Диссертация (1174186), страница 20
Текст из файла (страница 20)
На 10-20 мин концентрация рибофлавина вгруппе Д-9 была достоверно выше (277,5-355 мкг/л), чем в группах Д-3 и -6(соответственно 100-190 и 135-195 мкг/л, р<0,05).Насыщение роговицы средством Риболинк на протяжении всего сроканаблюдений обеспечивало стабильный рост содержания рибофлавина во ВПКс максимумом концентрации в группах также через 50-60 мин от началаинстилляций (Рисунок 8).
Установлено достоверное различие в уровняхвитамина В2 в зависимости от площади удаленного эпителия. Так, через 5 мининстилляций содержание фотосенсибилизатора во ВПК в группе Р-9 в 3,5 разапревышало таковую в группе Р-3 (соответственно 545±37,5 мкг/л и 155±8,2мкг/л, р<0,01) и в 1,5 раза – в группе Р-6 (370±19,9 мкг/л, р<0,05).
Начиная с10 мин и во все последующие сроки наблюдения отмечали достоверно болеенизкий (р<0,05) уровень рибофлавина в переднекамерной влаге в группе Р-3по сравнению с таковым в группах Р-6 и Р-9. На 50-60 мин концентрациирибофлавина во влаге передней камеры глаза при инстилляциях препаратаРиболинк превышали показатели группы ИР при всех размерах зоныдеэпителизации.104мкг/л▲750▲▲■▲▲650■■■550▲■450▲▲■■▲▲▲▲■▲▲■■■▲■▲▲▲*▲**■350■▲*▲▲**250150**♦*****♦505102030405060минИР-3ИР-6Д-3Д-6Р-3Р-6Х-3Х-6ИР-9Д-9Р-9Х-9Рисунок 8 - Динамика уровня рибофлавина во влаге передней камеры кроликов взависимости от площади деэпителизации (3, 6, 9 мм) и вида используемогораствора для УФ сшивания роговицы (ИР – изоосмотический рибофлавин, Д –Декстралинк, Р – Риболинк, Х – Хитолинк). По оси абсцисс: время наблюдения(мин), по оси ординат: концентрация рибофлавина (мкг/л).* р<0,05; ♦ р<0,01– достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲ р<0,05; ■ р<0,01 – достоверность различий при сравнении с показателями Декстралинк.105Кинетическая кривая содержания рибофлавина во ВПК при использованиипрепарата Хитолинк была аналогична значениям контрольного раствора ИР иРиболинк.
Причем характерным является примерное соответствие уровнейфотосенсибилизатора во ВПК между группами ИР, Р и Х в зависимости отпараметров деэпителизации. При этом статистически значимых межгрупповыхразличий не установлено. Однако, создаваемая концентрация рибофлавина воВПК в группе Х-3 на 10-60 мин превышала таковую в группах Д-3 и Д-6 всреднем на 20% (р<0,05).Проведенный сравнительный анализ содержания рибофлавина во ВПК глазакролика in vivo после стандартного насыщения роговицы офтальмологическимирастворами для УФ сшивания показал меньшую способность к пенетрациидействующего вещества при использовании раствора Декстралинк.
Уже на 5-оймин исследования концентрация витамина В2 во всех случаях была достовернониже в 2-3,5 раза (р<0,05-0,01) относительно групп ИР, Р и Х (Рисунок 8). Итолько через 40-50 мин от начала инстилляций уровень рибофлавина прииспользованииисследуемыхрастворасредств,Декстралинкчтоприближалсяполностьюксогласуетсязначениямсдругихнаблюдениями,представленными в разделах 3.4.
и 3.5.На 30-ой мин исследования, когда роговица после насыщения испытуемымирастворами считается готовой к УФ облучению, нами был установлен диапазонконцентраций рибофлавина во ВПК – от 385±26,1 (Д-9) до 665±28 мкг/л (Р-9). Вэтихжепределах,ноужес20-оймин,регистрировалсяуровеньфотосенсибилизатора в группах ИР-9, Х-9, ИР-6, Р-6 и Х-6, а также ИР-3, Р-3 и Х3 (Рисунок 8).Однако приемлемое, на первый взгляд, содержание рибофлавина во ВПКили роговице, тем не менее, не может гарантировать выполнение качественного ибезопасного УФ сшивания, поскольку площадь удаленного эпителия образует встроме такую же по размерам ограниченную зону, пропитанную рибофлавином(Рисунок 9).1061234Рисунок 9 - Зона роговицы кролика, пропитанная рибофлавином (отмеченострелкой), после 30 мин инстилляций раствора Риболинк (0,1% рибофлавин с1,0%гидроксипропилметилцеллюлозой)взависимостиотплощадидеэпителизации: 1, 2 – 9 мм; 3, 4 – 3 мм.Следовательно, чем меньше участок деэпителизации, тем меньше размероптимальнонасыщенногои,соответственно,наиболеезащищенногопространства роговицы, которая на следующем этапе сшивания подвергаетсяУФ воздействию (примерно на 8-10 мм диаметра роговицы).Таким образом, эффективное насыщение стромы рибофлавином можетбыть обеспечено только за счет оптимальной площади деэпителизациироговицы – не менее 9 мм.
Наиболее быстрое и значимое пропитывание стромыфотосенсибилизатором в течение 60 мин наблюдений обеспечивал препаратРиболинк, которому незначительно уступали Хитолинк и изоосмотический107рибофлавин. Действие раствора Декстралинк сопровождалось уменьшениемтолщины роговицы и снижением интрастромальной диффузии рибофлавина.3.7. Влияние офтальмологических растворов для УФ сшиванияроговицынаультрафиолетовуюабсорбциюсистемы«роговица–рибофлавин»На величину корнеальной УФ абсорбции от постоянного источника УФизлучения влияет, прежде всего, толщина роговицы и ее прозрачность, которая,очевидно, может изменяться в зависимости от количества рибофлавина,диффундировавшегофотосенсибилизатора.встромуПриэтом,врезультатеинстилляцийинтенсивностьрастворакорнеальногоEpi-Offнасыщения рибофлавином может быть обусловлена тремя причинами: вопервых, продолжительностью контакта раствора с роговицей; во-вторых,концентрацией закапываемого раствора и частотой его инстилляций и, втретьих, от площади деэпителизированного участка.
Из этого следует, чтостепень УФ поглощения роговицы, пропитанной рибофлавином, позволяетобозначить безопасные критериимощностиУФ облученияглаза дляроговичного эндотелия и интраокулярных тканей, при проведении процедурыкросслинкинга.Наблюдения проведены ex vivo на 40 свиных роговицах в 4-х группах: вгруппе 1 (контроль) для насыщения использовали изоосмотичный 0,1%рибофлавин, в группе 2 (контроль) – Декстралинк, в группах 3 и 4 – Риболинк иХитолинк,соответственно.РегистрациюпоказанийсУФ-радиометрапроизводили через 1, 5, 10, 15, 20, 25, 30 мин после завершения инстилляций иудаления излишков офтальмологического раствора с поверхности роговицы.Средняя толщина роговиц после удаления эпителия составила 1,18±0,06 мм.Использовали мощность УФ воздействия 3 и 5 мВт/см2.УФ излучение мощностью 3 мВт/см2 после абсорбции в слояхдеэпителизированнойсвинойроговицыбезнасыщениярибофлавиномснизилось в среднем на 79% (Таблица 14).
При направленном окулярномвоздействииультрафиолетадоэндотелиальногослоянеобработанной108рибофлавином роговицы указанной толщины проникает до 0,63±0,02 мВт/см2(около 20%) мощности светового потока.Таблица 14 - Остаточная мощность УФ-излучения после абсорбции системой«роговица –рибофлавин» при использовании офтальмологических растворов длясшивания свиной роговицы ex vivo (мВт/см2, M±σ)Растворы с 0,1% рибофлавиномИзоосмотическийДекстралинкРиболинкХитолинкгруппа 1группа 2группа 3группа 41,16±0,051,22±0,031,17±0,021,18±0,04(контроль)Толщинароговицы(мм)ИсходноеУФ излучение 3,00±0,025,00±0,023,00±0,025,00±0,023,00±0,025,00±0,023,00±0,025,00±0,021,02±0,040,58±0,021,02±0,030,61±0,031,08±0,040,58±0,021,03±0,030,56±0,050,42±0,030,64±0,030,36±0,030,64±0,040,33±0,030,62±0,030,11±0,020,21±0,040,34±0,04* 0,42±0,05* 0,18±0,03▲0,33±0,030,20±0,040,38±0,02*10 0,06±0,010,12±0,020,26±0,02* 0,32±0,01* 0,10±0,01▲ 0,21±0,01▲ 0,09±0,01▲ 0,20±0,01▲(мВт/см2)Время насыщения роговицы(мин)Роговица без0,63±0,02насыщения1 0,31±0,03515 0,018±0,005 0,045±0,005 0,23±0,005 0,29±0,01* 0,07±0,002*▲0,10±0,003*▲ 0,06±0,002*▲0,12±0,004*▲20 0,006±0,001 0,022±0,005 0,20±0,004* 0,24±0,008* 0,03±0,001*▲ 0,08±0,001*▲ 0,04±0,001*▲0,09±0,002*▲25 0,004±0,001 0,010±0,002 0,16±0,002* 0,21±0,009* 0,015±0,001▲0,03±0,002*▲ 0,02±0,001*▲ 0,04±0,003*▲30 0,002±0,001 0,007±0,001 0,06±0,002 0,10±0,007* 0,009±0,001▲0,012±0,002*▲0,008±0,001▲0,01±0,002*▲* р<0,05– достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲р<0,05 – достоверность различий при сравнении с показателями Декстралинк.Насыщение корнеальной стромы рибофлавином создает систему «роговицарибофлавин» (Р-Р) с возросшей степенью УФ абсорбции, препятствующуюпроникновению света.
Так, использование 0,1% изоосмотичного растворафотосенсибилизатора уже через 1 мин инстилляций уменьшало интенсивностьрегистрируемого УФ излучения в 2 раза, по сравнению с интактной Epi-Off109роговицей (без рибофлавина). А через 15 мин после закапываний препаратаданный показатель был в 35 раз ниже, относительно выходной УФ мощностинеобработанной рибофлавином оптической оболочки.Роговица, насыщенная средством Декстралинк, также демонстрироваласнижение интенсивности проникающего УФ излучения. Однако по данномукритерию Декстралинк уступал раствору изоосмотического рибофлавина (группа1): через 1 мин после насыщения роговицы остаточная УФ мощность была нижепоказателей контроля на 27,6%, через 15 мин – на 60,4%.Светоабсорбирующая способность роговицы, насыщенной препаратамиРиболинк и Хитолинк, в течение всего срока наблюдений была выше, чем прииспользовании средства Декстралинк, но незначительно уступала системе Р-Рпосле воздействия изоосмотичного раствора рибофлавина.
Параметры УФабсорбции системы Р-Р для средств Риболинк и Хитолинк между собойпрактическинеотличались.Так,после5-минутногонасыщенияфотосенсибилизатором интенсивность УФ света, проходящего через роговицу,пропитанную средством Риболинк, была ниже исходной на 70%, препаратомХитолинк – на 65,5%. В последующем в течение всего эксперимента по мереинтрастромальнойпенетрациирибофлавинатенденциякснижениюпроникновения УФ света через роговицу в обеих группах сохранялась (Таблица14).Таким образом, проведенные исследования УФ абсорбции свиных роговиц срибофлавином показали, что наиболее выраженный светопоглощающий эффектобеспечивал изоосмотический раствор рибофлавина, которому незначительноуступали средство Риболинк и Хитолинк.
Однако результаты не имели значимыхотличий. Эффект, оказываемый раствором Декстралинк, был наименьшим,вероятно, за счет снижения толщины роговицы и, соответственно, уменьшения еесветоабсорбирующих свойств. Вместе с тем, через 30 мин инстилляций УФпропускающая способность системы роговица – рибофлавин во всех исследуемыхгруппах находилась в пределах от 0,002±0,001 до 0,06±0,002 мВт/см2, что110значительно меньше порога повреждающего действия ультрафиолета дляэндотелия роговицы (Spoerl E. et al., 2011).С целью оценки проникающей способности повышенных доз УФ излученияисоответствияраствороврибофлавинакритериямбезопасностидлявнутриглазных структур нами исследована мощность 5 мВт/см2. Увеличение силыУФ облучения до 5 мВт/см2 приводит к росту интенсивности проходящего черезкорнеальные слои светового потока (рис 10).
Так, для интактной роговицы онсоставляет 1,02±0,04 мВт/см2, по отношению к которой через 1 мин насыщенияизоосмотическим рибофлавином регистрировалось снижение излучения на 45,1%,через 15 мин – на 95,6% (Таблица 14).мВт/см20.8*0.6***▲▲*▲0.201Рибофлавин5*▲▲0.4*10Риболинк15Хитолинк**▲*▲20**▲*▲25*▲*▲30 м и нДекстралинкРисунок 10 - Остаточная мощность УФ-излучения (мВт/см2) после абсорбциисистемой «роговица – рибофлавин» при использовании офтальмологическихрастворов для сшивания свиной роговицы ex vivo и облучении 5 мВт/см2.* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲р<0,05 – достоверность различий при сравнении с показателями Декстралинк111Применение исследуемых средств для насыщения в условиях повышенноймощности излучения (5 мВт/см2) демонстрирует аналогичное снижениеинтенсивностиультрафиолета(15мин),чтоивпредыдущейсерииэкспериментов – для Декстралинка на 50%, для Риболинка и Хитолинка на90,2% и 88,4%, соответственно.
В течение всего срока наблюдений прииспользовании повышенной УФ мощности сохранялась сходная динамикаснижения абсорбционной способности роговицы, что и при стандартномоблучении (3 мВт/см2). При этом показатели средства Декстралинк уступалитаковым относительно исследуемых препаратов. Через 30 мин остаточнаявеличина ультрафиолета в группах составляла от 0,007±0,001 мВт/см2 (вконтроле) до 0,10±0,007 мВт/см2 (Декстралинк), что ниже повреждающегопорога для эндотелия роговицы 0,35 мВт/см2 (Spoerl E. et al., 2011).Такимобразом,наблюдаемаядинамикакорнеальногонасыщениярибофлавинсодержащими растворами (изоосмотический, Риболинк и Хитолинк)демонстрирует увеличение УФ абсорбции системой «роговица – рибофлавин».Обезвоживание,обработаннойДекстралинкомроговицы,способствуетснижению ее светопоглощающих свойств, вероятно, связанное с уменьшениемкорнеального объема и толщины.3.8.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
