Диссертация (1174186), страница 18
Текст из файла (страница 18)
Предел егопрочности составлял 7,6±0,9 Н, а модуль Юнга – 0,140±0,015 мПа (Рисунок 5).Зона максимума на графике УФ облученного материала в присутствии раствороврибофлавина примерно в 3 раза больше, чем у необработанной роговицы. Это91указывает на существенное увеличение прочности рибофлавин-УФ-сшитыхроговиц. Так, в группах 1-4 модуль Юнга достоверно повысился на 103-133%(р<0,01), а предельные значения прочности обработанного материала возросли в2,5-3 раза (р<0,01).P26**24**2220** 5**1816*14* 6712108634242∆002Декстралинк4Декстран6Риболинк8Рибофлавин10Хитолинк1214УФО116lИнтактныеРисунок 5 - Диаграмма растяжения свиных роговичных полос ex vivo после УФоблучения с использованием офтальмологических растворов для кросслинкинга.По оси абсцисс – относительное удлинение материала Δl (мм), по оси ординат –сила приложенной нагрузки P (Н).1 – интактные, 2 – УФО-хитолинк, 3 – УФО-рибофлавин, 4 – УФО-риболинк,5 – УФО-декстралинк, 6 – декстран, 7 – УФО.* р<0,05; ** р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с контролем.Повышение прочности роговицы при использовании средства Декстралинк(группа 2) в условиях УФ облучения, как и в группах, где применялись другие92растворы с рибофлавином, связано с межфибриллярными сшивками коллагена.На рисунке 5 график растяжения роговичных полос, обработанных УФДекстралинком, также как и в предыдущей серии эксперимента с роговичнымидисками, прерывался сразу по достижению своего максимума (21,3±2,9 Н,р<0,01).
Причем в этом случае более существенное обезвоживание роговичныхполос по сравнению с целыми дисками роговиц приводило к увеличению пределапрочности материала на 21%. Следовательно, дегидратация стромы роговицыспособствовала дополнительному увеличению жесткости материала, приводящегок его преждевременному разрыву.Такая же особенность характерна для роговичных полос, выдержанных врастворе декстрана, при этом выявлялся рост жесткости корнеальных полостолько за счет его дегидратации – модуль Юнга достоверно превышал значениянормы на 73% (р<0,05), а предел прочности на 77% (р<0,05).УФ облучение роговичных полос без рибофлавина (группа 5) такжеспособствовало увеличению модуля продольной упругости Юнга на 54% (р<0,05),а прочностные свойства материала возросли на 86% (р<0,05).
Если сравниватьабсолютные значения экспериментальных данных, полученных при исследованиироговичных полос и идентичных по размерам лоскутов из роговичных дисков, тообнаружится, что последние демонстрировали более значимые результатыбиомеханической прочности. Это может быть связано с тем, что УФ сшивки,образующиеся в роговичных дисках, формировались в ткани с сохраненнойколлагеновой структурой, тогда как в полосах она изначально была нарушена.Очевидно,чторостпараметровкорнеальнойбиомеханикипослеУФкросслинкинга коррелирует с разнообразными изменениями ультраструктурыроговицы (Бикбов М.М.
и соавт., 2015).Таким образом, ультрафиолетовое облучение свиных роговиц (дисков иполос) в присутствии исследуемых растворов рибофлавина (Декстралинк,Риболинк, Хитолинк) вызывало статистически значимое повышение прочностномеханических свойств корнеальной ткани, связанное фотополимеризациейколлагеновых волокон стромы. Рибофлавин-УФ-сшитые роговичные лоскуты93(диски и полосы) демонстрировали выраженное увеличение модуля Юнга – от103% до 221% и повышение предела прочности – от 146% до 246%. При этом,рибофлавинсодержащие препараты не показали существенных различий междусобой по исследуемым критериям.
Использование средства Декстралинкспособствовалоснижениюдегидратации.Этоэластичныхособенностьсвойствпрепарата,материаласвязаннаязассчетегообратимымобезвоживающим действием декстрана, нашла свое подтверждение в группе, гденаблюдалось увеличение жесткости лоскутов роговиц, обработанных толькополимером. Ультрафиолетовое воздействие на роговицу без рибофлавина неприводило к выраженному повышению ее биомеханических свойств.3.4.
Уровень рибофлавина в свиной роговице ex vivo после насыщенияофтальмологическими растворами для УФ сшиванияСтабильная интрастромальная концентрация рибофлавина обеспечиваетнеобходимуюзащитуглублежащихслоевроговицы,ееэндотелияивнутриглазных структур от негативного воздействия УФ облучения. Кроме этогодостаточноепропитываниестромыфотосенсибилизаторомспособногарантировать качественное УФ сшивание роговицы.Для оценки эффективности насыщения роговицы рибофлавином намипроведено количественное определение его корнеального содержания послеинстилляций офтальмологических растворов в 4-х группах: 1 – изоосмотичный0,1% рибофлавин (контроль), 2 – Декстралинк (группа сравнения), 3 – Риболинк,4 – Хитолинк.Исследования проведены на 36 свиных роговицах ex vivo.
С поверхностироговицы глаза удаляли эпителий на участке диаметром 9 мм. Глазное яблокопомещали на подставку вогнутым сферическим основанием такого же размера,что способствовало поддержанию формы глаза и внутриглазного давления.Закапывания растворов на роговичную поверхность производили из расчета:рибофлавин (1 группа) – 1 раз / мин; Декстралинк, Риболинк и Хитолинк – 1 раз /2 мин.
Частота инстилляций была обусловлена стабильностью прекорнеальной94пленки, образуемой при использовании указанных средств. По завершенииинстилляций в интервалы времени 1, 5, 15, 30, 45 и 60 мин из глазного яблокавыкраивалироговичныйлоскут,которыйзамораживали.Затемпослеразмораживания и гомогенизации ткани проводили спектрофотометрическоеопределение содержания рибофлавина в роговице.Динамика концентрации рибофлавина в свиной роговице Epi-off за весьпериод наблюдений характеризовалась непрерывным увеличением содержанияфотосенсибилизатора в исследуемых группах.С первых минут насыщения изоосмотический рибофлавин активнопроникал в строму роговицы и в последующем сохранял устойчивую тенденциюк росту в течение 60 мин наблюдений.
В виду высокой биодоступностиизоосмотичный рибофлавин уже через 1 мин демонстрировал наибольшеезначение в сравнении с другими растворами (Таблица 10).Таблица 10 - Концентрация рибофлавина в свиной роговице ex vivo посленасыщения офтальмологическими растворами для УФ сшивания (мг/г, M±σ)Времянасыщения(мин)Растворы с 0,1% рибофлавиномРибофлавин(контроль)1 группаДекстралинкРиболинкХитолинк2 группа3 группа4 группа10,0041±0,00080,0025±0,00070,0033±0,00080,0034±0,000450,0140±0,00100,0076±0,00080,0190±0,0011*▲0,0083±0,0019150,0234±0,0018 0,0118±0,0016*0,0240±0,0035▲0,0192±0,0026300,0246±0,0027 0,0142±0,0022* 0,0330±0,0021*▲ 0,0276±0,0027▲450,0304±0,0018 0,0188±0,0023* 0,0475± 0,0037*▲ 0,0327±0,0023▲600,0451±0,0035 0,0228±0,0031* 0,0556±0,0030*▲ 0,0441±0,0025▲* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲р<0,05 – достоверность различий при сравнении с группой 2.95За период инстилляций в течение 30 мин, когда роговица считается насыщенной иготова к УФ облучению, интрастромальная концентрация фотосенсибилизатора втканях роговицы (группа 1) составляла 0,024 – 0,025 мг/г.Уровень рибофлавина при использовании препарата Декстралинк такжестабильно возрастал в течение всего срока наблюдений (Рисунок 6).
Однако приэтом, в период 15-60 мин количественное содержание рибофлавина в роговицебыло меньше по сравнению с контролем (1 группа) в 1,5-2 раза (р<0,05). Так на 30мин концентрация витамина В2 была на 42% ниже контроля (р<0,05). Выявленнаяразница уровней рибофлавина в роговице (группы 1 и 2) сохранялась до концасрока наблюдений, что, очевидно, связано с влиянием обезвоживающего действиядекстрана в составе средства Декстралинк.0.060мг/г*▲0.0500.048*▲0.056▲0.0450.0440.040*▲0.0330.033▲0.030▲0.0300.028*0.024*▲0.020▲0.0230.0190.0190.014**0.025*0.0230.0190.0140.0120.0100.0080.0080.00015Рибофлавин (контроль)15Декстралинк3045Хитолинк60минРиболинкРисунок 6 - Динамика уровня рибофлавина (мг/г) в свиной роговице ex vivo посленасыщения офтальмологическими растворами для УФ сшивания.* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲р<0,05 – достоверность различий при сравнении с группой Декстралинк.96Использование препарата Риболинк для корнеального насыщения с 5-й миндемонстрировало наибольшие значения уровня рибофлавина относительноконтроля, растворов Декстралинк и Хитолинк.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
