Диссертация (1174186), страница 23
Текст из файла (страница 23)
Деэпителизация роговицы (группа 4) существенно не влияла наисследуемый показатель. В продолжение всего эксперимента (1-14 сут)статистически значимых отличий с контролем не обнаружено.Амплитуда медленной вспышки, описывающая интенсивность окислениялипидов, демонстрировала аналогичную, но чуть менее выраженную, динамикуроста спустя 1 ч после УФО – на 62%, через 1 и 4 сут – на 67% и 77% (р<0,05),соответственно. Вероятно, перекисному окислению могут подвергаться липидыслезной пленки роговицы или мембран кератоцитов.250%*200********150Спонтанная светимостьАмплитуда медленной вспышкиСветосумма10050О-14сутибофл1УФО+часрибофл1УФО+сутрибофлУФ4сО+утрибофлУФ7сО+утрибофл14сутEpi-Off 1часEpi-Off 1сутEpi-Off 4сутEpi-Off 7сутEpi-Off 14сутут14УФО+рУФУФО7сутУФО4сут1сУФОас1чОРисунокУФИнтактные0Показателижелезоиндуцированнойхемилюминесценциисупернатантов гомогенатов роговиц кролика после корнеального УФоблучения и деэпителизации (% к контролю).* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.Начиная с 7-х и до 14-х сут отмечали характерное снижение изучаемогопоказателя.
УФ облучение роговицы в присутствии рибофлавина также126способствовало повышению данного значения ХЛ на протяжении всего сроканаблюдений,прикоторомдостовернаяразницасконтролемрегистрировалась на 4 сут эксперимента на 86% (р<0,05), с последующим (на14 сут) падением величины показателя практически до нормы. Ростамплитуды медленной вспышки наблюдали в группе животных с удален нымэпителием роговицы на 35% непосредственно после деэпителизации (1 ч). Вдальнейшем в продолжение 14 сут эксперимента исследуемый параметр былв пределах контрольных данных при отсутствии достоверных отличий сними.Рисунок 15 - Хемилюминограмма железоиндуцированной хемилюминесценциисупернатантов гомогенатов роговиц кролика после корнеального рибофлавин-УФоблучения через 1 ч – 2, 4 сут – 3, 14 сут – 4, интактные – 1.ХЛ светосуммы свечения супернатантов гомогенатов роговиц после ихУФ облучения in vivo показала статистически достоверный рост на 70%127(р<0,05) относительно интактных кроликов.
Светосумма наиболее интегральноотображает состояние процессов СРО, демонстрируя их значимую активацию втканях роговицы, очевидно, вызванную действием ультрафиолета (Рисунок 14,15). В последующий период наблюдений (до 14 сут) регистрировалипостепенное приближение показателя к значениям интактных животных,достигающим нормы к завершению срока эксперимента.После УФ облучения роговицы с рибофлавином светосумма менеевыражено, чем в группе 2, превосходила данные контроля – через 1 ч на 56%,(р<0,05),обладаяприэтомсходнойдинамикойснижения.Наличиерибофлавина в процессе УФ воздействия на роговицу способствовалоприближению светосуммы ХЛ к уровню физиологической нормы уже на 7-14сут (Рисунок 14).
Однако, нельзя исключить факт присутствия рибофлавина встроме роговицы через 1 час после процедуры, следы которого могут «гасить»ХЛ.Анализ параметров ХЛ гомогенатов роговиц непосредственно после ихдеэпителизации (группа 4) показал незначительный рост значений амплитудымедленной вспышки на 35%, спонтанной светимости на 22%, светосуммы на26%, позднее через сутки и к окончанию срока наблюдений (14 сут) указанныепоказатели находились на уровне контроля.Таким образом, ультрафиолетовое облучение роговицы глаза кролика безфотосенсибилизаторавызывалоростосновныхпараметровжелезоиндуцированной хемилюминесценции супернатантов из роговичныхгомогенатов (спонтанной светимости, амплитуды вспышки и светосуммысвечения), указывающий как на активацию свободно-радикального окисления втканях роговицы, так и на усиление процессов ПОЛ, которые менее активнопротекают в присутствии рибофлавина.
Это связано с участием последнего вметаболизме окислительно-восстановительных взаимодействий в организме.Эта особенность рибофлавина, по всей видимости, нивелирует интенсивностьпроцессов СРО в использованной модельной системе. Кроме этого возможноприсутствие следов рибофлавина в роговице после выполнения процедуры УФ128кросслинкинга. В ходе эксперимента отмечали постепенное снижение значенийисследуемых величин, которые к концу срока наблюдений были наиболееприближены к параметрам интактных животных. Деэпителизация роговицы невызывала значимых изменений показателей ЖИ ХЛ.Содержание ТБК-реагирующих продуктов в супернатантах гомогенатовроговиц кролика после корнеального УФ облучения и деэпителизацииУровеньТБК-реагирующихпродуктов(ТБК-рп)всупернатантахгомогенатов роговиц через 1 ч после УФ воздействия (без рибофлавина) нароговую оболочку кролика достоверно превышал показатели нормы на 26%(р<0,05). В дальнейшем (через 1 сут) наблюдалось уменьшение концентрацииметаболитов ПОЛ и их постепенное снижение до уровня интактных животных(4-14 сут).
Однако полученные результаты этого периода наблюдений не имелистатистически значимых различий по сравнению с контролем (Таблица 20).Таблица 20 - Динамика уровня ТБК-реагирующих продуктов в супернатантахгомогенатов роговиц кролика после УФ облучения и деэпителизации (мкмоль/л,M±σ)ГруппаСрок наблюдения1ч1 сут4 сут7 сут14 сут1Интактные(контроль)2УФО безрибофлавина7,05±0,2* 6,30±0,6 5,90±0,4 5,95±0,8 5,70±0,93УФО+ рибофлавин6,35±0,5 6,05±0,6 5,80±0,5 5,60±0,7 5,65±0,84Деэпителизациябез УФО5,80±0,4 5,80±0,7 5,50±0,9 5,70±0,9 5,85±0,75,60±0,3* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.129У животных, роговицы которых были облучены ультрафиолетом в присутствиирибофлавина (группа 3), непосредственно после процедуры также определялиувеличение содержания ТБК-активных продуктов в корнеальных супернатантахна 13% (до 6,35 мкмоль/л).
Очевидно, влияние рибофлавина несколькокомпенсирует негативные последствия УФ излучения (Рисунок 16). С 4 по 14 сутимелась тенденция к снижению возросших в ходе эксперимента значений ТБК-рп.При этом достоверных отличий с показателями группы интактных животныхустановлено не было.*%100500Контроль1чУФОУФО+рибофлавин1 сут4 сутEpi-Off7 сут14 сутРисунок 16 - Содержание ТБК-реагирующих продуктов в супернатантахгомогенатовроговицкроликапослекорнеальногоУФоблученияидеэпителизации in vivo (% к контролю).* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.Удаление эпителия (Epi-Off) на содержание ТБК-рп в тканях роговицыпрактически не влияло. Соответственно, содержание продуктов ПОЛ внадосадочной жидкости из гомогенатов роговиц течение всего эксперимента (14сут) оставалась в пределах контрольных значений.130Таким образом, непосредственно после УФ воздействия на роговицуотмечалиувеличениеобразованияпродуктовПОЛ,реагирующихстиобарбитуровой кислотой.
В сроки 1-14 сут значения ТБК-рп постепенноснижались до уровня интактных животных. При этом выявлен менее значимыйрост содержания ТБК-рп в супернатантах гомогенатов роговиц после УФоблучения с рибофлавином. Последний при этом, оказывая УФ-протекторныйэффект,способствовалменеевыраженнойактивациипроцессовСРО.Незначительный характер повреждающего воздействия деэпителизации роговицысущественного воздействия на состояние свободно-радикального окисления неоказывал.4.3.Влияниеультрафиолетовогооблученияроговицыкрыссрастворами рибофлавина на процессы свободно-радикального окисления втканях глазного яблокаПри изучении ХЛ образцов глазного яблока крыс после УФ воздействия нароговицу глаза установлено, что спонтанная светимость, также как и приисследовании роговичных гомогенатов, уже через 1 ч на 77% (р<0,05) достовернопревышала уровень контроля, демонстрируя, в последующее сроки наблюдения,характерное снижение практически до уровня интактных животных.
Причем через 1сут после УФ воздействия сохранялось статистически значимое отличие от нормы(Таблица 21).УФ-рибофлавин-ассоциированное сшивание роговицы (группа 3) имелосхожую динамику спонтанной светимости – через 1 ч обнаруживалосьмаксимальное значение показателя на 57% (р<0,05), превышающее данныеконтроля, с последующим (на 14-е сут) его снижением до уровня интактныхживотных.
В группе 4, где животным производили только деэпителизациюроговицы, отмечали незначительную разницу 14-дневной динамики спонтаннойсветимости хемилюминесценции в сравнении с контролем, находящуюся впределах статистической погрешности.131Таблица 21 - Показатели железоиндуцированной хемилюминесценциисупернатантов гомогенатов глазного яблока крыс после УФ облучения роговицыи деэпителизации (усл.ед., M±σ)ИнтактныеУФО безУФО +ДеэпителизацияПоказаСрок(контроль) рибофлавина рибофлавинбез УФОтель наблюдения1 группа2 группа3 группа4 группа0,99±0,08*0,88±0,130,70±0,110,89±0,07*0,71±0,080,72±0,080,73±0,110,73±0,100,60±0,117 сут0,60±0,120,81±0,150,77±0,0914 сут0,71±0,100,50±0,080,54±0,141ч2,20±0,13*2,08±0,301,55±0,191 сут2,09±0,181,83±0,421,68±0,221,80±0,211,67±0,141,58±0,257 сут1,41±0,201,49±0,191,79±0,3214 сут1,30±0,311,71±0,251,52±0,291ч10,81±0,91*9,62±0,81*7,21±0,921 сут9,72±0,52*8,90±2,616,92±1,308,15±1,277,58±1,747,07±1,747 сут7,37±1,927,45±0,966,02±1,1214 сут7,09±1,316,12±1,086,25±1,26СветосуммаАмплитудамедленнойвспышкиСпонтаннаясветимость1ч1 сут4 сут4 сут4 сут0,56±0,061,45±0,125,5±0,3* р<0,05– достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.Величинаамплитудымедленнойвспышкизначимоувеличиваласьнепосредственно после УФ обработки глаза – на 51% (р<0,05), а при облучении вприсутствии раствора рибофлавина на 43% (р<0,05).
И в том, и в другом случае, впоследующий период наблюдений обнаруживали постепенное приближениепоказателя к исходной норме, что отчетливо определялось на 4-7 сутэксперимента (Рисунок 17). В 4-ой группе животных, где производилась132деэпителизация роговицы без облучения, величина амплитуды медленнойвспышки не имела значимых отличий с интактным показателями.Анализ параметров ХЛ гомогенатов тканей глаза крысы показал, что послеУФ облучения роговицы без рибофлавина во 2-ой группе и УФ сшивания срибофлавином в 3-й группе, значения светосуммы имели максимальные значениячерез 1 ч после процедуры, превышая норму на 96% (р<0,05) и 75% (р<0,05),соответственно, что указывает на активацию ультрафиолетом процессов ПОЛ.250%200**Спонтанная светимостьАмплитуда медленной вспышкиСветосумма**150**10050утибофл1УФчаО+срибофлУФ1сО+утрибофлУФ4сО+утрибофлУФ7сО+утрибофл14сутEpi-Off 1часEpi-Off 1сутEpi-Off 4сутEpi-Off 7сутEpi-Off 14сутУФО+рУФО14сут7сОУФУФО4сутут1сУФОас1чОУФИнтактные01Рисунок17-Показателижелезоиндуцированнойхемилюминесценциисупернатантов гомогенатов глазного яблока крыс после УФ облучения идеэпителизации роговицы (% к контролю).* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с интактным контролем.Дальнейшеенаблюдение(1-14сут)характеризовалосьтенденциейкнормализации исследуемого показателя.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
