЕРисунок 25 - Коллагеновые фибриллы средних слоев стромы роговицы крыс.Электронная микроскопия. А – в норме; 90 сут после УФ облучения:Б – без рибофлавина, В – с раствором Декстралинк, Г – рибофлавинизоосмотический, Д – Риболинк, Е – Хитолинк.Тогда как, распределение максимального количества измерений коллагеновыхволокон в норме было в пределах 34-38 нм, что статистически доказывает онаблюдаемом увеличении диаметра фибрилл через 90 сут после УФ облученияроговицы в группах, где использовались рибофлавинсодержащие растворы.
Этоизменение в структуре коллагена сопровождается снижением количества фибриллна единице площади стромальной ламелли, более выраженным в ранний период(3 сут) после УФ воздействия.144142536Рисунок 26 - Гистограммы нормального распределения диаметра коллагеновыхфибрилл.По оси абсцисс диаметр коллагеновых фибрилл (нм), по оси ординат – количествоизмерений диаметра фибрилл.1 – норма; 90 сут после УФ облучения: 2 – без рибофлавина, 3 – с растворомрибофлавина изоосмотического, 4 – Декстралинк, 5 – Риболинк, 6 –Хитолинк.145Таким образом, проведенные электронномикроскопические исследованиясредних слоев стромы роговицы у крыс показали, что ультрафиолетовоевоздействие (370 нм) на роговицу без рибофлавина не оказывало значимоговлияния на диаметр коллагеновых фибрилл, способствовало уменьшению ихколичестванаизмеряемойплощадиипоявлениюнеоднородностифибриллярной последовательности.Ультрафиолетовое сшивание роговицы крыс в присутствии раствороврибофлавина (изоосмотический, Декстралинк, Риболинк, Хитолинк) приводилокувеличениюфибриллярногодиаметраиснижениюплотностиинтраламеллярной упаковки фибрилл, наиболее выражено наблюдаемое вранний срок (3 сут) после воздействия.
Выявленные особенности измененияультраструктуры коллагеновых фибрилл, вероятно, являются одним изфакторов повышения прочностных свойств роговицы. Изменения плотностифибриллярной упаковки и диаметра фибрилл после УФ облучения срастворами рибофлавина (изоосмотический, Декстралинк, Риболинк) не имелисущественных отличий между собой.4.5. Морфофункциональная характеристика роговицы крыс после ееультрафиолетовогооблучениясофтальмологическимирастворамирибофлавинаИзучение динамики морфологических изменений роговицы крыс спомощью световой микроскопии на 3, 7, 14, 30 и 90 сут после УФ облучения ирибофлавин-УФ-сшивания (3 мВт/см 2, 10 мин) выявило следующее.
Во всехопытных группах примерно на 3-4 сут после воздействия наблюдалось полноевосстановлениеэпителия,механическиудаленногопередвыполнениемпроцедуры сшивания роговицы. Так, в группе после УФ облучения роговицыбез рибофлавина на 3 сут определяли восстановление эпителиального покрова.В строме наблюдали признаки небольшого отека во всех слоях.146Рисунок 27 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 3 сут послеУФ облучения.Врастание сосудов встрому роговицы.Окраскагематоксилином иэозином.АБРисунок 28 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 7 сут послеУФ облучения.Отек стромыроговицы.А – в центральнойзоне.Б – в периферическойзоне.Окраскагематоксилином иэозином.147В периферических участках роговицы обнаруживали новообразованные сосуды,врастающие в поверхностные слои стромы в направлении к центру роговицы(Рисунок 27).На 7-е сут явления отека стромы роговицы сохранялись: в центральнойзоне этот процесс был несущественным (Рисунок 28А), в то время как впериферической – значительным (Рисунок 28Б).
Кроме того, в периферическойзоне определяли признаки эндотелиальной дистрофии, а также нарушенияцелостностидесцеметовоймембраны. В поверхностныхслояхстромыроговицы наблюдали рост сосудов.Через 14 сут на фоне сохранения отека стромы патологические измененияв роговице продолжали нарастать:эндотелиальная дистрофия иростновообразованных сосудов, который распространялся уже на центральную зонуроговицы,приэтомопределяласьнеравномерностьвраспределениикератоцитов, по видимому, за счет гибели части клеток (Рисунок 29). Крометого, нарушалась целостность боуменовой мембраны, а в базальном слоеэпителия обнаруживались клетки с атипичной формой ядер.Через 30 суток после УФ облучения оптической оболочки безфотосенсибилизатора(рибофлавин)выявлялипрогрессированиевышеописанных морфологических изменений, затрагивающих строму на всюглубину, а также эпителий и эндотелий роговицы.В конечный срок эксперимента (90 сут) обнаруживали тотальнуюморфологическую инволюцию роговицы, приводящую к полной потере еенативной структуры за счет прорастания в строму гладкомышечной ткани(Рисунок 30).Таким образом, недостаток рибофлавина в строме или его отсутствие вусловиях ультрафиолетового облучения роговицы, в частности при длиневолны 370 нм и мощности 3 мВт/см2, вызывает каскад патоморфологическихсобытий необратимого характера.148АБРисунок 29 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 14 сут послеУФ облучения.А – отек стромыроговицы, нарушениецелостностибоуменовой мембраны,новообразованныекапилляры в переднихслоях роговицы.Окраска по ВанГизону.Б – признакиэндотелиальнойдистрофии.
Окраскагематоксилином иэозином.Рисунок 30 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 90 сут послеУФ облучения.Дезорганизацияструктуры стромыроговицы:разрыхлениеповерхностных слоев,прорастание в стромугладкомышечнойткани.Окраска по ВанГизону.149Ультрафиолетовое сшивание роговицы в присутствии рибофлавинаизоосмотического показала следующее. Через 3 сут после воздействия вроговицебольшинстваэкспериментальныхживотныхобнаруживалиморфологические изменения в виде отека стромы роговицы и небольшойполиморфноклеточной инфильтрации.
В единичных случаях наблюдалилокальное нарушение структуры десцеметовой мембраны. В эпителиироговицы определяли все слои, однако в единичных случаях количествослоев эпителиальных клеток было несколько уменьшено (Рисунок 31).На 7-е сут после рибофлавин-УФ-сшивания клеточная инфильтрациястромы роговицы уменьшалась, но отек пучков коллагеновых волоконсохранялся. В эпителии роговицы эти изменения были менее выражены(Рисунок 32).Через 14 сут после экспериментального УФ кросслинкинга роговицы вовсех слоях роговицы определяли примерно такую же морфологическуюкартину, что и в предыдущий срок наблюдений: набухание коллагеновыхволокон стромы роговицы. Восстановление плотности кератоцитов неотмечали (Рисунок 33).На 30-е сут после ультрафиолетового сшивания роговицы в стромероговицы сохранялся отек между пучками коллагеновых волокон.
Такжеобнаруживали некоторое утолщение десцеметовой мембраны. При этом в 2 -хобразцах гистопрепаратов эндотелиоциты образовывали прерывистый слойза счет деструкции единичного количества клеток (Рисунок 34).Наблюдения в завершающий срок эксперимента (90 сут) существенныхморфологическихпатологию,неизмененийвыявили.встромеОпределялироговицы,небольшиесохраняющимися признаками отека (Рисунок 35).указывающихучасткистромынас150Рисунок 31 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 3 сут послеУФ сшивания срибофлавиномизоосмотическим.Отек стромыроговицы.Окраска по ВанГизону.Рисунок 32 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 7 сут послеУФ сшивания срибофлавиномизоосмотическим.Отек стромыроговицы.Окраска по ВанГизону.Рисунок 33 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 14 сут послеУФ сшивания срибофлавиномизоосмотическим.Отек стромыроговицы.Окраска по ВанГизону.151Рисунок 34 Гистологическаякартина роговицыкрыс на 30 сут послеУФ сшивания срибофлавиномизоосмотическим.Отек стромыроговицы.Окраскагематоксилином иэозином.Рисунок 35 Гистологическаякартина роговицы крысна 90 сут после УФсшивания срибофлавиномизоосмотическим.Сохранялось утолщениедесцеметовоймембраны.Окраскагематоксилином иэозином.В начальный срок наблюдения (3 сут) после УФ облучения роговицы сприменением средства Декстралинк в качестве фотосенсибилизатора в роговицеопределялиполностьювосстановленныйэпителиальныйпокровсдифференциацией слоев.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
