Диссертация (1174186), страница 24
Текст из файла (страница 24)
Так, на 4-е сут в отмеченных группахпревышение нормы составляло 48% и 38%, соответственно, а на 14-е былоуже не столь значительным – только 28% и 11%.133На протяжении всего срока наблюдения статистически значимойразницы роста параметров светосуммы ХЛ в 4-ой группе (Epi-Off) выявленоне было. Можно лишь отметить увеличение показателя на 31%, по сравнениюс нормой, через 1 ч после деэпителизации.Таким образом, УФ облучение роговицы способствовало транзиторномуповышениюосновныхпараметровжелезоиндуцированнойхемилюминесценции супернатантов из гомогенатов глазного яблока крысы.Приэтомувеличениеабсолютныхзначенийжелезоиндуцированнойхемилюминесценции, в сравнении с исследованиями ПОЛ в роговице (раздел4.2), свидетельствовало об усилении процессов пероксидации липидов нетолько в корнеальной ткани, но и в оболочках глазного яблока.
В группахживотных, где УФ облучение роговиц производилось в присутствиирибофлавина, отмечали менее выраженный рост параметров ХЛ, очевидно, засчет антиоксидантных свойств препарата.СодержаниеТБК-реагирующихпродуктоввсупернатантахгомогенатов глазных яблок крыс после УФ облучения и деэпителизациироговицыУровень ТБК-рп в супернатантах гомогенатов глазного яблока крыспосле воздействия (1 ч) УФ излучения на роговицу значимо увеличивался на44% (р<0,05). В условиях УФ облучения в присутствии фотосенсибилизатора(рибофлавин) регистрировали прирост метаболитов ПОЛ, который составил31% по отношению к норме, однако при этом статистически достоверныхразличий не наблюдали.Уже через сутки в экспериментальных группах 2 и 3, как и впредыдущем исследовании гомогенатов роговиц (раздел 4.2) содержание ТБКрп в тканях глазного яблока уменьшалось, достоверно превосходя норму на25% и 19%, соответственно (Таблица 22).
На 4-е сут величина исследуемогопоказателя продолжала снижаться, отличаясь от контроля, соответственно, на13420% и 15% (Рисунок 18). В завершении эксперимента на 7-14 сутконцентрация ТБК-рп в супернатантах из глазных гомогенатов животных(группы 2 и 3) была в пределах нормы.Таблица 22 - Динамика уровня ТБК-реагирующих продуктов в супернатантахгомогенатов глазных яблок крыс после УФ облучения и деэпителизациироговицы, (мкмоль/л, M±σ)Срок наблюденияГруппа1ч1 сут4 сут7 сут14 сут1Интактные(контроль)2УФО безрибофлавина9,4±0,5* 8,5±1,18,2±0,5 7,1±0,4 7,0±0,93УФО +рибофлавин8,8±0,48,1±0,77,8±1,0 6,6±1,2 6,9±0,84Деэпителизациябез УФО6,6±0,86,8±0,96,7±0,5 7,1±1,0 6,5±0,86,8±0,4* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.Величина ТБК-рп в 4-ой группе животных, где производилась толькодеэпителизация роговицы, в течение всего срока наблюдений сохранялась науровне интактных животных.Следуетотметить,железоиндуцированнойХЛчтоабсолютныесупернатантовзначениягомогенатовпараметровроговицисодержащихся в них ТБК-рп уступали таковым при исследовании тканейглазного яблока.
Это может быть связано с тем, что гомогенаты последнихсодержат различные по структуре окулярные ткани и многочисленныеклеточные фрагменты, которые в результате метаболизма после корнеальногоУФ облучения in vivo могли быть охвачены заметно усилившимися процессамисвободно-радикального окисления.135150*%100500Контроль1чУФО1 сутУФО+рибофлавин4 сутEpi-Off7 сут14 сутРисунок 18 - Содержание ТБК-реагирующих продуктов в супернатантахгомогенатов глазных яблок крыс после УФ облучения и деэпителизации роговицы(% к контролю).* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.Таким образом, воздействие ультрафиолета на роговицу во всехисследованных группах инициировало на начальном этапе эксперимента (1 ч 1 сут) активацию процессов свободно-радикального окисления в тканях глаза,которые проявлялись в росте спонтанной светимости, амплитуды медленнойвспышкиисветосуммыжелезоиндуцированнойилюминолзависимойхемилюминесценции, а также в увеличении уровня ТБК-реагирующихпродуктов в супернатантах гомогенатов роговиц и глазного яблока.
Влияниядеэпителизации роговицы на исследованные показатели практически ненаблюдали.На 4-7 сут эксперимента значения хемилюминесценции и ТБК-рп,возросшие в активную фазу (1 ч - 1 сут) после УФ воздействия,демонстрировали тенденцию к нормализации, а на 14 сут – практически полное136восстановление.Результатыисследований,вцелом,показалисхожуюдинамику изменений параметров ХЛ, закономерно отражающих интенсивностьпроцессов свободно-радикального окисления, и, образующихся при этомметаболитов во влаге передней камеры, супернатантах гомогенатов роговиц иглазных тканей.Комбинированноеспособствоваломенееультрафиолетовоевыраженнойоблучениеактивациисрибофлавиномсвободно-радикальногоокисления в тканях глаза на протяжении всего срока наблюдений.
А по своемувлияниюнапоказателихемилюминесценции,используемыеофтальмологические растворы (рибофлавин изоосмотический, Декстралинк,Риболинк и Хитолинк) не имели между собой значимых отличий.4.4.Влияниеультрафиолетовогооблученияроговицысофтальмологическими растворами на состояние коллагеновых фибриллстромыДля оценки состояния коллагеновых фибрилл роговицы крысы после еестандартного УФ облучения дозой 3 мВт/см 2 в течение 10 мин в присутствииофтальмологическихрастворовпроведеныисследования стромы. Доза УФ воздействияроговицыкрысы(176,2±8,2мкм)иэлектронномикроскопическиеподобрана с учетом толщинысоответствуетстандартномуУФкросслинкингу, применяемому у человека.
Эксперименты проведены в 6группах; распределение животных представлено в таблице 23. Исследовалиизменения диаметра фибрилл и плотность фибриллярной «упаковки» волокончерез 3 и 90 сут после УФ воздействия.Электронномикроскопическиеисследованиявыявилиследующее.Стромальные ламелли роговицы интактных животных визуализировались ввиде продольных полос характерной структуры толщиной около 1 мкм(Рисунок 19).
Они были плотно упакованы коллагеновыми фибрилламиодинаковой округлой формы диаметром около 35,59±2,33 нм, которые имелиупорядоченное чередование в ламеллярных слоях роговицы.137Таблица 23 - Распределение животных в группах и данные, включенные встатистический анализКоличество, nИсследуемые группыкрысроговицмикрофибрилл дляфотографий подсчета диаметра1Интактные (контроль)4841202УФО без рибофлавина48412034841204УФО / рибофлавинизоосмотическийУФО / Декстралинк483985УФО / Риболинк4841206УФО / Хитолинк484120Плотность коллагеновых волокон роговицы крыс в норме, установленная намина участках площадью 500×500 нм (0,25 мкм 2), была равной 130,5±11,98 ед(или фибрилл) (Таблица 24).Рисунок 19 - Коллагеновые фибриллы средних слоев стромы роговицы крыс внорме (группа 1).1 – фибриллы коллагена, 2 – ламелла.
Электронная микроскопия.138Структура ламеллей роговицы на 3 сут после воздействия на нееультрафиолетом без рибофлавина была менее однородной, при этомсохранялась визуализация межламеллярных границ (Рисунок 20). Волокнаколлагена упакованы менее плотно – их количество на площади 0,25 мкм 2было на 18% меньше, чем в интактной группе, что, вероятно, связано спослеоперационнымотекомроговицы.Через90сутплотностьфибриллярной упаковки волокон восстановилась по сравнению с начальнымпериодом после УФ облучения (3 сут).
На микрофотографиях определялиокруглую форму фибрилл, диаметр которых превышал данные контроля на3,7%, через 90 сут этот показатель значимо не изменялся, превышая нормуна 3%.Таблица 24 - Влияние ультрафиолетового облучения роговицы крыс на плотностьфибриллярной упаковки волокон и диаметр фибрилл коллагена (M±σ)ГруппаДиаметр фибрилл(нм)3 сут1Интактные (контроль)2УФО безрибофлавинаУФО / рибофлавинизоосмотический34УФО / Декстралинк5УФО / Риболинк6УФО / Хитолинк90 сут35,59±2,33Плотностьволокон(ед / 0,25 мкм2)3 сут90 сут130,5±11,9836,92±2,88 36,67±2,42 106,90±8,97 124,90±5,0039,62±3,21 39,46±3,08 102,05±7,05 118,05±7,3839,04±2,70 39,31±3,30 93,31±6,71* 122,31±7,9238,90±2,92 38,63±2,11 96,55±8,12* 116,55±9,3437,78±3,16 37,22±3,25 104,55±10,02 113,55±9,34*р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.139Рисунок 20 - Коллагеновые фибриллы средних слоев стромы крыс после УФоблучения роговицы без рибофлавина (группа 2, 90 сут).1 – фибриллы коллагена.
Электронная микроскопия. 955. IMG_[MAG]_16661 [1].jpgУльтраструктура коллагена роговицы на 3 сут после УФ облучения вприсутствии раствора изоосмотического рибофлавина (группа 3), наряду сокруглостью поперечного сечения фибрилл и их равномерным расположением,характеризовалась снижением компактности упаковки волокон (Рисунок 21).Количество фибрилл на измеряемом участке уменьшилось на 21,5%, всравнении с контролем, хотя статистически значимых отличий при этом неустановлено. В этих же образцах выявлено укрупнение фибриллярногодиаметра на 10%. Через 90 сут на электронограммах ясно визуализировалиправильность формы фибрилл, упорядоченность их расположения в ламелляхколлагена с четкими межпластинчатыми границами.
В этот же срок снижениеплотности волокон коллагена было менее выраженным – 118,05±7,38 ед / 0,25мкм2, что на 9% меньше, чем в интактной группе. При этом, выявленное вранний срок увеличение диаметра фибрилл, сохранялось (Рисунок 25).140Рисунок 21 - Коллагеновые фибриллы средних слоев стромы крыс после УФоблучения роговицы с раствором изоосмотического рибофлавина (группа 3, 90сут).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
